摘要:本研究旨在建立一種基于高分辨率熔解曲線(high resoluLion melting,HRM)技術(shù)高效鑒別丹參及其混偽品的方法。研究采用硅膠吸附柱法純化基因組DNA,并針對(duì)鼠尾草rDNA ITS2區(qū)序列設(shè)計(jì)特異性引物,通過(guò)依次對(duì)引物濃度、DNA模板濃度、退火溫度和循環(huán)次數(shù)進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化,建立了ITS2熔解曲線模型,并采用HRM技術(shù)對(duì)不同來(lái)源丹參及其混偽品(甘西鼠尾草、云南丹參和鼠尾草)進(jìn)行鑒別。結(jié)果表明,在最適引物濃度為2.5-10.0 umol/L,DNA模板濃度為26.95-53.90 ng/uL,退火溫度為58℃,循環(huán)數(shù)為35-45時(shí)可獲得穩(wěn)定、均一、特異的PCR擴(kuò)增曲線。該方法通過(guò)對(duì)比熔解溫度(Tm)即可實(shí)現(xiàn)對(duì)丹參與甘西鼠尾草、云南丹參及鼠尾草的真?zhèn)舞b別,在丹參及其偽品的快速檢測(cè)方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。
關(guān)鍵詞:高分辨率熔解曲線;分子鑒定;丹參;偽品
中圖分類號(hào):S567.5+3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào):A 文章編號(hào):1001-4942(2024)09-0116-08