摘 要： 子宮內膜炎是規(guī)模化豬場常發(fā)疾病之一，但其致病機制尚未完全明確。本研究旨在分析患病母豬陰道黏液菌群多樣性及其與血清促炎細胞因子的相關性，揭示母豬子宮內膜炎主要致病菌種類。選取北京郊區(qū)某豬場分娩后健康（C組）和子宮內膜炎（E組）母豬各7頭，采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法測定血清促炎細胞因子白細胞介素（IL）-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和腫瘤壞死因子α（TNF-α）水平，通過Illumina NovaSeq 6000測序平臺對母豬陰道黏液菌群基因進行測序，利用聯(lián)川生物云平臺分析菌群多樣性，并研究差異陰道菌群與促炎細胞因子的相關性。結果表明：E組IL-1α和IL-6的濃度水平顯著高于C組（Plt;0.01）；E組陰道微生物多樣性顯著下降（Plt;0.05）；在門水平上，與C組相比，E組的厚壁菌門（Firmicutes）菌群相對豐度顯著降低，變形菌門（Proteobacteria）菌群相對豐度顯著升高（Plt;0.01）；在屬水平上，C組和E組中最主要的優(yōu)勢菌屬分別是梭桿菌屬（Fusobacterium）和埃希桿菌-志賀菌屬（Escherichia-Shigella）；在E組中，IL-8與瘤胃球菌屬（Ruminococcus）和氣球菌屬（Aerococcus）呈顯著正相關關系（Plt;0.05）；IL-6與埃希桿菌-志賀菌屬呈顯著正相關關系（Plt;0.01）。子宮內膜炎母豬陰道黏液菌群中的有益菌減少，致病菌增加，血清促炎細胞因子水平較健康母豬升高，且血清促炎細胞因子水平與陰道黏液特定菌群數(shù)量密切相關，本研究為子宮內膜炎的防治提供了新的思路。

關鍵詞： 母豬；子宮內膜炎；細胞因子；陰道黏液菌群；相關性

中圖分類號： S857.23

文獻標志碼：A

文章編號：0366-6964（2024）08-3688-11

收稿日期：2023-11-00

基金項目：國家自然科學基金項目（31972575）；北京市農林科學院課題（CZZJ202205）;中央高校專項基金項目（31920240078）

作者簡介：鮮婷婷（1999-），女，四川儀隴人，碩士生，主要從事動物繁殖調控研究，E-mail： xtt001021@163.com

通信作者：曹 忻，主要從事動物遺傳育種與繁殖研究，E-mail： caoxin-juliet@163.com；馮 濤，主要從事動物繁殖調控研究，E-mail： fengtao_gs@163.com

Research onAnalysis of the Changes of Vaginal Microflora and Serum Pro-inflammatory Cytokines

and Their Correlation in Sows with Endometritis

XIAN" Tingting1， 2， 3， LIU" Yan2， 3， CAO" Xin1*， FENG" Tao2， 3*

（1.College of Life Science and Engineering， Northwest Minzu University， Lanzhou 730030，" China;

2.Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine （IAHVM）， Beijing Academy of Agriculture

and Forestry Sciences （BAAFS）， Beijing 100097，" China;

3.Joint Laboratory of Animal Science

between IAHVM of BAAFS and Division of Agricultural Science and Natural Resource of Oklahoma State

University， Beijing 100097，" China）

Abstract：" Endometritis is a prevalent disease in large-scale pig farms， but its pathogenic mechanism has not been fully clarified. This study aimed to analyze the diversity of vaginal microflora and its correlation with serum pro-inflammatory cytokines in sows with endometritis， with the ultimate goal of identifying the principal pathogenic bacteria responsible for endometritis in sows. Seven healthy （group C） and seven endometritis （group E） postpartum sows from a pig farm in the suburb of Beijing city were selected， respectively. Serum pro-inflammatory cytokines interleukin （IL）-1α， IL-1β， IL-6， IL-8， and tumor necrosis factor-α （TNF-α） levels were measured using enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Genes in vaginal microflora of sows were sequenced through Illumina NovaSeq 6000 sequencing and microbial diversity were analyzed using the OmicStudio platform to evaluate the correlation between microbiota and pro-inflammatory factorscytokines. The results showed that concentrationsthe levels of IL-1α and IL-6 in group E were significantly higher than those in group C （Plt;0.01）. Vaginal microbial diversity was significantly lower in group E compared with group C （Plt;0.05）. At the phylum level， the relative abundance of Firmicutes in group E was drastically reduced compared with group C， while that of Proteobacteria was significantly increased in group E compared with group C （Plt;0.01）. At the genus level， the most dominant genera in group C and group E were Fusobacterium and Escherichia-Shigella， respectively. In group E， IL-8 was positively correlated with Ruminococcus and Aerococcus （Plt;0.05）， there was a significant positive correlation between IL-6 and Escherichia-Shigella （Plt;0.01）. In sows with endometritis， beneficial bacteria in the vaginal microflora were decreased， pathogenic bacteria were increased， serum pro-inflammatory cytokine levels were elevated compared with those in healthy sows. Serum pro-inflammatory cytokine levels were closely correlated with the number of certain vaginal microflora. This study can provide new insights for the prevention and therapy of endometritis in sows.

Key words： sows; endometritis; cytokines; vaginal mucus microflora; correlation

*Corresponding authors：" CAO Xin， E-mail： caoxin-juliet@163.com; FENG Tao， E-mail： fengtao_gs@163.com

母豬子宮內膜炎是規(guī)模化豬場常見的繁殖性能疾病，通常是子宮黏膜及黏膜下層受到細菌、病毒或寄生蟲等病原微生物侵害或侵襲而發(fā)生的黏液性或化膿性炎癥［1］。由于其發(fā)病時間多在分娩后的3～5 d，病豬的泌乳力和配種率下降，配種后容易發(fā)生流產，病情嚴重時還會導致死亡［2］。據(jù)統(tǒng)計當前規(guī)?；i場母豬子宮內膜炎的發(fā)病率高達20%～50%［3］。因其發(fā)病率高、病因復雜和治療難度大，導致母豬利用率下降，經濟損失巨大，嚴重阻礙了養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展。

陰道微生物群與宿主形成互利共生關系，對宿主健康和疾病有重要影響［4］。Jana和Clka［5］發(fā)現(xiàn)子宮內膜炎在很大程度上是由致病菌引起的。子宮內膜炎母豬陰道菌群中發(fā)現(xiàn)的主要細菌類型是埃希桿菌-志賀菌屬（Escherichia-Shigella）、擬桿菌屬（Bacteroides）、梭桿菌屬（Fusobacterium）和狹義梭菌屬1（Clostridium_sensu_stricto_1）［6］。生殖道微生物組成的失衡，會破壞正常的免疫功能，導致促炎細胞因子水平的升高，免疫監(jiān)視受損和免疫細胞譜的改變［7］。促炎細胞因子是一類對于炎癥和免疫調節(jié)起促進作用的細胞因子。在炎癥反應中，生物體內的炎癥反應情況往往取決于促炎細胞因子與抗炎細胞因子之間的平衡關系，這些促炎細胞因子主要由被活化的巨噬細胞產生，并且它們能夠增強炎癥反應的程度。子宮內膜炎的發(fā)生會使動物機體細胞因子水平產生變化［8-9］，Brodzki等［10］研究發(fā)現(xiàn)在產后發(fā)生子宮內膜炎的病畜血液中的促炎細胞因子水平與健康家畜相比顯著升高。但子宮內膜炎母豬陰道黏液菌群的改變與血液中促炎細胞因子水平的變化是否存在某種聯(lián)系鮮有文獻報道。實際生產中抗生素的使用是治療雌性家畜子宮內膜炎的主要手段，使微生物耐藥性和畜產品中抗生素殘留等問題日益突出［11］。因此，若能通過關聯(lián)性分析預測某個豬場子宮內膜炎癥的發(fā)生情況，有針對性地用藥，可有效避免抗生素不合理使用，減少抗生素耐藥性的產生。

本研究通過分析健康與子宮內膜炎母豬的陰道黏液菌群多樣性，探究子宮內膜炎母豬血清促炎細胞因子水平的變化，進一步探究子宮內膜炎母豬陰道黏液菌群與血清促炎細胞因子的關系，以期為母豬子宮內膜炎的診斷和防治提供科學的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗動物來自北京郊區(qū)某豬場，將精神狀態(tài)和體況良好，無難產、未經助產且無繁殖障礙的母豬，斷奶后可正常發(fā)情，陰門分泌物量較多，且呈現(xiàn)為清亮、透明狀態(tài)的母豬作為健康組（C），參照孫洪軍［2］的母豬子宮內膜炎評定標準判定患有子宮內膜炎的母豬作為子宮內膜炎組（E）。從C組和E組各隨機選取7頭母豬作為研究對象（采樣前及采樣過程中無口服或注射抗生素進行治療，在同一豬場飼養(yǎng)，且體況相近，飼料、飲水與保健等飼養(yǎng)方式相同）。

1.2 血清樣本的采集及血清促炎細胞因子檢測

1.2.1 血清樣本的采集

作為研究對象的母豬于分娩后第5天采集血液，置于37 ℃下靜置30～60 min，然后于離心機1 500×g離心15 min。收集血清-20 ℃保存，用于后續(xù)檢測分析。

1.2.2 血清促炎細胞因子的ELISA檢測

采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒，使用Rayto Rt-6100酶標儀分別檢測血清中IL-1α（HB355-Pg）、IL-1β（HB354-Pg）、IL-6（HB347-Pg）、IL-8（HB344-Pg）和TNF-α（HB015-Pg）含量（試劑盒購自上海恒遠生物公司），試劑盒批內變異系數(shù)依次為5.2%、5.9%、5.3%、5.2%和5.5%。

1.3 陰道黏液的采集及微生物分析

1.3.1 陰道黏液樣本的采集

對采集血樣的母豬采集陰道黏液，戴上一次性無菌手套，使用無菌棉拭子在母豬陰道內蘸取分泌物樣本后立即放入無菌凍存管中，液氮速凍后，-80 ℃保存。

1.3.2 DNA提取和PCR擴增

采用十六烷基三甲基溴化銨（hexadecyl trimethyl ammonium bromide，CTAB）法提取樣本微生物組總DNA，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA質量，采用紫外分光光度計測定DNA濃度和純度。

選用細菌通用引物341F（5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′）和805R（5′-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3′）對樣品16S rDNA的V3-V4高變區(qū)基因擴增。PCR產物經20 g·L-1瓊脂糖凝膠電泳確認后，由AMPure XT beads（Beckman Coulter Genomics，Danvers，MA，USA）純化，Qubit（Invitrogen，USA）定量，采用AMPure XT beads 回收試劑盒回收。

1.3.3 擴增產物上機測序和數(shù)據(jù)分析

對純化后的PCR產物使用Agilent 2100生物分析儀（Agilent，USA）和Illumina（Kapa Biosciences，Woburn，MA，USA）的文庫定量試劑盒進行評估。合格的上機測序文庫使用NovaSeq 6000測序儀進行2×250 bp的雙端測序。測序后得到原始的下機數(shù)據(jù)RawData，利用overlap將雙端數(shù)據(jù)進行拼接，并進行質控、嵌合體過濾，獲得高質量的CleanData。通過qiime dada2 denoise-paired調用DADA2進行長度過濾和去噪，獲得擴增子序列變異ASV（amplicon sequence variants，ASV）特征序列和豐度表格。數(shù)據(jù)分析在杭州聯(lián)川生物技術股份有限公司云平臺上進行。

基于ASV特征序列和豐度表格進行Alpha多樣性分析和Beta多樣性分析。其中，Alpha多樣性分析主要通過使用Mothur軟件計算物種豐富度指數(shù)（Observed species index）、香農指數(shù)（Shannon index）、辛普森指數(shù)（Simpson index）、Chao1指數(shù)（Chao1 index）、Pielou-e指數(shù)（Pielou evenness index）和菌群覆蓋度指數(shù)（Goods coverage index），Beta多樣性主要通過加權unifrac距離（weighted unifrac）算法計算樣本間距離，并利用R-3.4.4對樣本進行主坐標分析（PCoA）。根據(jù)ASV特征序列文件采用SILVA（Release 138，https：∥www.arb-silva.de/documentation/release138/）數(shù)據(jù)庫以NT-16S數(shù)據(jù)庫進行物種注釋，并根據(jù)ASV豐度表對各物種在各樣本中的豐度進行統(tǒng)計。注釋的置信度閾值為0.7?；谖锓N注釋統(tǒng)計表，通過聯(lián)川生物云平臺柱狀堆疊圖云工具繪制柱狀堆疊圖對門水平和屬水平物種相對豐度進行展示。

1.4 血清促炎細胞因子與微生物關聯(lián)分析

利用聯(lián)川生物云平臺相關性聚類標記熱圖云工具計算血清促炎細胞因子與屬水平相對豐度前30微生物豐度的Spearman相關性系數(shù)和P值，并構建相關性聚類標記熱圖。

1.5 統(tǒng)計分析

采用SPSS26.0統(tǒng)計軟件包統(tǒng)計分析母豬子宮內膜炎促炎細胞因子水平變化和陰道黏液菌群多樣性。通過“x-±s”進行對比表示，采用t檢驗進行差異顯著性檢驗。*/#.Plt;0.05表示差異顯著，**/##.Plt;0.01表示差異極顯著。

2 結 果

2.1 母豬血清促炎細胞因子水平

分娩后第5天血清中促炎細胞因子測定結果顯示：E組IL-1α（圖1A）和IL-6（圖1B）的濃度水平顯著高于C組（Plt;0.01），E組和C組IL-1β（圖1C）、IL-8（圖1D）和TNF-α（圖1E）的濃度水平無顯著差異（Pgt;0.05）。

2.2 分娩后母豬陰道黏液微生物多樣性

2.2.1 測序數(shù)據(jù)統(tǒng)計與質控

通過Illumina NovaSeq 6000測序平臺，對北京某豬場14個陰道黏液樣品的16S rDNA基因的V3-V4區(qū)進行高通量測序，得到測序原始數(shù)據(jù)為1 182 367條。降噪后C組特有的ASV數(shù)目為1 504，E組特有的ASV數(shù)目為526，兩組共有的ASV數(shù)目為470。

2.2.2 Alpha多樣性分析

母豬陰道微生物Alpha多樣性指數(shù)如表 1所示。與C組相比，E組的Alpha多樣性指數(shù)（Observed_species、Shannon、Simpson、Chao1和Pielou-e）均顯著下降（Plt;0.05），表明分娩后患子宮內膜炎的母豬陰道菌群的多樣性和豐富度降低。兩組的Goods_coverage指數(shù)均大于0.99，表明該測序方法可以表示菌群的真實組成，覆蓋率均在99%以上。

2.2.3 Beta多樣性分析

基于weighted_unifrac距離的主坐標分析（PCoA）結果（圖 2）表明，C組和E組的陰道黏液菌群群落存在顯著差異（Plt;0.05）。

2.2.4 菌群結構及物種相對豐度門水平和屬水平組成分析

隨著分類水平的細化（門、綱、目、科、屬），各組群落組成分布差異逐漸明顯，繪制門水平（Phylum）和屬水平（Genus）的物種相對豐度柱狀堆疊圖。針對前25個門水平上和前30個屬水平上的細菌菌群相對豐度進行評估對比其菌群組成差異性。

在門水平上（圖 3），C組與E組占據(jù)主導的菌群為厚壁菌門（Firmicutes）、變形菌門（Proteobacteria）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、梭菌門（Fusobacteriota）、放線菌門（Actinobacteria）和彎曲桿菌門（Campylobacterota）。其中C組在厚壁菌門、變形菌門、擬桿菌門、梭菌門、放線菌門和彎曲桿菌門中菌群相對豐度分布占比分別為44.94%、8.37%、24.93%、14.99%、3.60%和2.15%；E組分別為16.66%、47.94%、14.26%、14.77%、5.60%和0.57%。E組厚壁菌門菌群相對豐度分布顯著低于C組（Plt;0.01），而變形菌門菌群相對豐度占比則顯著高于C組（Plt;0.01）。

在屬水平上（圖 4），C和E兩組陰道優(yōu)勢菌屬對比中各菌屬構成及相對豐度差異較大。C組中占比前五的菌屬主要有梭桿菌屬（Fusobacterium， 14.91%）、卟啉單胞菌屬（Porphyromonas， 9.87%）、擬桿菌屬（Bacteroides， 9.84%）、微單胞菌屬（Parvimonas， 6.13%）和韋榮氏球菌屬（Veillonella， 5.67%），其中，微單胞菌屬的相對豐度顯著高于E組（Plt;0.05）。E組中占比前五的菌屬主要是埃希桿菌-志賀菌屬（Escherichia-Shigella， 33.40%）、梭桿菌屬（Fusobacterium， 14.77%）、變形菌屬（Proteus， 12.62%）、卟啉單胞菌屬（Porphyromonas， 9.17%）和擬桿菌屬（Bacteroides， 4.22%），其中埃希氏桿菌-志賀氏菌屬的相對豐度顯著高于C組（Plt;0.05）。

2.3 母豬子宮內膜炎促炎細胞因子與陰道黏液菌群的關聯(lián)性分析

采用Spearman計算母豬子宮內膜炎促炎細胞因子水平與屬水平相對豐度前30的微生物相對豐度的相關性關系，結果如圖 5所示。在C組中（圖5A），IL-6與埃希桿菌-志賀菌屬和瘤胃球菌屬（Ruminococcus）呈顯著負相關關系（Plt;0.05）；IL-8與氣球菌屬（Aerococcus）呈顯著負相關關系（Plt;0.01）。在E組中（圖5B），IL-8與瘤胃球菌屬和氣球菌屬呈顯著正相關關系（Plt;0.05）；IL-6與埃希桿菌-志賀菌屬呈顯著正相關關系（Plt;0.01）。

3 討 論

子宮內膜炎是導致母豬繁殖性能下降的主要原因，而母豬子宮內膜炎的病因中最重要的因素之一是產道微生物異常［12］。本試驗通過采用高通量測序技術在Illumina NovaSeq 6000平臺對健康和患子宮內膜炎母豬陰道內黏液菌群基因進行測序，并利用聯(lián)川生物云平臺進行菌群多樣性分析。研究結果表明，健康組和子宮內膜炎組母豬微生物相對豐度存在一定的差異。在門水平上，母豬陰道黏液菌群均主要以厚壁菌門、變形菌門、擬桿菌門、梭菌門、放線菌門和彎曲桿菌門占比較高。與健康組相比，子宮內膜炎組厚壁菌門相對豐度極顯著減少，變形菌門相對豐度極顯著增加。這與Wang等［6］、劉煒寧等［13］的研究結果相似，子宮內膜炎母豬產道菌群中變形菌門［6，13］和擬桿菌門［13］相對豐度顯著增加，進一步說明本研究結果的可靠性和有效性。劉超遜等［14］通過對健康水牛與患子宮內膜炎水牛子宮內細菌組成的比較分析發(fā)現(xiàn)，厚壁菌門和擬桿菌門的細菌有利于子宮內膜恢復。變形菌門是細菌中最大的一門，多數(shù)為病原菌，易引起疾病，損害機體健康［15］。在屬水平上，子宮內膜炎母豬組中的優(yōu)勢菌屬主要是埃希桿菌-志賀菌屬、梭桿菌屬、變形菌屬、卟啉單胞菌屬和擬桿菌屬。Zhang等［12］研究結果表明，埃希桿菌-志賀菌屬和擬桿菌屬是子宮內膜炎母豬產道和腸道菌群中的常見菌屬。目前相關報道中，引起母豬子宮內膜炎的大多致病菌為大腸桿菌、鏈球菌和葡萄球菌［16-20］。在患子宮內膜炎的奶牛、藏綿羊和犬中發(fā)現(xiàn)主要致病菌中含有大腸桿菌［21-23］。大腸桿菌是引起產后子宮內膜炎最廣為人知的細菌［24］。本研究部分結果與前人研究相似，但基于本試驗研究結果中埃希桿菌-志賀菌屬的相對豐度顯著高于健康組，推測引起本豬場母豬患子宮內膜炎的細菌主要是埃希氏桿菌-志賀氏菌屬。

當患有子宮陰道疾病的患者處于無癥狀感染時，可通過細胞因子等生物標志物來診斷疾病以達到預防疾病和幫助治療的作用［25］。IL-1β、IL-6和TNF-α在產后早期子宮內膜炎的發(fā)生發(fā)展中起重要作用［10］。健康和患有子宮內膜炎的母豬的子宮均吸收IL-1β、IL-6和TNF-α進入到子宮靜脈血中，并且患病母豬子宮吸收的促炎細胞因子值更高［26］?；甲訉m內膜炎母羊血清中IL-6、IL-8和TNF-α的濃度水平均顯著高于健康母羊［27］；分娩后7 d患子宮內膜炎奶牛的IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α促炎細胞因子的水平均高于健康奶牛［28］。本研究通過對分娩后5 d的子宮內膜炎母豬與健康母豬的促炎細胞因子水平檢測發(fā)現(xiàn)，子宮內膜炎母豬IL-1α和IL-6的水平升高，提示免疫狀態(tài)改變，可能存在持續(xù)炎癥反應。但本研究中子宮內膜炎組和健康組的IL-8、IL-1β和TNF-α濃度水平相比無顯著性差異，這可能是由于與其他學者研究的物種、樣品采集時間和養(yǎng)殖管理模式不同所引起的。綜上，血清IL-1α和IL-6有作為母豬子宮內膜炎的標識物的潛力，這有待進一步驗證。

本研究將母豬子宮內膜炎血清促炎細胞因子水平的變化與陰道黏液中屬水平的差異菌群進行聯(lián)合分析，結果表明：IL-6與埃希桿菌-志賀菌屬以及IL-8與氣球菌屬的相關性在健康和子宮內膜炎母豬中不同，即在健康母豬中均為負相關關系，而在子宮內膜炎母豬中均為正相關關系。這可能進一步驗證了在母豬子宮內膜炎癥中致病菌與血清促炎因子之間的關系。在為研制高效治療子宮內膜炎的抗炎藥建立的大腸桿菌感染子宮內膜炎模型中，發(fā)現(xiàn)IL-1β、IL-6和TNF-α等促炎細胞因子的表達量顯著高于對照組［29-31］。IL-6既可作為促炎細胞因子，又可作為抗炎性肌因子，其再生或抗炎活性是由經典信號介導的，而促炎反應則是由反式信號介導的［32］。所以推測在健康母豬中，IL-6作為抗炎因子存在體內，其與埃希桿菌-志賀菌屬呈顯著的負相關關系；在患子宮內膜炎母豬中，IL-6作為促炎細胞因子存在體內，與埃希桿菌-志賀菌屬呈極顯著的正相關關系。研究發(fā)現(xiàn)，氣球菌屬可引起臨床患者尿路感染［33］。Benson等［34］研究發(fā)現(xiàn)，尿路感染患者血清IL-8和IL-6水平高于無癥狀性細菌尿患者。而在子宮炎癥研究中，陰道黏液菌群中的氣球菌屬與促炎細胞因子的關系還需進一步研究。

綜上，通過陰道黏液菌群多樣性分析發(fā)現(xiàn)，子宮內膜炎母豬陰道黏液菌群的結構組成和相對豐度與健康母豬存在差異，且推測埃希桿菌-志賀菌屬與本豬場的子宮內膜炎密切相關。血清促炎細胞因子IL-1α和IL-6水平變化可以提示母豬子宮內膜炎的發(fā)生，二者的相關性也提示了監(jiān)測子宮內膜炎母豬血清炎性因子水平有助于評估陰道黏液特定菌群含量，了解炎癥產生的原因。不同病原微生物引起子宮內膜炎的癥狀是相似的，盲目用藥會使病原微生物產生耐藥性，菌群失調使條件致病菌成為優(yōu)勢菌引發(fā)更為嚴重的感染。而微生物檢測耗時長、成本較高，在實際應用中存在一定局限性。倘若通過母豬血清促炎細胞因子水平預測致病微生物的種類，一方面能夠評估炎癥的嚴重程度，另一方面可以采取針對性治療，對于子宮內膜炎的治療具有較強的指導意義。本研究發(fā)現(xiàn)該豬場健康與患病母豬IL-6含量水平的變化與埃希氏桿菌-志賀氏菌屬存在較強的相關關系，但其背后的機制暫不清楚，需擴大樣本量進行研究，以期為母豬子宮內膜炎的防控與治療提供參考。

4 結 論

與健康母豬相比，子宮內膜炎母豬的陰道黏液菌群和血清促炎細胞因子水平（IL-1α和IL-6）存在顯著差異，子宮內膜炎母豬陰道黏液菌群中的有益菌減少，致病菌增加，其中埃希桿菌-志賀菌屬的相對豐度顯著升高，血清中的IL-1α和IL-6含量水平顯著升高。陰道黏液菌群（屬水平）與血清促炎細胞因子存在相關性，其中IL-6與埃希桿菌-志賀菌屬在健康母豬中呈負相關關系，在子宮內膜炎母豬中則呈正相關關系。

參考文獻（References）：

［1］ 黃志明. 母豬子宮內膜炎的病因及防治措施［J］. 吉林畜牧獸醫(yī)， 2023， 44（1）：28-29.

HUANG Z M. Etiology and prevention of endometritis in sows［J］. Jilin Animal Husbandry and Veterinary Medicine， 2023， 44（1）：28-29. （in Chinese）

［2］ 孫洪軍. 母豬子宮內膜炎的診斷與防治措施［J］. 飼料博覽， 2021（9）：105-106.

SUN H J. Diagnosis and prevention of endometritis in sows［J］. Feed Review， 2021（9）：105-106. （in Chinese）

［3］ 梁振國， 王文軍. 母豬子宮內膜炎發(fā)病原因、癥狀與防控措施［J］. 農業(yè)工程技術， 2023， 43（10）：91， 93.

LIANG Z G， WANG W J. Causes， symptoms， prevention and control measures of endometritis in sows［J］. Agricultural Engineering Technology， 2023， 43（10）：91， 93. （in Chinese）

［4］ PASCALE A， MARCHESI N， MARELLI C， et al. Microbiota and metabolic diseases［J］. Endocrine， 2018， 61（3）：357-371.

［5］ JANA B， CA?KA J. Endometritis changes the neurochemical characteristics of the caudal mesenteric ganglion neurons supplying the gilt uterus［J］. Animals （Basel）， 2020， 10（5）：891.

［6］ WANG J， LI C J， NESENGANI L T， et al. Characterization of vaginal microbiota of endometritis and healthy sows using high-throughput pyrosequencing of 16S rRNA gene［J］. Microb Pathog， 2017， 111：325-330.

［7］ JIANG I， YONG P J， ALLAIRE C， et al. Intricate connections between the microbiota and endometriosis［J］. Int J Mol Sci， 2021， 22（11）：5644.

［8］ WOODWARD E M， TROEDSSON M H T. Inflammatory mechanisms of endometritis［J］. Equine Vet J， 2015， 47（4）：384-389.

［9］ PUENTE E， ALONSO L， LAGAN A S， et al. Chronic endometritis： old problem， novel insights and future challenges［J］. Int J Fertil Steril， 2020， 13（4）：250-256.

［10］ BRODZKI P， KOSTRO K， BRODZKI A， et al. Inflammatory cytokines and acute-phase proteins concentrations in the peripheral blood and uterus of cows that developed endometritis during early postpartum［J］. Theriogenology， 2015， 84（1）：11-18.

［11］ PY?RL S， TAPONEN J， KATILA T. Use of antimicrobials in the treatment of reproductive diseases in cattle and horses［J］. Reprod Domest Anim， 2014， 49（S3）：16-26.

［12］ ZHANG L， WANG L K， DAI Y M， et al. Effect of sow intestinal flora on the formation of endometritis［J］. Front Vet Sci， 2021， 8：663956.

［13］ 劉煒寧， 陶天宇， 鄭桂花， 等. 患子宮內膜炎母豬產道致病菌譜分析及卟啉單胞菌的分離鑒定［J］. 微生物學通報， 2022， 49（12）：5045-5057.

LIU W N， TAO T Y， ZHENG G H， et al. Microbiota in the birth canal of sows with endometritis and isolation and identification of Porphyromonas［J］. Microbiology China， 2022， 49（12）：5045-5057. （in Chinese）

［14］ 劉超遜， 梁 辛， 楊承劍， 等. 健康水牛與患子宮內膜炎水牛子宮內細菌組成的比較分析［J］. 中國獸醫(yī)學報， 2015， 35（1）：116-121.

LIU C X， LIANG X， YANG C J， et al. Comparative analysis of uterine bacterial composition in healthy and endometritis buffaloes［J］. Chinese Journal of Veterinary Science， 2015， 35（1）：116-121. （in Chinese）

［15］ 舒迎霜， 賀濛初， 桂雪兒， 等. 黃芪多糖對犬盲腸菌群的影響［J］. 甘肅農業(yè)大學學報， 2020， 55（2）：1-8.

SHU Y S， HE M C， GUI X E， et al. Effect of Astragalus polysaccharide on cecal flora in canines［J］. Journal of Gansu Agricultural University， 2020， 55（2）：1-8. （in Chinese）

［16］ 周春炎， 夏興建. 江蘇省如皋地區(qū)母豬子宮內膜炎大腸桿菌的進化分群和耐藥特性［J］. 中國獸醫(yī)雜志， 2023， 59（3）：74-78.

ZHOU C Y， XIA X J. Phylogenetic clustering and drug resistance characteristics of Escherichia coli from sow endometritis in Rugao， Jiangsu［J］. Chinese Journal of Veterinary Medicine， 2023， 59（3）：74-78. （in Chinese）

［17］ 王改玲， 王明成， 薛永康， 等. 母豬子宮內膜炎病原菌的鑒定及治療［J］. 江蘇農業(yè)科學， 2014， 42（11）：239-240.

WANG G L， WANG M C， XUE Y K， et al. Identification and treatment of pathogenic bacteria of endometritis in sows［J］. Jiangsu Agricultural Sciences， 2014， 42（11）：239-240. （in Chinese）

［18］ 李寶紅， 凌欣華， 辛海云， 等. 致母豬子宮內膜炎金黃色葡萄球菌鑒定及致病性與耐藥性檢測［J］. 動物醫(yī)學進展， 2021， 42（8）：135-138.

LI B H， LING X H， XIN H Y， et al. Identification， pathogenicity and drug resistance of Staphylococcus aureus causing sow endometritis［J］. Progress in Veterinary Medicine， 2021， 42（8）：135-138. （in Chinese）

［19］ 呂桂霞， 劉慧軍， 蔣康富， 等. 山東東營地區(qū)規(guī)?；i場母豬子宮內膜炎病原菌檢測與藥物敏感性分析［J］. 中國豬業(yè)， 2021， 16（6）：74-78.

LV G X， LIU H J， JIANG K F， et al. Pathogen detection and drug sensitivity analysis of endometritis in sows on large-scale pig farms in Dongying area of Shandong Province［J］. China Swine Industry， 2021， 16（6）：74-78. （in Chinese）

［20］ 于桂陽， 鄭春芳， 覃開權. 一例母豬子宮內膜炎病原菌的分離與藥敏試驗［J］. 今日畜牧獸醫(yī)， 2019， 35（2）：9-10.

YU G Y， ZHENG C F， QIN K Q. Isolation and drug sensitivity test of pathogens causing endometritis in a sow［J］. Today Animal Husbandry and Veterinary Medicine， 2019， 35（2）：9-10. （in Chinese）

［21］ 侯銘源. 河北省奶牛子宮內膜炎的流行病學調查及致病菌大腸桿菌毒力與耐藥檢測［D］. 保定：河北農業(yè)大學， 2022.

HOU M Y. Epidemiological investigation of dairy cow endometritis in Hebei Province and detection of pathogenic bacteria Escherichia coli virulence and drug resistance［D］. Baoding：Hebei Agricultural University， 2022. （in Chinese）

［22］ 韓金輝， 王 萌， 潘陽陽， 等. 藏綿羊子宮內膜炎主要致病菌多重PCR檢測方法的建立與評價［J］. 生物工程學報， 2020， 36（5）：908-919.

HAN J H， WANG M， PAN Y Y， et al. Establishment and evaluation of multiplex PCR for detection of main pathogenic bacteria of endometritis in Tibetan sheep［J］. Chinese Journal of Biotechnology， 2020， 36（5）：908-919. （in Chinese）

［23］ 王顯峰， 白薩日娜. 呼倫貝爾地區(qū)寵物犬子宮內膜炎致病菌的分離鑒定與耐藥性分析［J］. 中國獸醫(yī)雜志， 2019， 55（11）：97-99， 103.

WANG X F， BAI S R N. Isolation， identification and drug resistance analysis of pathogenic bacteria of endometritis in pet dogs in Hulunbeir area［J］. Chinese Journal of Veterinary Medicine， 2019， 55（11）：97-99， 103. （in Chinese）

［24］ AZAWI O I. Postpartum uterine infection in cattle［J］. Anim Reprod Sci， 2008， 105（3-4）：187-208.

［25］ MASSON L， ARNOLD K B， LITTLE F， et al. Inflammatory cytokine biomarkers to identify women with asymptomatic sexually transmitted infections and bacterial vaginosis who are at high risk of HIV infection［J］. Sex Transm Infect， 2016， 92（3）：186-193.

［26］ KUCHARSKI J， STEFANCZYK-KRZYMOWSKA S， JANA B. Absorption of proinflammatory cytokines from inflamed porcine uterus into the uterine venous blood-preliminary data［J］. Pol J Vet Sci， 2008， 11（1）：9-16.

［27］ NASRELDIN N， ALI F A Z， ABD-ELHAFEEZ H H， et al. Characterization of immunological， biochemical and inflammatory response of clinical and subclinical endometritis in ewes in the subtropics［J］. Anim Reprod Sci， 2020， 219：106541.

［28］ CUI L Y， WANG H， DING Y N， et al. Changes in the blood routine， biochemical indexes and the proinflammatory cytokine expressions of peripheral leukocytes in postpartum dairy cows with metritis［J］. BMC Vet Res， 2019， 15（1）：157.

［29］ 張 超， 李婷婷， 毛 偉， 等. EP2受體對大腸桿菌感染的奶牛子宮內膜組織中IL-1β和IL-6 mRNA表達的影響［J］. 中國獸醫(yī)學報， 2019， 39（11）：2200-2206.

ZHANG C， LI T T， MAO W， et al. Effect of EP2 receptor on IL-1β and IL-6 mRNA expression in Escherichia coli-infected bovine endometrial tissues［J］. Chinese Journal of Veterinary Science， 2019， 39（11）：2200-2206. （in Chinese）

［30］ SHAUKAT A， SHAUKAT I， RAJPUT S A， et al. Icariin alleviates Escherichia coli lipopolysaccharide-mediated endometritis in mice by inhibiting inflammation and oxidative stress［J］. Int J Mol Sci， 2022， 23（18）：10219.

［31］ MIAO Y， ISHFAQ M， LIU Y， et al. Baicalin attenuates endometritis in a rabbit model induced by infection with Escherichia coli and Staphylococcus aureus via NF-κB and JNK signaling pathways［J］. Domest Anim Endocrinol， 2021， 74：106508.

［32］ SCHELLER J， CHALARIS A， SCHMIDT-ARRAS D， et al. The pro- and anti-inflammatory properties of the cytokine interleukin-6［J］. Biochim Biophys Acta， 2011， 1813（5）：878-888.

［33］ 周萬青， 谷盼盼， 沈 瀚. 氣球菌的分類及臨床感染［J］. 微生物學雜志， 2021， 41（1）：107-113.

ZHOU W Q， GU P P， SHEN H. Classification and clinical infection of Aerococcus［J］. Journal of Microbiology， 2021， 41（1）：107-113. （in Chinese）

［34］ BENSON M， JODAL U， AGACE W， et al. Interleukin （IL）-6 and IL-8 in children with febrile urinary tract infection and asymptomatic bacteriuria［J］. J Infect Dis， 1996， 174（5）：1080-1084.

（編輯 白永平）