摘 要： 本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)斷奶仔兔生長(zhǎng)性能、腹瀉情況、腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)、腸黏膜緊密連接蛋白和肝腸藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白基因表達(dá)的影響，探究二者聯(lián)用對(duì)提高中藥提取物生物利用度的效果。試驗(yàn)選取120只35日齡斷奶仔兔，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組設(shè)置10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3只兔。試驗(yàn)包括對(duì)照組（基礎(chǔ)飼糧）、蒲公英組（基礎(chǔ)飼糧添加0.5%蒲公英提取物）、木通組（基礎(chǔ)飼糧添加0.5%木通提取物）和蒲公英+木通組（基礎(chǔ)飼糧分別添加0.5%蒲公英和木通提取物）。試驗(yàn)時(shí)間為28 d。試驗(yàn)結(jié)果表明：1）第1周蒲公英組和木通組平均日增重顯著高于對(duì)照組（Plt;0.05），料重比顯著降低低于對(duì)照組（Plt;0.05）。2）蒲公英組仔兔空腸絨毛高度顯著高于木通組（Plt;0.05）。3）蒲公英+木通組空腸黏膜總黃酮含量顯著高于其它各組（Plt;0.05）。4）蒲公英+木通組閉合小環(huán)蛋白1（Z0-1）基因在回腸的相對(duì)表達(dá)量顯著高于蒲公英組和木通組（Plt;0.05）。5）木通組空腸多藥耐藥相關(guān)蛋白2（MRP-2）、有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽2B1（organic anion transporting polypeptide 2B1，OATP2B1）基因的相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05），蒲公英+木通組空腸OATP2B1基因相對(duì)表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05）；蒲公英組和木通組多藥耐藥相關(guān)蛋白3（multidrug resistance-associated protein 3，MRP3）基因在回腸的相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05）；蒲公英+木通組乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白（BCRP）、MRP3基因在肝的相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05），木通組和蒲公英+木通組OATP2B1基因在肝的相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05）。綜上所述，飼糧中分別添加蒲公英和木通提取物對(duì)斷奶仔兔的生長(zhǎng)性能有所改善，同時(shí)添加蒲公英和木通提取物能提高空腸組織總黃酮含量，飼糧中添加蒲公英和木通提取物能調(diào)節(jié)肝和腸黏膜組織中藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體基因表達(dá)水平。

關(guān)鍵詞： 蒲公英；木通；斷奶仔兔；生長(zhǎng)性能；腸道健康；總黃酮；藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體

中圖分類(lèi)號(hào)：S816.75

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：0366-6964（2024）08-3725-15

收稿日期：2023-09-01

基金項(xiàng)目：大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項(xiàng)目（S202110635182）

作者簡(jiǎn)介：陳 雨（2000-），女，重慶榮昌人，碩士生，主要從事單胃動(dòng)物腸道健康及免疫狀態(tài)研究，E-mail：1833823696@qq.com

通信作者：孫雅望，主要從事單胃動(dòng)物腸道健康及免疫狀態(tài)、反芻動(dòng)物乳腺健康及免疫狀態(tài)研究，E-mail：syaw507@swu.edu.cn

Effects of Dandelion and Akebia Extract on Growth Performance， Intestinal Health and

Relative Expression of Drug Transporter Genes Expression of in Weaned Rabbits

CHEN" Yu1， XIU" Ziqing1， MGENI Musa1， SHI" Yi1， ZHANG" Junqiu2， JIANG" Xiaoyu2， L Jingzhi

1， SUN" Yawang1*

（1.College of Animal Science and Technology， Southwest University， Chongqing 400715，" China;

2.College of Veterinary Medicine， Southwest University， Chongqing 400715，" China）

Abstract： The objective of this experiment was to investigate the effects of dietary supplemented with dandelion and akebia extract on growth performance， diarrhea， intestinal morphology and structure， total flavonoids in liver and intestine，intestinal mucosa tight junction protein gene expression，drug transporter gene expression in liver and intestine of weaned rabbits， and to explore whether the combination of dandelion and akebia extract can improve the bioavailability of Chinese medicine extract. A hundred and twenty 35-day-old weaned rabbits were randomly divided into 4 groups with 10 replicates per group and 3 rabbits per replicate. Four treatment groups were set up，groups including control group （basic diet）， dandelion group （basic diet +0.5% dandelion extract）， akebia group （basic diet +0.5% akebia extract）， and dandelion+akebia group （basic diet+0.5% dandelion extract+0.5% akebia extract）.The trial lasted for 28 days. The results were showed as follows： 1）At the first week of the experiment， compared with control group， the ADG in dandelion group and akebia group was significantly increased （Plt;0.05）， the value of F/G was significantly decreased （Plt;0.05）. 2） The villus height of jejunum in dandelion group was significantly higher than that in akebia group （Plt;0.05）. 3） The content of total flavonoids in jejunal mucosa of dandelion+akebia group was significantly higher than other groups （Plt;0.05）. 4） The relative expression level of zonula occluden 1（ZO-1） gene in ileum of group dandelion+akebia group was significantly higher than that of dandelion group and akebia group （Plt;0.05）. 5） The relative expression levels of multidrug resistance-associated protein 2（MRP2） and organic anion transporting polypeptide 2B1（OATP2B1） genes in jejunum of akebia group was significantly lower than those of control group （Plt;0.05）， and OATP2B1 gene the relative expression level of OATP2B1 in jejunum of dandelion+akebia group was significantly lower than control group （Plt;0.05）. The relative expression of multidrug resistance-associated protein 3（MRP3） gene in ileum of dandelion group and akebia group was significantly lower than control group （Plt;0.05）. The relative expression levels of breast cancer resistance protein（BCRP） and MRP3 genes in liver of dandelion+akebia group were significantly lower than those of the control group （Plt;0.05）， and the relative expression levels of OATP2B1 gene in liver of akebia group and dandelion+akebia group were significantly lower than control group （Plt;0.05）. In conclusion， dietary supplementation of dandelion or akebia extract can improve the growth performance of weaned rabbits， combined supplementation of dandelion and akebia extract can increase the total flavonoid content in jejunum mucosa， and dietary supplementation of dandelion and akebia extract can adjustregulate the expression levels of drug transporter genes in liver and intestinal mucosa of weaned rabbits.

Key words： dandelion; akebia; weaned rabbit; growth performance; intestinal health; total flavonoids; drug transporter

*Corresponding author： SUN Yawang，E-mail：syaw507@swu.edu.cn

家兔養(yǎng)殖業(yè)作為現(xiàn)代畜牧業(yè)的重要組成部分，近幾年發(fā)展迅速，2022年年產(chǎn)值已達(dá)到339.23億元，為相關(guān)產(chǎn)業(yè)帶來(lái)了較大的經(jīng)濟(jì)效益［1］。然而，家兔因患腹瀉病導(dǎo)致的死亡率偏高，一直是影響家兔養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要因素。家兔腹瀉的誘因分為病源因素（細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)等）和非病源因素（應(yīng)激、日糧纖維含量等）［2-3］。仔兔免疫功能尚未完善，斷奶應(yīng)激易導(dǎo)致仔兔腹瀉。我國(guó)對(duì)于家兔腹瀉的傳統(tǒng)防治手段以促生長(zhǎng)類(lèi)添加劑以及抗生素藥物為主。過(guò)量使用抗生素會(huì)引起不良反應(yīng)、產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性、導(dǎo)致資源浪費(fèi)等［4］，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求在2020年底前退出除中藥外的所有促生長(zhǎng)類(lèi)藥物飼料添加劑品種。因此，尋找能夠代替抗生素的天然植物提取物成為研究熱點(diǎn)。

蒲公英作為清熱解毒類(lèi)中草藥，其活性成分中的黃酮類(lèi)化合物、蒲公英甾醇、咖啡酸等物質(zhì)，能發(fā)揮抗菌消炎、抗應(yīng)激、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)效應(yīng)［5-8］，可以作為潛在的抗生素替代物［9］。研究表明，飼糧中添加蒲公英提取物可提高斷奶至3月齡生長(zhǎng)肉兔的生長(zhǎng)性能和免疫功能［10］。同時(shí)，飼糧中添加蒲公英干粉可提高肥育豬的日采食量和日增重，降低腹瀉率［11］。但由于蒲公英提取物成分復(fù)雜、作用機(jī)制不明確、活性成分的消化吸收率不高等原因，其生物利用度往往不高［12-13］。此外，蒲公英的有效成分吸收后在腸道分布較少，其藥理作用更主要地集中在肝或肺。本研究依托中藥引經(jīng)理論，擬探索讓蒲公英提取物的有效成分更多地在胃腸道發(fā)揮作用的方式。

引經(jīng)理論是中藥藥性理論的重要組成部分，指歸于某經(jīng)的引經(jīng)藥引導(dǎo)其他藥物入其經(jīng)，在其所屬的臟腑經(jīng)絡(luò)中發(fā)揮藥效［14］。故而歸經(jīng)是引經(jīng)的前提［15］。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為引經(jīng)藥可以引導(dǎo)中藥復(fù)方中的其他藥物進(jìn)入引經(jīng)藥所屬的經(jīng)絡(luò)或臟腑來(lái)提高藥效?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，引經(jīng)藥物如柴胡、冰片等，能夠促進(jìn)其他藥物的有效成分在機(jī)體靶部位的分布和吸收，從而提高藥方中其他藥物的生物利用度，改善臨床療效［16-18］，其作用機(jī)制包括影響藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的功能、打開(kāi)機(jī)體靶部位的生理性屏障、調(diào)節(jié)機(jī)體的生物化學(xué)物質(zhì)水平、調(diào)節(jié)靶組織pH等。其中溶質(zhì)載體超家族（solute carriers superfamily，SLC）可介導(dǎo)內(nèi)外源性物質(zhì)的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)；ATP-結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ATP-binding cassette transporter，ABC）家族可以調(diào)控藥物在體內(nèi)的分布，還可以作為多藥外排泵，使機(jī)體不受來(lái)自外源性有毒物質(zhì)的傷害［14，18］。

據(jù)《本草求真》記載，蒲公英入陽(yáng)明胃經(jīng)、厥陰肝經(jīng)，涼血解熱。即從中醫(yī)的角度來(lái)看，蒲公英歸屬于后肢陽(yáng)明胃經(jīng)和后肢厥陰肝經(jīng)。中藥瀉火藥木通則歸小腸經(jīng)，可瀉小腸火［19］，劉桂艷等［20］的研究表明，木通的主要活性成分包括三萜皂苷［21-22］等，具備抗菌消炎、抗腫瘤、利尿等藥理作用。基于中藥引經(jīng)理論，以木通作為潛在的腸引經(jīng)藥，將蒲公英提取物中的有效成分靶向性地運(yùn)輸且富集于小腸，從而有望達(dá)到靶向增效、提高蒲公英提取物生物利用度的目的。

前人對(duì)蒲公英作為飼料添加劑多有研究報(bào)道，但基于中藥引經(jīng)理論研究引經(jīng)藥對(duì)蒲公英有效成分的靶向增效作用則未見(jiàn)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)在斷奶仔兔日糧中加入蒲公英、木通提取物，旨在研究其是否通過(guò)改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)緊密連接蛋白相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)水平來(lái)增強(qiáng)腸道屏障功能；是否通過(guò)調(diào)節(jié)肝腸黏膜組織藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)水平和提高蒲公英有效成分總黃酮在靶器官的分布，來(lái)提高蒲公英提取物的生物利用度。同時(shí)探究木通、蒲公英兩種中藥材是否在促進(jìn)斷奶仔兔腸道健康方面存在協(xié)同作用，為解決實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中仔兔腹瀉致死的問(wèn)題提供思路。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)飼喂用的兩種提取物購(gòu)自南京道斯夫生物有限公司，其中蒲公英提取物的有效成分為黃酮類(lèi)化合物，含量為10%；木通提取物的有效成分為皂苷類(lèi)化合物，含量為7%。試驗(yàn)用兔購(gòu)自重慶阿興記，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理遵循西南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查委員會(huì)規(guī)定，試驗(yàn)許可編號(hào)為20210315。本試驗(yàn)所用的兔總黃酮ELISA試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物有限公司；總RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 試劑盒均購(gòu)自南京諾唯贊生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

選取120只體況相近、平均體重為（1.22±0.08）kg的35日齡斷奶仔兔，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組設(shè)置10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3只兔，每個(gè)重復(fù)為1籠。重復(fù)與重復(fù)之間設(shè)置1個(gè)空籠作為間隔。試驗(yàn)共設(shè)置4個(gè)組，即對(duì)照組（基礎(chǔ)飼糧）、蒲公英組（基礎(chǔ)飼糧添加0.5%蒲公英提取物）、木通組（基礎(chǔ)飼糧添加0.5%木通提取物）和蒲公英+木通組（基礎(chǔ)飼糧分別添加0.5%蒲公英和木通提取物）?；A(chǔ)飼糧成分見(jiàn)表1。

試驗(yàn)兔入場(chǎng)前，對(duì)兔場(chǎng)進(jìn)行徹底的掃除，用新潔爾滅消毒液、火焰槍對(duì)兔場(chǎng)和兔籠進(jìn)行消毒殺菌。本試驗(yàn)預(yù)飼期為7 d，試驗(yàn)期為28 d。預(yù)飼期飼喂基礎(chǔ)飼糧，為減少應(yīng)激對(duì)試驗(yàn)的影響，每只仔兔飼糧由50 g·d-1逐漸增加至100 g·d-1；試驗(yàn)期對(duì)4組仔兔分別飼喂對(duì)應(yīng)的飼糧，飼糧從每只100 g·d-1逐漸遞增。預(yù)飼期與試驗(yàn)期均自由飲水。試驗(yàn)全程以籠為單位每日記錄體重、采食量，分別于試驗(yàn)第0、7、14、21、28天對(duì)每個(gè)重復(fù)進(jìn)行空腹稱(chēng)重，計(jì)算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。試驗(yàn)期每日觀察、評(píng)定并記錄仔兔腹瀉情況、死亡情況。腹瀉評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［23］見(jiàn)表2。

腹瀉率、死亡率和腹瀉指數(shù)計(jì)算公式如下：

腹瀉率［23］=∑（腹瀉兔數(shù)×腹瀉天數(shù)）/（試驗(yàn)兔數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）×100%；

存活率=存活兔數(shù)/試驗(yàn)兔數(shù)×100%；

腹瀉指數(shù)［24］=腹瀉評(píng)分之和/（試驗(yàn)兔數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）。

1.3 樣品采集

試驗(yàn)期結(jié)束后，選取每個(gè)重復(fù)組身體健康、接近平均體重、無(wú)腹瀉的斷奶仔兔進(jìn)行屠宰。屠宰后，迅速截取空腸、回腸中段腸道10 cm，棄內(nèi)容物，用生理鹽水沖洗，截取5 cm裝入15 mL無(wú)菌離心管中，用10%福爾馬林溶液固定，常溫保存；截取5 cm空腸、回腸中段腸道，分別刮取黏膜組織于2 mL無(wú)菌凍存管中；分離肝組織，剪小塊裝入2 mL無(wú)菌凍存管中。全部樣品經(jīng)液氮速凍后，迅速轉(zhuǎn)移到-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 腸道形態(tài)分析

采用石蠟包埋法制作組織切片，每個(gè)樣品制作4個(gè)厚度為5 μm的不連續(xù)切片，用蘇木精-伊紅染色法染色并封片。于光學(xué)顯微鏡下觀察拍照，每張切片分別隨機(jī)測(cè)定5處完整的絨毛高度（V）和隱窩深度（C）。計(jì)算絨毛高度和隱窩深度的比值（V/C）。

1.5 總黃酮含量檢測(cè)

按照試劑盒說(shuō)明，用兔總黃酮（T-Flavonoids）ELISA試劑盒測(cè)定兔肝、空腸和回腸黏膜組織中總黃酮含量。

1.6 總RNA提取、cDNA反轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR

使用FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit V2試劑盒，分別提取各腸黏膜、肝組織樣的總RNA，用核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定各組織樣中RNA的純度和濃度。清除基因組DNA（gDNA）并進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，配制20 μL反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系：4.0 μL 5×All-in-one qRT SuperMix，1.0 μL Enzyme Mix，0.5 μg模板RNA，加RNase-free ddH2O至20 μL；反應(yīng)程序：50 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s。反轉(zhuǎn)錄合成產(chǎn)物于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

選用GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參基因，參照文獻(xiàn)［25］中家兔閉合蛋白1（claudin 1）、閉鎖蛋白（occludin）、閉合小環(huán)蛋白1（zonula occluden 1， ZO-1）基因的mRNA序列，參照文獻(xiàn)［26-28］中兔ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體B1（ATP-binding cassette transporter B1，ABCB1）、乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）、多藥耐藥相關(guān)蛋白2（multidrug resistance-associated protein，MRP2）、多藥耐藥相關(guān)蛋白3（multidrug resistance-associated protein，MRP3）基因的mRNA序列，利用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)查詢兔有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽（organic anion transporting polypeptide 2B1，OATP2B1）基因的mRNA序列，使用Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)引物，引物由北京六合華大基因科技有限公司合成。引物序列見(jiàn)表3。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)上述基因的相對(duì)表達(dá)量。20.0 μL的realtime PCR反應(yīng)體系包括：10.0 μL 2×ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix，0.4 μL Primer1 （0.1 mol·L-1），0.4 μL Primer2 （0.1 mol·L-1），2 μL cDNA，7.2 μL ddH2O。反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性10 s，60 ℃退火30 s，40個(gè)循環(huán)。循環(huán)完成后進(jìn)行熔解曲線分析：95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，95 ℃ 15 s。

所有樣品以GAPDH基因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)進(jìn)行校正處理，采用2-ΔΔCt相對(duì)定量法計(jì)算各基因的表達(dá)量（n=4）。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 26軟件進(jìn)行雙因子方差分析比較主效應(yīng)（飼糧是否添加蒲公英和木通提取物）及其交互作用，用 Duncan 氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）”表示，以Plt;0.05表示差異顯著，Plt;0.01表示差異極顯著。試驗(yàn)部分圖表使用Graphpad Prism 8.4制作。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)斷奶仔兔生長(zhǎng)性能的影響

由表4可知，飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)斷奶仔兔第1周的ADG、F/G存在極顯著交互作用（Plt;0.01），相較于對(duì)照組，飼糧中分別添加蒲公英、木通提取物可顯著提高斷奶仔兔第1周的ADG，顯著降低斷奶仔兔第1周的F/G（Plt;0.05），但同時(shí)添加時(shí)，差異并不顯著。其余各時(shí)段內(nèi)各項(xiàng)生長(zhǎng)性能指標(biāo)的組間差異均不顯著。

2.2 飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)斷奶仔兔腹瀉情況的影響

由表5可知，飼糧中添加木通和蒲公英提取物對(duì)斷奶仔兔腹瀉和存活情況無(wú)顯著作用，也無(wú)顯著互作效應(yīng)。

2.3 飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)斷奶仔兔腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由圖1、圖2可觀察到各組仔兔的腸黏膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)，由表6可知，蒲公英組的仔兔空腸絨毛高度顯著高于木通組（Plt;0.05），其余腸道黏膜形態(tài)指標(biāo)的組間差異均不顯著。

2.4 飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)斷奶仔兔腸道、肝總黃酮含量的影響

由圖3可知，飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)仔兔空腸的總黃酮含量存在極顯著交互作用（Plt;0.01），DA組蒲公英+木通組空腸的總黃酮含量顯著高于其他各組（Plt;0.05）；飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)仔兔肝的總黃酮含量存在顯著交互作用（Plt;0.05），木通組肝的總黃酮含量顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05）；回腸各組的總黃酮含量無(wú)顯著差異。

2.5 飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)斷奶仔兔空腸、回腸緊密連接蛋白基因表達(dá)情況的影響

2.5.1 空腸

由圖4可知，各組斷奶仔兔空腸緊密連接蛋白基因claudin1、occludin、ZO-1的相對(duì)表達(dá)量均無(wú)顯著差異。

2.5.2 回腸

由圖5可知，飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)仔兔回腸的ZO-1基因的相對(duì)表達(dá)量存在極顯著交互作用（Plt;0.01），蒲公英+木通組的ZO-1基因在回腸的相對(duì)表達(dá)量顯著高于蒲公英組和木通組，對(duì)照組的ZO-1基因在回腸的相對(duì)表達(dá)量顯著高于蒲公英組，claudin1、occludin基因在各組斷奶仔兔回腸的相對(duì)表達(dá)量差異均不顯著。

2.6 飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)斷奶仔兔空腸、回腸、肝藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體基因表達(dá)情況的影響

2.6.1 空腸

由圖6可知，木通組空腸的MRP2基因的相對(duì)表達(dá)量水平顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05），木通組空腸的OATP2B1基因相對(duì)表達(dá)水平極顯著低于對(duì)照組（Plt;0.01），蒲公英+木通組空腸的OATP2B1基因相對(duì)表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05），各組ABCB1、BCRP、MRP3基因在空腸的相對(duì)表達(dá)量差異均不顯著。

2.6.2 回腸

由圖7可知，蒲公英組、木通組的MRP3基因在回腸的相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05），飼糧中添加蒲公英、木通提取物對(duì)仔兔回腸的MRP3基因相對(duì)表達(dá)量存在極顯著交互效應(yīng)（Plt;0.01），各組ABCB1、BCRP、MRP2、OATP2B1基因在回腸的相對(duì)表達(dá)量差異均不顯著。

2.6.3 肝

由圖8可知，蒲公英+木通組的BCRP基因在肝的相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05），蒲公英+木通組的MRP3基因在肝的相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05），木通組、蒲公英+木通組的OATP2B1基因在肝的相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05），ABCB1、MRP2基因在肝的相對(duì)表達(dá)量差異均不顯著。

3 討 論

蒲公英的有效成分在腸道分布較少，而木通作為歸屬于小腸經(jīng)的引經(jīng)藥，理論上可通過(guò)打開(kāi)機(jī)體生理性屏障、影響藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體功能等方式，促進(jìn)蒲公英有效成分在小腸的分布和吸收，而本試驗(yàn)旨在探究木通對(duì)蒲公英生物活性的影響。

蒲公英提取物中的活性成分，如黃酮類(lèi)化合物、蒲公英甾醇、咖啡酸等物質(zhì)，能在廣譜抗菌、抗應(yīng)激、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮重要作用，應(yīng)用于畜禽生產(chǎn)中可提高畜禽的免疫功能，改善生長(zhǎng)性能和飼養(yǎng)品質(zhì)。楊銳等［10］研究表明，飼糧中添加0.1%蒲公英粗多糖對(duì)斷奶仔兔的生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響，但添加0.3%、0.5%的蒲公英粗多糖能顯著提高仔兔的生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)表明，飼糧中添加0.5%的蒲公英提取物或0.5%的木通提取物在第1周能顯著提高斷奶仔兔的ADG并顯著降低F/G值，與前人研究有相似之處。受肉兔生理特點(diǎn)影響，隨年齡增長(zhǎng)，育肥兔飼料轉(zhuǎn)化率會(huì)逐漸降低。本試驗(yàn)表明，斷奶后第4周兔子的料重比明顯升高，飼料轉(zhuǎn)化率降低，體重達(dá)到出欄標(biāo)準(zhǔn)，與實(shí)際生產(chǎn)情況相符。

仔兔腹瀉誘因包括細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)、環(huán)境等因素，蒲公英作為抗菌消炎、抗應(yīng)激藥物，可改善斷奶仔兔腹瀉情況。王留等［29］研究表明，飲水中添加6 g·L-1的蒲公英水提物能夠顯著降低斷奶仔豬腹瀉率。周博文［30］研究結(jié)果表明發(fā)現(xiàn)，飲用添加蒲公英提取物的常乳后，犢牛的糞便指數(shù)、腹瀉頻率并無(wú)顯著差異，但犢牛的免疫力在一定程度上有所提高。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加0.5%的蒲公英提取物對(duì)斷奶仔兔的腹瀉情況無(wú)顯著影響。這可能與斷奶仔兔生長(zhǎng)階段和蒲公英提取物的添加量有關(guān)。

小腸黏膜組織的絨毛高度、隱窩深度以及 V/C 值是反映腸黏膜對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收功能的重要指標(biāo)。有研究報(bào)道，腸道黏膜的絨毛高度增加、隱窩深度變淺或二者比值增加，代表畜禽消化吸收功能增強(qiáng)［31-32］。梁小瑞［33］研究結(jié)果表明發(fā)現(xiàn)，蒲公英水提物可促進(jìn)肉雞十二指腸和空腸絨毛高度的生長(zhǎng)。本試驗(yàn)中，蒲公英提取物在一定程度上增加斷奶仔兔空腸的絨毛高度，改善空腸腸道形態(tài)，與前人結(jié)論相符。

黃酮類(lèi)化合物是蒲公英的主要活性成分，木通中同樣含有但含量較低，本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定不同組織中總黃酮含量，來(lái)判斷蒲公英的主要活性成分在仔兔體內(nèi)的生物利用度。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)飼糧中同時(shí)添加0.5%蒲公英提取物和0.5%木通提取物能顯著提高空腸黏膜組織中總黃酮含量。腸道是黃酮類(lèi)化合物口服吸收的主要部位，腸道Ⅱ相藥物代謝是黃酮類(lèi)化合物的主要代謝途徑，Ⅱ相代謝產(chǎn)物通常是外排型轉(zhuǎn)運(yùn)體的底物［34］，而DA蒲公英+木通組對(duì)空腸黏膜組織中藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的基因表達(dá)均表現(xiàn)一定抑制作用，推測(cè)木通對(duì)外排型轉(zhuǎn)運(yùn)體的抑制作用強(qiáng)于攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體，從而使蒲公英總黃酮更多的被攝取，使空腸黏膜組織中總黃酮含量提高。木通提取物也可能作為底物競(jìng)爭(zhēng)性抑制了蒲公英總黃酮的外排，提高了組織中總黃酮含量。同時(shí)本試驗(yàn)分別檢測(cè)了DA蒲公英+木通組空腸、回腸和肝的總黃酮含量，僅空腸組有顯著提升，這也提示木通作為一種可能具有腸引經(jīng)作用的中藥，能夠促進(jìn)蒲公英主要活性成分在腸道的吸收利用。

緊密連接結(jié)構(gòu)由多種緊密連接（tight junction，TJ）蛋白構(gòu)成，能維持腸上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定，還可以保持腸黏膜屏障通透性。TJ蛋白主要分為兩大類(lèi)，即跨膜蛋白和胞質(zhì)蛋白，前者如 occludin和claudin家族，可作為結(jié)構(gòu)蛋白構(gòu)成腸道的選擇性屏障，claudin-1可將緊密連接變緊以減小細(xì)胞旁通透性［35］；而后者如 ZO-1 和 ZO-2 等能與多種蛋白質(zhì)結(jié)合，主要作用是連接膜蛋白和細(xì)胞骨架或傳遞信號(hào)分子［36］。本試驗(yàn)中蒲公英提取物能顯著降低斷奶仔兔回腸ZO-1基因相對(duì)表達(dá)量，而對(duì)空腸和回腸的其他緊密連接基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著影響，這可能與試驗(yàn)動(dòng)物的腸道結(jié)構(gòu)特點(diǎn)有關(guān)。而梁小瑞［33］指出，蒲公英水提物對(duì)肉雞小腸黏膜ZO-1、claudin-1和occludin的mRNA相對(duì)表達(dá)量均有促進(jìn)作用，推測(cè)蒲公英提取物的作用效果在一定程度上受動(dòng)物種類(lèi)的影響。

藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體在所有器官組織均有分布，但主要在腸道、肝和腎表達(dá)。藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體既能調(diào)節(jié)藥物在體內(nèi)的吸收、分布和排出，也會(huì)被藥物抑制或誘導(dǎo)，從而使藥物之間產(chǎn)生相互作用。目前關(guān)于木通對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體影響的研究較少，但木通的主要活性成分為三萜類(lèi)化合物，研究表明三萜類(lèi)化合物對(duì)外排型和攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體均表現(xiàn)出抑制作用，如甘草中三萜類(lèi)化合物甘草次酸是P-gp的抑制劑［37］，樺木素是植物來(lái)源的五環(huán)三萜類(lèi)化合物，體外試驗(yàn)表明其是OATP1B1/3和OATP1B2的抑制劑［38］。本試驗(yàn)在飼糧中添加0.5%木通提取物可以顯著下調(diào)空腸黏膜組織中MRP2、OATP2B1基因的相對(duì)表達(dá)量，使回腸黏膜組織中MRP3基因表達(dá)水平顯著降低，同時(shí)降低肝組織中MRP2、MRP3、BCRP基因表達(dá)水平，顯著降低OATP2B1基因表達(dá)水平，說(shuō)明三萜類(lèi)化合物對(duì)各組織中外排型和攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體均可產(chǎn)生抑制作用，與前人研究相符，結(jié)合前面蒲公英+木通組的空腸總黃酮含量顯著高于對(duì)照組，推測(cè)三萜類(lèi)化合物對(duì)空腸外排型轉(zhuǎn)運(yùn)體的抑制作用強(qiáng)于攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體。藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體基因在不同組織中的相對(duì)表達(dá)量存在較大差異，推測(cè)不同基因在不同器官組織的分布與表達(dá)有一定的特異性，在前人的研究中ABCB1（P-gp）主要在在腫瘤細(xì)胞、肝、腎、小腸中表達(dá)，BCRP在胎盤(pán)、腸中表達(dá)，MRP2、MRP3主要在肝中表達(dá)，OATP2B1的表達(dá)則更為廣泛［18］。

木通提取物對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體的基因表達(dá)表現(xiàn)為抑制作用，但其作為相關(guān)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑的同時(shí)也可能是其底物，Zhou等［39］試驗(yàn)研究揭示了木通皂苷D可能是MRP2的底物。因此，當(dāng)木通提取物作用于藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體基因高表達(dá)的組織時(shí)，可能作為底物來(lái)誘導(dǎo)相應(yīng)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體基因表達(dá)水平提高，推測(cè)回腸黏膜組織中MRP2、BCRP基因以及肝組織中ABCB1基因表達(dá)水平提高可能與此相關(guān)。結(jié)合木通對(duì)蒲公英總黃酮含量在空腸的影響，推斷木通作為腸引經(jīng)藥物能夠通過(guò)影響藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體基因在靶組織的表達(dá)量來(lái)提高蒲公英的生物利用度。

4 結(jié) 論

飼糧中添加蒲公英和木通提取物對(duì)斷奶仔兔生長(zhǎng)性能影響較小，但木通提取物能夠通過(guò)調(diào)節(jié)ABCB1、BCRP、MRP2、MRP3、OATP2B1等藥物攝取和外排轉(zhuǎn)運(yùn)體的基因表達(dá)，來(lái)改善蒲公英提取物在斷奶仔兔機(jī)體中的作用效果。

參考文獻(xiàn)（References）：

［1］ 武拉平，王建勛，秦應(yīng)和.2022年兔產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)概況、2023年發(fā)展趨勢(shì)及政策建議［J］.中國(guó)畜牧雜志，2023，59（3）：348-352.

WU L P，WANG J X，QIN Y H.Overview of rabbit industry production in 2022，development trend in 2023 and policy suggestions［J］.Chinese Journal of Animal Science，2023，59（3）：348-352.（in Chinese）

［2］ 谷子林.斷乳仔兔腹瀉發(fā)生機(jī)制及生物活性物質(zhì)的調(diào)控研究［D］.哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

GU Z L.The nosogenesis of diarrhea and the regulation of bio-active substances on weanling rabbits［D］.Harbin：Northeast Agricultural University，2004.（in Chinese）

［3］ 馬長(zhǎng)旺，吳敏秋.引起兔腹瀉的原因分析與防治對(duì)策［J］.當(dāng)代畜牧，2013（3）：28-31.

MA C W，WU M Q.Analysis of causes of rabbit diarrhea and prevention and control measures［J］.Contemporary Animal Husbandry，2013（3）：28-31.（in Chinese）

［4］ 王曉娟，年夫照，夏運(yùn)生，等.抗生素使用現(xiàn)狀及其在生態(tài)環(huán)境系統(tǒng)的行為研究進(jìn)展［J］.中國(guó)土壤與肥料，2020（6）：286-292.

WANG X J，NIAN F Z，XIA Y S，et al.Current status of antibiotic use and its behavior in ecological system［J］.Soil and Fertilizer Sciences in China，2020（6）：286-292.（in Chinese）

［5］ KHAN F A，MAALIK A，MURTAZA G.Inhibitory mechanism against oxidative stress of caffeic acid［J］.J Food Drug Anal，2016，24（4）：695-702.

［6］ TOUAIBIA M，JEAN-FRANCOIS J，DOIRON J.Caffeic acid，a versatile pharmacophore：an overview［J］.Mini-Rev Med Chem，2011，11（8）：695-713.

［7］ XIAO J B，MUZASHVILI T S，GEORGIEV M I.Advances in the biotechnological glycosylation of valuable flavonoids［J］.Biotechnol Adv，2014，32（6）：1145-1156.

［8］ YAO L H，JIANG Y M，SHI J，et al.Flavonoids in food and their health benefits［J］.Plant Foods Hum Nutr，2004，59（3）：113-122.

［9］ 趙 陽(yáng)，劉 娜，王 園，等.蒲公英的活性成分及其在動(dòng)物生產(chǎn)應(yīng)用中的研究進(jìn)展［J］.飼料研究，2021，44（1）：113-116.

ZHAO Y，LIU N，WANG Y，et al.Active ingredients of dandelion and its research progress in animal production and application［J］.Feed Research，2021，44（1）：113-116.（in Chinese）

［10］ 楊 銳，李金良，李旭廷，等.蒲公英粗多糖對(duì)斷奶至3月齡生長(zhǎng)肉兔生長(zhǎng)性能及免疫功能的影響［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2013，25（11）：2770-2774.

YANG R，LI J L，LI X T，et al.Effects of Taraxacum polysaccharides on growth performance and immune function of growing meat rabbits from weaner to 3 months of age［J］.Chinese Journal of Animal Nutrition，2013，25（11）：2770-2774.（in Chinese）

［11］ 李玉榮.飼糧添加蒲公英粉對(duì)肥育豬生長(zhǎng)性能和生化指標(biāo)影響的研究［J］.養(yǎng)豬，2019（6）：21-22.

LI Y R.Effects of dietary dandelion powder on growth performance and biochemical indices of finishing pigs［J］.Swine Production，2019（6）：21-22.（in Chinese）

［12］ 李婧雯，包怡紅.不同溶劑的蒲公英根提取物的抗氧化活性及降糖能力比較分析［J］.現(xiàn)代食品科技，2020，36（5）：64-72.

LI J W，BAO Y H.Comparative analysis of antioxidant and hypoglycemic capabilities of Taraxacum mongolicum root extracts in different solvents［J］.Modern Food Science and Technology，2020，36（5）：64-72.（in Chinese）

［13］ 吳振寧，祁龍凱，陳地靈.茯苓提取物對(duì)高脂飲食致腸道菌群失調(diào)小鼠的影響［J］.中國(guó)現(xiàn)代中藥，2020，22（11）：1822-1829.

WU Z N，QI L K，CHEN D L.Effect of Poria cocos extracts on dysbacteria induced by high-fat diet in mice［J］.Modern Chinese Medicine，2020，22（11）：1822-1829.（in Chinese）

［14］ 吳 娟，謝 晉，張群林，等.中藥引經(jīng)理論的現(xiàn)代研究進(jìn)展和思路［J］.中國(guó)中藥雜志，2016，41（13）：2428-2434.

WU J，XIE J，ZHANG Q L，et al.Research progress on meridian-guiding theory of traditional Chinese medicine［J］.China Journal of Chinese Materia Medica，2016，41（13）：2428-2434.（in Chinese）

［15］ 劉樹(shù)民，王秋月，盧 芳，等.中藥引經(jīng)藥性理論溯本尋源與現(xiàn)代研究評(píng)述［J］.中草藥，2020，51（19）：5099-5104.

LIU S M，WANG Q Y，LU F，et al.Tracing origin and review of modern research on meridian guide theory of traditional Chinese medicine［J］.Chinese Traditional and Herbal Drugs，2020，51（19）：5099-5104.（in Chinese）

［16］ K?NIG J，MLLER F，F(xiàn)ROMM M F.Transporters and drug-drug interactions：important determinants of drug disposition and effects［J］.Pharmacol Rev，2013，65（3）：944-966.

［17］ MINKO T，DHARAP S S，PAKUNLU R I，et al.Molecular targeting of drug delivery systems to cancer［J］.Curr Drug Targets，2004，5（4）：389-406.

［18］ 馮麗敏.基于藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的醋柴胡引經(jīng)作用機(jī)制的探討［D］.廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

FENG L M.Study on the meridian-guiding mechanism of Vinegar-baked Radix Bupleuri with drug transporters［D］.Guangzhou：Guangzhou University of Chinese Medicine，2014.（in Chinese）

［19］ 許子建.十二經(jīng)引經(jīng)藥與瀉火藥［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1978（1）：10-31.

XU Z J.The twelve channels of acupuncture and catharsis［J］.Journal of Yunnan College of Chinese Medicine，1978（1）：10-31.（in Chinese）

［20］ 劉桂艷，王 曄，馬雙成，等.木通屬植物木通化學(xué)成分及藥理活性研究概況［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2004，39（5）：330-332，352.

LIU G Y，WANG Y，MA S C，et al.Overview on the chemical constituents and pharmacological activities of the plants from Akebia［J］.Chinese Pharmaceutical Journal，2004，39（5）：330-332，352.（in Chinese）

［21］ DU J R，LONG F Y，CHEN C.Research progress on natural triterpenoid saponins in the chemoprevention and chemotherapy of cancer［J］.Enzymes，2014，36：95-130.

［22］ FRANCIS G，KEREM Z，MAKKAR H P S，et al.The biological action of saponins in animal systems：a review［J］.Br J Nutr，2002，88（6）：587-605.

［23］ 許 騰.中草藥添加劑對(duì)斷奶獺兔生產(chǎn)性能及腹瀉的影響［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2013，40（11）：93-96.

XU T.Effects of Chinese herbal additive on production performance and diarrhea index of weaning rex rabbits［J］.China Animal Husbandry amp; Veterinary Medicine，2013，40（11）：93-96.（in Chinese）

［24］ 史自濤，姚焰礎(chǔ)，江 山，等.糞腸球菌替代抗生素對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、腹瀉率、血液生化指標(biāo)和免疫器官的影響［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2015，27（6）：1832-1840.

SHI Z T，YAO Y C，JIANG S，et al.Effects of Enterococcus faecalis substitute for antibiotic on growth performance，diarrhea rate，blood biochemical parameters and immune organs of weaner piglets［J］.Chinese Journal of Animal Nutrition，2015，27（6）：1832-1840.（in Chinese）

［25］ LIU L，ZUO W S，LI F C.Dietary addition of Artemisia argyi reduces diarrhea and modulates the gut immune function without affecting growth performances of rabbits after weaning［J］.J Anim Sci，2019，97（4）：1693-1700.

［26］ HALWACHS S，KNEUER C，GOHLSCH K，et al.The ABCG2 efflux transporter from rabbit placenta：cloning and functional characterization［J］.Placenta，2016，38：8-15.

［27］ KARLA P K，PAL D，MITRA A K.Molecular evidence and functional expression of multidrug resistance associated protein （MRP） in rabbit corneal epithelial cells［J］.Exp Eye Res，2007，84（1）：53-60.

［28］ VANWIJNGAERDEN Y M，LANGOUCHE L，DERDE S，et al.Impact of parenteral nutrition versus fasting on hepatic bile acid production and transport in a rabbit model of prolonged critical illness［J］.Shock，2014，41（1）：48-54.

［29］ 王 留，劉秀玲，王向國(guó).蒲公英水提物對(duì)斷奶仔豬腹瀉率及血清炎性因子的影響［J］.養(yǎng)豬，2019（2）：52-53.

WANG L，LIU X L，WANG X G.Effects of dandelion water extract on diarrhea rate and serum inflammatory factors of weaned piglets［J］.Swine Production，2019（2）：52-53.（in Chinese）

［30］ 周博文.蒲公英綠原酸的提取及其提取物對(duì)犢牛生長(zhǎng)性能和血液免疫指標(biāo)的影響［D］.大慶：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，2016.

ZHOU B W.Effects of dandelion chlorogenic acid extraction and its extract on growth performance and blood immune indexes of calves［D］.Daqing：Heilongjiang Bayi Agricultural University，2016.（in Chinese）

［31］ CSERNUS B，CZEGLéDI L.Physiological，antimicrobial，intestine morphological，and immunological effects of fructooligosaccharides in pigs［J］.Arch Anim Breed，2020，63（2）：325-335.

［32］ LILBURN M S，LOEFFLER S.Early intestinal growth and development in poultry［J］.Poult Sci，2015，94（7）：1569-1576.

［33］ 梁小瑞.十味補(bǔ)益類(lèi)、清熱類(lèi)中藥對(duì)肉雞腸黏膜屏障功能的影響［D］.石河子：石河子大學(xué)，2020.

LIANG X R.Effects of ten tonic and heat-clearing Chinese medicine on intestinal mucosal barrier function of broilers［D］.Shihezi：Shihezi University，2020.（in Chinese）

［34］ 師少軍.腸道“藥物代謝酶-外排轉(zhuǎn)運(yùn)體偶聯(lián)”對(duì)黃酮類(lèi)化合物生物利用度影響的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2019，39（20）：2107-2112.

SHI S J.Recent advances in intestinal \"drug-metabolizing enzyme-efflux transporter coupling\" and effect on bioavailability of flavonoids［J］.Chinese Journal of Hospital Pharmacy，2019，39（20）：2107-2112.（in Chinese）

［35］ SUZUKI T.Regulation of intestinal epithelial permeability by tight junctions［J］.Cell Mol Life Sci，2013，70（4）：631-659.

［36］ 咼于明，劉 丹，張炳坤.家禽腸道屏障功能及其營(yíng)養(yǎng)調(diào)控［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2014，26（10）：3091-3100.

GUO Y M，LIU D，ZHANG B K.Intestinal barrier of poultry：function and modulation［J］.Chinese Journal of Animal Nutrition，2014，26（10）：3091-3100.（in Chinese）

［37］ NABEKURA T，YAMAKI T，UENO K，et al.Inhibition of P-glycoprotein and multidrug resistance protein 1 by dietary phytochemicals［J］.Cancer Chemother Pharmacol，2008，62（5）：867-873.

［38］ OH Y，JEONG Y S，KIM M S，et al.Inhibition of organic anion transporting polypeptide 1B1 and 1B3 by betulinic acid：effects of preincubation and albumin in the media［J］.J Pharm Sci，2018，107（6）：1713-1723.

［39］ ZHOU Y Q，LI W Z，CHEN L，et al.Enhancement of intestinal absorption of akebia saponin D by borneol and probenecid in situ and in vitro［J］.Environ Toxicol Pharmacol，2010，29（3）：229-234.

（編輯 范子娟）