關(guān)鍵詞：白桫欏；綠色球狀體；孢子體；不完全組織培養(yǎng)；離體快繁

白桫欏（Sphaeropterisbrunoniana）隸屬桫欏科（Cyatheaceae）白桫欏屬（Sphaeropteris），是樹形蕨類植物，莖干筆直高大，葉片三回羽狀深裂，葉柄禾稈色，常被白粉，每裂片有孢子囊群7～9對(duì)，位于葉緣與主脈間，無(wú)囊群蓋［1］。白桫欏作為國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物，主要分布在我國(guó)的海南、云南、西藏等地，位于海拔500～1150m的常綠闊葉林緣及山溝谷底［2］。因其孑遺性物種的地位和葉形奇特、樹姿優(yōu)美的外形特征，具有重要的觀賞、科研和保護(hù)價(jià)值。

作為蕨類植物的白桫欏，其生殖方式較其它陸生植物的重要區(qū)別在于具有獨(dú)立的配子體和孢子體世代。配子體世代即單倍體世代，由孢子發(fā)育成初期配子體，配子體繼續(xù)生長(zhǎng)為成熟原葉體且具有精子器和頸卵器，精子和卵細(xì)胞會(huì)進(jìn)行受精作用。從受精卵開始進(jìn)入孢子體世代（二倍體世代），通過有絲分裂從幼孢子體逐步發(fā)育為帶有孢子囊的成熟孢子體，至此2個(gè)世代相互交替組成1個(gè)循環(huán)體系［3-4］。蕨類植物的配子體微小，精子是單細(xì)胞、無(wú)保護(hù)的游動(dòng)個(gè)體，需在自然水中游動(dòng)進(jìn)入頸卵器，因此其生殖過程極易受到環(huán)境的影響，孢子從萌發(fā)到下一代孢子體長(zhǎng)成約需1年，極大程度上影響其分布和種群更新［5］。因此，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行白桫欏的批量生產(chǎn)成為解決目前種群資源問題的有效途徑之一。

關(guān)于白桫欏人工繁殖方面的研究?jī)H見于部分報(bào)道。蔣勝軍等［6］發(fā)現(xiàn)赤霉素預(yù)處理孢子囊以及添加低濃度萘乙酸（NAA）、激動(dòng)素、芐氨基腺嘌呤（BA）有利于縮短孢子萌發(fā)時(shí)間。陳貴菊等［7］研究表明，培養(yǎng)于腐殖質(zhì)土和赤紅土基質(zhì)的配子體的形態(tài)發(fā)育及有性繁殖存在差異，光照條件差異對(duì)配子體形態(tài)也存在影響。王紫娟等［8］探究了不同培養(yǎng)基對(duì)白桫欏孢子萌發(fā)和配子體的發(fā)育的影響，認(rèn)為1/8MS最有利于孢子萌發(fā)和發(fā)育，即高鹽濃度的培養(yǎng)基不適合白桫欏孢子的人工擴(kuò)繁。目前，關(guān)于白桫欏組織培養(yǎng)仍停留在孢子萌發(fā)和配子體發(fā)育階段，對(duì)于配子體增殖、孢子體誘導(dǎo)分化研究較為少見。為解決孢子體形成的分化時(shí)間長(zhǎng)、誘導(dǎo)率低，易污染死亡等問題，Knauss［9］提出不完全組織培養(yǎng)法（partialtissueculturemethod），通過將原葉體團(tuán)與1/2MS液體培養(yǎng)基混合攪切，所得混合液加入固體培養(yǎng)基或直接倒入滅菌后的基質(zhì)中誘導(dǎo)孢子體形成。此法不僅提高了銀粉背蕨（Cheilanthesargentea）、瘤蕨（Phymatosorusscolo?pendria）、有柄石韋（Pyrrosiapetiolosa）、金毛狗脊（Cibotiumbarometz）等蕨類植物的原葉體增殖率，且加速孢子體的馴化，有利于幼孢子體苗的成活，但Kodym等［10］發(fā)現(xiàn)食蕨（Pteridiumesculentum）的配子體勻漿并不能產(chǎn)生孢子體，這可能跟不同蕨類植物的孢子體形成特性有關(guān)。由此可知，不完全組織培養(yǎng)在蕨類植物繁殖應(yīng)用上具有可行性。

本試驗(yàn)以白桫欏為試材，通過孢子無(wú)菌培養(yǎng)與孢子體常規(guī)誘導(dǎo)相結(jié)合的不完全組織培養(yǎng)方式，探究孢子萌發(fā)最適培養(yǎng)基、原葉體綠色球狀體（GGB）誘導(dǎo)增殖配方、孢子體轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)基質(zhì)，完善白桫欏快速繁殖體系，為其規(guī)?；缣峁┘夹g(shù)支撐。

1材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料有白桫欏孢子、原葉體、原葉體綠色球狀體（GGB）。白桫欏的孢子采集于海南島吊羅山（18°43'～18°58'N，109°03'～110°43'E）。選擇成熟但未裂開的孢子囊的葉片，放到干凈紙袋中，在自然通風(fēng)條件下晾干，將孢子囊自然開裂產(chǎn)生的孢子過篩，收集于離心管內(nèi)，并放于4℃冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 孢子的消毒處理

于2mL經(jīng)高壓滅菌的EP離心管中加入0.25mL左右的白桫欏孢子，加入無(wú)菌水，充分振蕩，靜置3h；無(wú)菌水清洗，離心機(jī)4000r·min-1離心1min，重復(fù)3次；加入75%酒精震蕩20s進(jìn)行消毒處理，無(wú)菌水清洗3次；再加入4%～5%NaClO溶液，震蕩加離心4min，無(wú)菌水清洗4次，最后加入無(wú)菌水制成孢子懸濁液。

1.2.2 孢子的無(wú)菌萌發(fā)

設(shè)置1/2MS、1/5MS、1/10MS以及WPM共4種培養(yǎng)基，pH5.8，卡拉膠濃度11g·L-1，經(jīng)121℃高壓滅菌鍋滅菌20min后分裝至直徑6cm培養(yǎng)皿中。用移液槍將經(jīng)過滅菌處理的孢子懸濁液搖勻后接種在培養(yǎng)皿中，每處理10皿，每皿接種0.2mL，重復(fù)3次，用封口膜封口。先遮光處理24h，以促進(jìn)孢子同步萌發(fā)。培養(yǎng)條件為（23±2）℃，光照強(qiáng)度15～20μmol·m-2·s-1，光周期12h。在日光燈下，以肉眼可見綠色小點(diǎn)時(shí)判斷為孢子萌發(fā)。接種30d后采用光學(xué)顯微鏡，隨機(jī)選取10個(gè)顯微視野，統(tǒng)計(jì)孢子總數(shù)和萌發(fā)的孢子數(shù)，接種60d后觀察其生長(zhǎng)形態(tài)。

孢子萌發(fā)率=（視野中萌發(fā)孢子數(shù)/視野中孢子總

1.2.3 GGB誘導(dǎo)

將萌發(fā)生長(zhǎng)的原葉體轉(zhuǎn)接至GGB誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)培養(yǎng)基配方，以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加6-芐氨基嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA），以不添加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為對(duì)照（CK），設(shè)置4種誘導(dǎo)培養(yǎng)基：（1）1/2MS+6-BA0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1；（2）1/2MS+6-BA0mg·L-1+NAA0.3mg·L-1；（3）1/2MS+6-BA0.1mg·L-1+NAA0.2mg·L-1；（4）1/2MS+6-BA0.2mg·L-1+NAA0.3mg·L-1。各培養(yǎng)基均加蔗糖30g·L-1，卡拉膠11g·L-1，pH5.8。每瓶接種原葉體8個(gè)，每個(gè)處理10瓶，重復(fù)3次。培養(yǎng)條件同1.2.2。60d后調(diào)查記錄GGB誘導(dǎo)情況，計(jì)算誘導(dǎo)率并觀察生長(zhǎng)狀態(tài)。

1.2.4 增殖培養(yǎng)試驗(yàn)

將前期預(yù)試驗(yàn)培育的原葉體團(tuán)轉(zhuǎn)入GGB增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方設(shè)計(jì)采用L16（43）正交，試驗(yàn)因素和水平見表1，以1/2MS為基本培養(yǎng)基，考慮6-BA、NAA、吲哚丁酸（IBA）3個(gè)試驗(yàn)因素，每一因素4個(gè)水平。各培養(yǎng)基均加蔗糖30g·L-1，卡拉膠11g·L-1，pH5.8。每瓶接種5塊直徑為0.7cm的GGB團(tuán)，每個(gè)處理10瓶，重復(fù)3次。培養(yǎng)條件同1.2.2。60d后測(cè)量其面積，計(jì)算增殖系數(shù)并觀察GGB生長(zhǎng)狀態(tài)。

以增殖獲得的GGB為材料，在1/2MS+0.1mg·L-1NAA配方基礎(chǔ)上，添加不同濃度的活性炭，分別為0、0.05、0.1、0.5mg·L-1，培養(yǎng)條件同1.2.2，60d后測(cè)量并計(jì)算增殖系數(shù)。

1.2.5 孢子體的誘導(dǎo)

基質(zhì)的常規(guī)誘導(dǎo)：設(shè)泥炭、河沙、椰糠、混合基質(zhì)（1泥炭∶1珍珠巖）、混合基質(zhì)（2泥炭∶1珍珠巖∶1椰糠）5種基質(zhì)，基質(zhì)分別過30目篩，121℃高壓蒸汽滅菌30min。選用72格規(guī)格為4cm×4cm的種植盤，用5%NaClO溶液消毒，填裝基質(zhì)至穴孔高度2/3，純凈水澆透。將增殖后的GGB清洗基部后種植于穴盤，每個(gè)處理移栽10團(tuán)1cm2綠色團(tuán)狀小球，3次重復(fù)，放入培養(yǎng)室，培養(yǎng)條件為12h周期性光照，光照強(qiáng)度15～20μmol·m-2·s-1，溫度15/25℃。每2d噴1次超純水，保持土壤濕潤(rùn)。記錄每種處理第一片孢子小葉片轉(zhuǎn)化的日期，即成功誘導(dǎo)日期，90d后統(tǒng)計(jì)其轉(zhuǎn)化率。

不完全組織培養(yǎng)：基于Knauss不完全組織培養(yǎng)法（原葉體團(tuán)攪切法），先量取10cm2增殖后的綠色團(tuán)狀小球，切碎至直徑大小為0.3～0.5cm，與1/2MS液體培養(yǎng)基以1∶20比例混合，將含原葉體碎片的混合液均勻播于裝有滅菌的泥炭∶珍珠巖（1∶1）基質(zhì)的種植盤上，每個(gè)處理10格，3次重復(fù)。播種后，定期噴灑超純水，統(tǒng)計(jì)時(shí)間同上。

1.2.6 孢子體移栽

待孢子體生長(zhǎng)出2～3片小葉后，移栽至泥炭∶珍珠巖（2∶1）的基質(zhì)中，每天噴霧并遮陰，觀察記錄存活情況。

1.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析方法

本文采用單因子試驗(yàn)和多因子正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。數(shù)據(jù)記錄、統(tǒng)計(jì)和繪圖采用Excel2015，使用SPSS22.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、差異顯著性檢驗(yàn)、方差分析及多重比較（LSD法）。

2結(jié)果與分析

2.1 不同基本培養(yǎng)基對(duì)白桫欏孢子萌發(fā)的影響

從表2可知，4個(gè)處理均可觀測(cè)到白桫欏孢子萌發(fā)現(xiàn)象，各處理間萌發(fā)率差異顯著。其中1/10MS培養(yǎng)基萌發(fā)最早，萌發(fā)時(shí)間為12d，平均萌發(fā)率也最高，為69.55%，與其它培養(yǎng)基差異顯著，而在1/2MS培養(yǎng)基上孢子萌發(fā)時(shí)間最長(zhǎng)（15d），萌發(fā)率最低（23.67%）。60d后均可觀測(cè)到孢子萌發(fā)后配子體發(fā)育的不同形態(tài)階段（圖1A～圖1G），在1/10MS培養(yǎng)基上仍保持在絲狀體階段（圖1D～圖1E），1/5MS和WPM培養(yǎng)基則為片狀體（圖1F），只1/2MS生長(zhǎng)到心形原葉體（圖1G）。通常情況下，1/2MS、1/5MS、1/10MS培養(yǎng)基分別代表MS培養(yǎng)基無(wú)機(jī)鹽水平為1/2、1/5和1/10，說明低濃度的無(wú)機(jī)鹽更利于白桫欏孢子的萌發(fā)，高濃度無(wú)機(jī)鹽則更促進(jìn)原葉體生長(zhǎng)。

2.2 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)白桫欏GGB誘導(dǎo)的影響

在對(duì)照及4個(gè)處理的培養(yǎng)基上可見心形原葉體由淺綠轉(zhuǎn)深綠產(chǎn)生類似蘭花原球莖的綠色球狀體GGB（圖1H）。由表3可知，各處理間GGB誘導(dǎo)差異顯著，其中處理1的GGB誘導(dǎo)率顯著高于其它處理，為92.22%，為其最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

2.3 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)白桫欏GGB增殖的影響

GGB增殖培養(yǎng)60d時(shí)統(tǒng)計(jì)其增殖系數(shù)，結(jié)果見表4、圖2和表5。表4結(jié)果表明，因素A、B、C不同水平處理結(jié)果存在顯著性差異。由圖2可見，在同因素不同水平增殖倍數(shù)對(duì)比中，因素A（6-BA濃度）為0mg·L-1時(shí)GGB平均增殖倍數(shù)同組最高且與其它水平差異性顯著；因素B（NAA濃度）的GGB平均增殖倍數(shù)會(huì)隨著水平濃度的升高呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，以濃度達(dá)到0.1mg·L-1為最高，0.5mg·L-1次之，二者皆顯著高于0mg·L-1濃度水平的增殖倍數(shù)；因素C（IBA濃度）濃度水平為0.05mg·L-1時(shí)GGB平均增殖倍數(shù)最高，且處理濃度在0～0.1mg·L-1間差異不顯著。

根據(jù)極差分析中R值可知（表5），不同因素對(duì)GGB增殖影響的主次關(guān)系排序?yàn)锳gt;Bgt;C，說明6-BA是影響GGB增殖的主要因子，其次是NAA，而IBA對(duì)增殖的影響較小。綜上分析可得，GGB增殖的最佳配方為1/2MS+NAA0.1～0.5mg·L-1+IBA0～0.1mg·L-1，平均增殖系數(shù)可達(dá)6.14。

2.4 活性炭對(duì)白桫欏GGB增殖的影響

從表6可知，不同水平濃度活性炭處理間的GGB基礎(chǔ)上，隨著活性炭濃度的升高，GGB平均增殖系數(shù)呈先逐漸上升的變化趨勢(shì)，當(dāng)活性炭濃度為1g·L-1時(shí)達(dá)到最高（7.84），較其它處理存在顯著性差異，說明活性炭的添加對(duì)于白桫欏GGB增殖的作用明顯。

2.5 不同基質(zhì)對(duì)白桫欏孢子體轉(zhuǎn)化的影響

結(jié)果顯示，基質(zhì)對(duì)孢子體誘導(dǎo)有顯著影響（表7）。以泥炭∶珍珠巖∶椰糠（2∶1∶1）基質(zhì)上孢子體形成時(shí)間最早，為42d；椰糠和泥炭∶珍珠巖（1∶1）基質(zhì)次之，分別為55d和57d；泥炭基質(zhì)的孢子體形成時(shí)間最晚，為64d；而河沙基質(zhì)無(wú)孢子體形成且移栽的綠色團(tuán)狀小球皆死亡（圖3B）。此外，不同基質(zhì)處理的孢子體轉(zhuǎn)化率有顯著差異。泥炭∶珍珠巖∶椰糠（2∶1∶1）基質(zhì)的孢子體轉(zhuǎn)化率最高，達(dá)43.33%，顯著高于泥炭和泥炭∶珍珠巖（1∶1）基質(zhì)；椰糠基質(zhì)的孢子體轉(zhuǎn)化率次之（36.67%），且與泥炭∶珍珠巖∶椰糠（2∶1∶1）基質(zhì)不存在顯著性差異。由上可知，GGB移栽的最佳誘導(dǎo)基質(zhì)為泥炭∶珍珠巖∶椰糠（2∶1∶1）。

另外，通過原葉體碎片與無(wú)機(jī)鹽溶液的混合播種，碎片在基質(zhì)上能成功再生成完整的心形原葉體并進(jìn)行快速的增殖，在播種后第32d成功誘導(dǎo)出第一株孢子體，繼續(xù)培養(yǎng)58d統(tǒng)計(jì)孢子體的轉(zhuǎn)化率，可達(dá)86.67%。

2.6 煉苗及移栽

將白桫欏幼孢子體從穴盤中移出，栽至裝有泥炭∶珍珠巖（2∶1）的基質(zhì)中（圖1K）。移栽過后30d，通過觀察，發(fā)現(xiàn)孢子體小葉能夠繼續(xù)生長(zhǎng)，并且伴隨新葉生出，即代表植株成活，最終統(tǒng)計(jì)成活率在95%，并于60d后將長(zhǎng)成的幼苗植株移栽成盆苗（圖1L）。

3討論

蕨類孢子擁有低成本、繁殖系數(shù)大和繁殖力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為組織培養(yǎng)的外植體材料［11-12］。此外，作為目前使用最普遍的培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基，其配方包含大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)成分，特點(diǎn)是含有較高的無(wú)機(jī)鹽與離子濃度，從MS～1/10MS指大量元素含量為MS培養(yǎng)基全量的1～1/10，是無(wú)機(jī)鹽濃度水平的體現(xiàn)。鑒于前人研究可知，不同蕨類植物孢子萌發(fā)所需的MS培養(yǎng)基無(wú)機(jī)鹽濃度不同，王陽(yáng)等［13］研究發(fā)現(xiàn)東北對(duì)開蕨（Phyllitisjaponica）孢子在培養(yǎng)基為1/4MS時(shí)萌發(fā)率最高，王曉倩等［14］發(fā)現(xiàn)闊鱗鱗毛蕨（Dryopterischampionii）孢子萌發(fā)最適培養(yǎng)基為1/2MS，杜金子等［15］研究表明在不含蔗糖的1/8MS培養(yǎng)基上最有利于石韋（Pyrrosialingua）孢子萌發(fā)。本研究顯示，白桫欏孢子萌發(fā)率會(huì)隨著無(wú)機(jī)鹽濃度降低而上升，高濃度無(wú)機(jī)鹽會(huì)抑制孢子的萌發(fā)。這與黑桫欏（Gymnosphaerapodophylla）、桫欏（Alsophilaspinulosa）、陰生桫欏（Alsophilalatebrosa）等［12，16-17］桫欏科植物實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象一致，即1/10MS培養(yǎng)基是最有利于孢子萌發(fā)的培養(yǎng)基。本研究發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中大量元素的含量較小即低鹽濃度時(shí)更加利于白桫欏孢子萌發(fā)，推測(cè)是因加入無(wú)機(jī)鹽使培養(yǎng)基的滲透勢(shì)較高，抑制了孢子外壁破裂以及假根和原葉體細(xì)胞的發(fā)育［18］。

培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)的主要營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，而植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和發(fā)育等一系列的生理變化和形態(tài)建成起著控制作用［19］。研究發(fā)現(xiàn)，蕨類植物發(fā)育過程中，通過調(diào)節(jié)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑可使原葉體增殖形成一種類似蘭花原球莖的特殊繁殖體——GGB，GGB可繼續(xù)增殖出新的團(tuán)狀小球，亦可發(fā)育成多個(gè)心形成熟原葉體，進(jìn)而形成孢子體或完整植株［20］，是重要的擴(kuò)繁材料。而研究學(xué)者也進(jìn)行了一系列對(duì)GGB途徑的組培研究，例如鹿角蕨（Platyceriumwallichii）、巢蕨（Aspleniumnidus）和金毛狗脊（CibotiumBarometz）等蕨類植物都能成功誘導(dǎo)出GGB并進(jìn)行組培快繁［19，21-22］。本研究結(jié)果表明，在GGB增殖正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)中，6-BA濃度是影響GGB增殖效率的主要因子，6-BA濃度越高越抑制GGB增殖，而NAA、IBA濃度次之，適宜濃度的NAA、IBA對(duì)GGB增殖起到良好的促進(jìn)作用，即以1/2MS為基本培養(yǎng)基，NAA適宜濃度為0.1～0.5mg·L-1，IBA適宜濃度為0～0.1mg·L-1，說明高濃度的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑會(huì)抑制白桫欏原葉體細(xì)胞分裂，低濃度生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑有利于GGB增殖。這與波士頓蕨（Nephro?lepisexaltata）和鹿角蕨（Platyceriumwallichii）在誘導(dǎo)GGB時(shí)的結(jié)果類似，處于低激素濃度的綠色原球莖長(zhǎng)勢(shì)旺盛，而高濃度情況下小球長(zhǎng)勢(shì)較差且布滿絨毛［23-24］。此外，活性炭濃度在組織培養(yǎng)中具有促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育、抑制褐化、提升瓶苗品質(zhì)的作用［25］。本研究中隨著活性炭濃度的增加，GGB的增殖作用越明顯，當(dāng)活性炭濃度為1.0g·L-1時(shí)，GGB增殖系數(shù)最大，表明活性炭能夠顯著提升植物組織的生命力，在一定程度上調(diào)節(jié)植物細(xì)胞生長(zhǎng)與分化［26］。

將配子體轉(zhuǎn)化成孢子體是蕨類植物繁殖技術(shù)的關(guān)鍵，水分、光照和基質(zhì)等因素都會(huì)影響孢子體的形成［22］。白桫欏幼孢子體生成是有性繁殖過程，精子需以水為載體，才能結(jié)合卵子形成孢子體，因此保持基質(zhì)潮濕和水分供給十分重要。本研究將GGB團(tuán)轉(zhuǎn)移至瓶外基質(zhì)培養(yǎng)，其中泥炭∶珍珠巖∶椰糠（2∶1∶1）混合基質(zhì)的孢子體轉(zhuǎn)化率最高，達(dá)43.33%，這是因?yàn)檎渲閹r能提高土壤的透氣性和透水性，椰糠基質(zhì)疏松，泥炭土擁有一定的貯水性，能夠較早誘導(dǎo)出孢子體，促進(jìn)幼孢子苗生長(zhǎng)［27］。而河沙基質(zhì)上GGB團(tuán)生長(zhǎng)情況最差，說明河沙水流動(dòng)性過強(qiáng)，不能供給GGB團(tuán)正常生長(zhǎng)所需水分。另外，采用Knauss不完全組織培養(yǎng)法能夠成功轉(zhuǎn)化出白桫欏孢子體幼苗，且第一株轉(zhuǎn)化時(shí)間較常規(guī)基質(zhì)誘導(dǎo)提早了10d，孢子體轉(zhuǎn)化率達(dá)到86.67%，說明了Knauss不完全組織培養(yǎng)法在白桫欏離體繁殖中的可行性，且1/2MS的添加能夠有力促進(jìn)破碎原葉體的再生以及增殖發(fā)育。

4結(jié)論

針對(duì)白桫欏的繁殖技術(shù)，本研究初步建立其不完全組織培養(yǎng)快速繁殖體系。白桫欏孢子誘導(dǎo)萌發(fā)最佳基質(zhì)為1/10MS，GGB增殖培養(yǎng)基以1/2MS+NAA0.1～0.5mg·L-1+IBA0～0.1mg·L-1較適宜，此外，添加活性炭也有利于GGB增殖，其中1/2MS+0.1mg·L-1NAA+1.0g·L-1活性炭增殖效果最好。因孢子體難以在組培過程中直接獲得，通過將GGB團(tuán)移栽至瓶外基質(zhì)中能成功誘導(dǎo)出孢子體，最適基質(zhì)為泥炭∶珍珠巖∶椰糠（2∶1∶1）；Knauss不完全組織培養(yǎng)法在白桫欏離體繁殖中的具有可行性，32d即能成功誘導(dǎo)出孢子體，孢子體轉(zhuǎn)化率高達(dá)86.67%。即本研究通過GGB途徑的高效增殖，結(jié)合孢子體轉(zhuǎn)化的設(shè)施栽培技術(shù)，有助于解決瓶?jī)?nèi)孢子體誘導(dǎo)率低下的問題，從而快速獲得大量的幼苗，為白桫欏規(guī)范化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。