［摘要］彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）作為一種異質(zhì)性極強(qiáng)的侵襲性B細(xì)胞淋巴瘤，治療后可能面臨復(fù)發(fā)難治的問(wèn)題。外泌體作為細(xì)胞外囊泡（EVs）以及液體活檢的一份子，其本身及分泌的小分子物質(zhì)在腫瘤中發(fā)揮溝通及調(diào)節(jié)的作用。深入了解外泌體與DLBCL發(fā)展、耐藥及預(yù)后的關(guān)系，將會(huì)為DLBCL的診治提供新的思路。本文綜述了近幾年外泌體與DLBCL研究的最新進(jìn)展。

［關(guān)鍵詞］外泌體；淋巴瘤，大B細(xì)胞，彌漫性；綜述

［中圖分類(lèi)號(hào)］R733.4

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A

［文章編號(hào)］2096-5532（2024）04-0627-03doi：10.11712/jms.2096-5532.2024.60.127

［開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）］

［網(wǎng)絡(luò)出版］https：//link.cnki.net/urlid/37.1517.R.20240918.2203.001;2024-09-1915：23：13

Research advances in exosomes in diffuse large B-cell lymphoma

CHEN Shilü， WU Chunyan， GU Huali， WU Shaoling （Department of Hematology， The Affiliated Hospital of Qingdao University， Qingdao 266003， China）; ［Abstract］Diffuse large B-cell lymphoma （DLBCL） is a highly heterogeneous and aggressive B-cell lymphoma， and there are still the problems of recurrence and refractory disease after treatment. Exosomes， as a part of extracellular vesicles （EVs） and li-quid biopsy， and the small molecules secreted by them play a role of communication and regulation in tumor microenvironment. A deep understanding of the association of exosomes with the development， drug resistance， and prognosis of DLBCL may provide new ideas for the diagnosis and treatment of DLBCL. This article reviews the latest research advances in exosomes and DLBCL.

［Key words］exosomes; lymphoma， large B-cell， diffuse; review

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）是一種來(lái)源于成熟B淋巴細(xì)胞的血液侵襲性腫瘤，是發(fā)病率最高的非霍奇金淋巴瘤，具有較強(qiáng)的異質(zhì)性，約1/3的DLBCL病人在治療后經(jīng)歷復(fù)發(fā)或難治[1-2]。其診斷、預(yù)后及療效評(píng)估主要依賴(lài)于病理活組織檢查及正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像（PET-CT）等，這些檢查雖具有較高的特異性和敏感性，但價(jià)格較高、有創(chuàng)、不便、具有輻射及引起擴(kuò)散轉(zhuǎn)移的可能。外泌體是一種平均直徑為40～120 nm的雙膜脂質(zhì)囊泡，可以分泌一些遺傳物質(zhì)及活性因子[3]，從而溝通腫瘤微環(huán)境（TME）及介導(dǎo)免疫來(lái)影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。腫瘤細(xì)胞是外泌體的主要來(lái)源，外泌體作為T(mén)ME的中心媒介，可以促進(jìn)腫瘤新生血管的形成；調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞的分化，支持腫瘤生長(zhǎng)、血管化及轉(zhuǎn)移；轉(zhuǎn)運(yùn)腫瘤生長(zhǎng)所需要的致癌受體；介導(dǎo)化療耐藥以及細(xì)胞間基因交換等激活信號(hào)通路[4]。本文綜述了外泌體在DLBCL診治和預(yù)后中的作用，以促進(jìn)針對(duì)外泌體的診療方法應(yīng)用。

1外泌體與DLBCL的發(fā)生發(fā)展

外泌體及其所攜帶的活性物質(zhì)在TME中發(fā)揮通訊作用。TME中的M2型巨噬細(xì)胞具有促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和耐藥的作用，而DLBCL來(lái)源的外泌體通過(guò)分泌大量小分子蛋白GP130觸發(fā)TME中的巨噬細(xì)胞STAT3通路，進(jìn)而誘導(dǎo)下游靶點(diǎn)B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（Bcl-2）、凋亡抑制基因（Survivin）和與Bcl-2同源的凋亡促進(jìn)基因（Bax），使巨噬細(xì)胞向M2表型極化，從而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[5]。癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）在癌癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中也發(fā)揮著重要的作用，最近一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，共培養(yǎng)DLBCL細(xì)胞株與其CAFs所分泌的外泌體，導(dǎo)致淋巴瘤細(xì)胞糖酵解增多，進(jìn)而延長(zhǎng)了淋巴瘤細(xì)胞的生存時(shí)間[6]。此外，外泌體也可以通過(guò)免疫介導(dǎo)的方式來(lái)影響腫瘤的發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，DLBCL來(lái)源的外泌體可以通過(guò)上調(diào)Fas基因及其配體FasL等，誘導(dǎo)Th2細(xì)胞凋亡以及程序性死亡受體1（PD-1）的高表達(dá)，從而抑制免疫激活；血管內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和小鼠實(shí)驗(yàn)證明，該來(lái)源的外泌體可以促進(jìn)血管的生成以及腫瘤細(xì)胞的增殖；該來(lái)源的外泌體還可以升高TME中基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）及基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）的mRNA水平，而MMPs在TME中發(fā)揮著侵襲和轉(zhuǎn)移的重要作用[7]。另外一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，血清外泌體中程序性死亡受體配體1（PD-L1）蛋白可以抑制T淋巴細(xì)胞的增殖，促進(jìn)原發(fā)胃彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（GDLBCL）中免疫抑制微環(huán)境的形成[8]。除了腫瘤間質(zhì)和免疫調(diào)節(jié)外，血清外泌體miR-665還可以通過(guò)靶向LIM和SH3蛋白-1（LASP1）基因及MYC基因，而抑制細(xì)胞增殖和侵襲，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而抑制DLBCL細(xì)胞的生長(zhǎng)[9]。外泌體可以攜帶腫瘤相關(guān)的基因，已有研究結(jié)果表明，zeste基因的增強(qiáng)子同源物2（EZH2）通過(guò)抑制CDKN1A、CDKN1B、CDKN2A或者CDKN2B等細(xì)胞周期調(diào)控基因參與生發(fā)中心的形成[10]，而EZH2和其靶基因以及CDKN1B、CDKN2A和CDKN2B的DNA及mRNA可以?xún)?yōu)先包裝到外泌體中[11]，不過(guò)外泌體攜帶相關(guān)基因是否能影響腫瘤的進(jìn)展還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

2外泌體與DLBCL的治療及耐藥

目前，免疫治療是DLBCL不可或缺且富有前景的替代療法，主要包括抗體藥物偶聯(lián)物（ADCs）、嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法（CAR-T治療）以及癌癥疫苗等[1]。近十多年來(lái)，針對(duì)DLBCL常見(jiàn)細(xì)胞抗原CD20、PD-1、CD19、CD30等免疫靶向治療得到了較為廣泛的應(yīng)用，尤其是CD20單抗，自1997年上市以來(lái)一直作為標(biāo)準(zhǔn)治療中重要的一份子，但面臨一定程度的無(wú)效與耐藥，原因或許與DLBCL來(lái)源外泌體的保護(hù)有關(guān)。一項(xiàng)體內(nèi)研究表明，DLBCL來(lái)源的外泌體攜帶CD20抗原，可以通過(guò)結(jié)合并消耗利妥昔單抗保護(hù)靶細(xì)胞免受抗體攻擊，并且在接受利妥昔單抗治療的DLBCL病人血漿中去除外泌體可以增強(qiáng)補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞溶解的效果及抗體依賴(lài)的細(xì)胞毒性[12]。與CD20類(lèi)似，DLBCL來(lái)源外泌體中其他表面抗原的表達(dá)可能阻斷針對(duì)這些抗原的靶向免疫治療。除此之外，DLBCL來(lái)源的外泌體還可以抑制ENT2的表達(dá)進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤對(duì)嘧啶類(lèi)抗癌藥（如吉西他濱、阿糖胞苷等）的抗性[6]。雖然腫瘤來(lái)源的外泌體主要是抑制免疫并促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的，但它們也可以增強(qiáng)免疫，因此可以作為癌癥疫苗[13]。樹(shù)突狀細(xì)胞可以作為癌癥疫苗接種，其目的是刺激腫瘤特異性免疫反應(yīng)，以預(yù)防、治療或根除腫瘤，可是療效不佳。DLBCL來(lái)源的外泌體中含有許多腫瘤細(xì)胞相關(guān)抗原，如細(xì)胞間黏附分子1（CAM-1）、熱休克同源蛋白70（HSP70）、c-Myc、Bcl-2、Mcl-1、CD19等，它們可以被樹(shù)突狀細(xì)胞以及淋巴瘤細(xì)胞捕獲并刺激抗腫瘤免疫應(yīng)答[7]?？梢?jiàn)DLBCL來(lái)源的外泌體或許可以增強(qiáng)以樹(shù)突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)的癌癥疫苗的療效。外泌體除了使腫瘤產(chǎn)生耐藥性以及輔助癌癥疫苗外，還有利于小干擾RNA（siRNA）及化療藥物在體內(nèi)的傳遞。最近的研究發(fā)現(xiàn)，用樹(shù)突狀細(xì)胞來(lái)源的外泌體攜帶靶向BCL-6基因的siRNA，可以更有效地抑制小鼠DLBCL腫瘤的生長(zhǎng)[14]。另外，外泌體可以與CD22單克隆抗體片段偶聯(lián)并封裝阿霉素（DOX），形成CD22-F（ab′）2-Exo-DOX，該復(fù)合物可以穿過(guò)血腦屏障，延長(zhǎng)原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤（PCNSL）小鼠的壽命[15]。

3外泌體作為DLBCL診斷和預(yù)后的標(biāo)志物

液體活檢檢測(cè)標(biāo)志物主要包括外泌體、循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）、循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）和腫瘤相關(guān)的血小板（TEPs）等[16]。與傳統(tǒng)的組織活檢相比，液體活檢微創(chuàng)、簡(jiǎn)便，且能更靈活地反映淋巴瘤的治療效果及預(yù)后等。在外泌體中，作為DLBCL早篩或監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展和治療效果的標(biāo)志物主要是microRNAs。近年來(lái)，許多研究者對(duì)外泌體作為診療標(biāo)志物進(jìn)行了大量研究。如在DLBCL病人群體中，外泌體miR-3960、miR-6089、miR-939-5P含量在非生發(fā)中心亞型DLBCL中更高，但是總體相比健康人更少[17]。CAO等[18]的研究表明，外泌體miR-451a與DLBCL病人的無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）、總生存期（OS）均顯著相關(guān)，miR-451a與淋巴瘤國(guó)際預(yù)后指數(shù)（IPI評(píng)分）結(jié)合可以提高淋巴瘤預(yù)后預(yù)測(cè)效果，血清外泌體miR-451a的水平動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)有助于CD20單抗的療效判斷。另一項(xiàng)預(yù)后研究表明，血清外泌體miR-99a-5P、miR-125b-5P的升高與DLBCL的預(yù)后不良和療效不佳密切相關(guān)[19]。一項(xiàng)多中心研究發(fā)現(xiàn)，外泌體miR-22在DLBCL治療中是一個(gè)富有前景的預(yù)測(cè)因子及獨(dú)立的非侵入性生物標(biāo)志物[20]。最近的一項(xiàng)研究表明，外泌體miR-107通過(guò)靶向14-3-3η發(fā)揮腫瘤抑制因子的作用，從而抑制FOXO1、CCND1、Bcl-2等致癌基因，因此其下調(diào)與DLBCL的PFS縮短相關(guān)[21]。除microRNAs以外，血清外泌體中血管性血友病因子（vWF）含量及活性在高危DLBCL病人中增高，并能顯著區(qū)分不同病人的OS與PFS，vWF或許可以作為DLBCL的一種潛在預(yù)后標(biāo)志物[22]。外泌體所表達(dá)的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）水平在DLBCL病人中顯著升高，與淋巴瘤的治療效果和抗腫瘤免疫反應(yīng)均具有緊密的相關(guān)性[23]。

4總結(jié)與展望

外泌體在DLBCL中有著雙重作用，它不僅可以通過(guò)TME促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展，也可以通過(guò)促進(jìn)機(jī)體的免疫反應(yīng)來(lái)抵抗腫瘤細(xì)胞；不僅可以降低腫瘤對(duì)藥物的敏感性，也可以作為載體來(lái)輔助治療；不僅可以作為DLBCL早期診斷的新標(biāo)志物，也可以作為預(yù)后的新興分子標(biāo)志物。除了淋巴瘤，外泌體在其他血液惡性腫瘤中也發(fā)揮著類(lèi)似的作用。如多發(fā)性骨髓瘤源性的外泌體miR-1305通過(guò)促進(jìn)骨髓微環(huán)境中的巨噬細(xì)胞向M2表型極化從而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展[24]；急性髓系白血病間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的外泌體可以靶向RPRD1A并激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，從而降低急性髓系白血病（AML）細(xì)胞對(duì)化療的敏感性[25]。靶向藥物是治療血液惡性腫瘤的主要趨勢(shì)之一，而外泌體為血液腫瘤細(xì)胞提供了抵御抗體及其補(bǔ)體攻擊的屏障，研究如何解決外泌體所攜帶的表面抗原對(duì)分子靶向藥物的阻斷是一個(gè)有待探索的方向。外泌體釋放的調(diào)節(jié)機(jī)制也不完全清楚，TME中以低氧為主的應(yīng)激是腫瘤細(xì)胞源性外泌體釋放增加的主要原因之一[11]。液體活檢作為一種新型的腫瘤診斷和預(yù)后判斷的方法，近年來(lái)受到了廣泛關(guān)注，而外泌體的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)為其中的活性物質(zhì)提供了安全和穩(wěn)定的環(huán)境，外泌體可以成為今后液體活檢的絕佳選擇。但是，富集外泌體具有一定的難度和挑戰(zhàn)，外泌體一般通過(guò)CD9、CD63、CD81、ALIX和HSP70等特征來(lái)識(shí)別，這些特征有助于外泌體的捕獲和富集[26]。目前，分離和提取外泌體的方法主要有超速離心法、密度梯度離心法和阻容色譜法等，但各有局限性。隨著人們對(duì)外泌體性質(zhì)的了解，對(duì)其診斷和治療應(yīng)用的研究也越來(lái)越多，只有不斷完善外泌體的分離和識(shí)別技術(shù)，才能更深地了解外泌體在DLBCL中的作用，更進(jìn)一步發(fā)揮外泌體在淋巴瘤及其他血液惡性腫瘤診斷和治療中的潛能。

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（本文編輯劉寧）