摘 要 2022年1月，某動(dòng)物園同一館舍內(nèi)飼養(yǎng)的6只長臂猿（Nomascus spp.）先后出現(xiàn)流清涕、咳嗽的癥狀。采集患病長臂猿鼻拭子共6份，利用高通量測(cè)序法對(duì)樣本進(jìn)行病原篩查，結(jié)果顯示：2份樣本呈AIV陽性，序列組裝結(jié)果與H9N2亞型禽流感病毒的相似性最高；采用qPCR法對(duì)2份陽性樣本進(jìn)行H1 ～ H16 基因和N1 ～ N9 基因檢測(cè)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)5號(hào)樣本H9 Ct值為31. 35、N2 Ct值為36. 16，6號(hào)樣本H9 Ct值為27. 46、N2 Ct值為29. 57，均為陽性。給予患病長臂猿化痰止咳、消炎和控制繼發(fā)感染等綜合治療，同時(shí)加強(qiáng)飼養(yǎng)環(huán)境消毒，患病長臂猿很快康復(fù)。

關(guān)鍵詞：長臂猿；H9N2；禽流感病毒；高通量測(cè)序；qPCR

中圖分類號(hào)：S858. 9

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：2310 - 1490（2024）- 04 - 0873 - 08

DOI：10.12375/ysdwxb.20240420

禽流感是由A 型流感病毒（Avian influenza vi?rus，AIV）引起的一類禽類疾病，也可感染人類和其他哺乳動(dòng)物。高致病性禽流感病毒（High patho?genic avian influenza virus，HPAIV）能造成禽類的高致病率和高死亡率，人類偶有感染，但一旦感染病死率較高，嚴(yán)重危害禽類和人類的生命健康［1?2］。低致病性禽流感病毒（Low pathogenic avian influenzavirus，LPAIV）流行隱匿，可降低家禽產(chǎn)蛋能力、體質(zhì)量和免疫力，且存在向HPAIV變異的風(fēng)險(xiǎn)，從而帶來疫病傳播擴(kuò)大的風(fēng)險(xiǎn)［3?4］。H9N2亞型禽流感病毒屬于LPAIV，常引起鳥和豬等動(dòng)物發(fā)病，近年來也有感染人的報(bào)道［4］。長臂猿屬于靈長目（Primates）長臂猿科（Hylobatidae），與人親緣關(guān)系非常接近，主要分布在東南亞，在我國主要分布在云南和廣西，海南也有分布。長臂猿科所有物種均被列為國家一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物［5］，是珍稀的野生動(dòng)物資源。非人靈長類動(dòng)物自然感染禽流感病毒的病例報(bào)告極少。本案例描述了長臂猿自然感染H9N2 亞型LPAIV后的臨床癥狀以及實(shí)驗(yàn)室檢查、診斷和治療過程，以期為靈長類動(dòng)物流感病毒感染的診療提供臨床參考。

1 發(fā)病情況

2021年12月29日，長臂猿群進(jìn)行了一次物理保定館舍搬遷，當(dāng)時(shí)氣溫變化較大，夜間氣溫為5 ～11 ℃，日間氣溫為15 ～ 19 ℃。2022年1月3日，2只長臂猿出現(xiàn)打噴嚏、流清鼻涕和發(fā)抖的癥狀，精神尚可，挑食，排泄正常。1月4日和5日，新增4只長臂猿出現(xiàn)同樣癥狀，先發(fā)病的長臂猿開始咳嗽，鼻涕變?yōu)榛野咨?。截?日，共有6只長臂猿發(fā)病，分別是1只南方白頰長臂猿（Nomascus siki）、2只紅頰長臂猿（N. gabriellae）和3只黃白頰混血長臂猿。

2 實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果

2. 1 血液檢查

出現(xiàn)早期癥狀時(shí)，采集其中1只長臂猿的靜脈血送廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院作血常規(guī)檢測(cè)，結(jié)果顯示白細(xì)胞總數(shù)為7. 18 × 109/L，淋巴細(xì)胞百分比為34. 8%，中性粒細(xì)胞百分比為55. 4%，單核細(xì)胞百分比為9. 2%；采集后期出現(xiàn)咳嗽癥狀的1只長臂猿靜脈血作血液常規(guī)檢查，結(jié)果顯示白細(xì)胞總數(shù)為16. 54 ×109/L，淋巴細(xì)胞百分比為22. 3%，中性粒細(xì)胞百分比為67. 3%，單核細(xì)胞百分比為10. 2%（表1）。

2. 2 病原檢測(cè)

對(duì)有臨床癥狀的長臂猿采用壓縮籠物理保定，對(duì)鼻孔周邊消毒，使用滅菌棉拭子貼鼻孔壁旋轉(zhuǎn)3周，獲取拭子樣本，置于滅菌的PBS保存液中，置低溫冰箱中保存待檢。共采集患病長臂猿鼻拭子樣本6份，送廣西翰佰爾生物科技有限公司，利用高通量測(cè)序結(jié)合實(shí)時(shí)熒光PCR進(jìn)行流感病毒檢測(cè)驗(yàn)證。

2. 2. 1 高通量測(cè)序

使用病原核酸提取試劑盒（廣州美基生物科技有限公司，中國），根據(jù)說明書的操作步驟提取病原總核酸。采用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)病原總核酸完整性，使用NanoDrop分光光度計(jì)檢測(cè)核酸純度，并用Qubit 2. 0 Fluorometer（Themo Fisher Scientific，USA）與ssDNA Quantitation Assay Kit 試劑盒（Q10212，Themo Fisher Scientific，USA）對(duì)核酸濃度進(jìn)行精確定量。樣本檢測(cè)合格后，每個(gè)樣本取用2 μg核酸，使用建庫試劑盒NEBNext Ultra DNA Library Prep Kitfor Illumina（New England Biolabs，USA），根據(jù)TruSeqDNA Sample Preparation Guide（Illumina，15026486Rev. C）方法與流程進(jìn)行文庫制備，制庫流程：使用Covaris 超聲波破碎儀將DNA 片段隨機(jī)打碎為約350 bp的片段，然后進(jìn)行DNA片段篩選、末端修復(fù)、修復(fù)末端加入堿基A、加測(cè)序接頭引物、文庫純化和PCR 擴(kuò)增富集。文庫構(gòu)建完成后，使用Qubit 2. 0Fluorometer （Themo Fisher Scientific， USA）與ssDNAQuantitation Assay Kit 試劑盒（Q10212，Themo FisherScientific，USA）初步定量。將文庫稀釋至1 ng/μL，隨后使用Agilent 2100 Bioanalyzer（Agilent Technolo?gies，USA）檢測(cè)文庫的insert size。當(dāng)文庫insert size符合預(yù)期后，使用Bio-Rad KIT iQ SYBR GRN試劑盒（iQ SYBR Green Supermix，BIO-RAD，USA）在Bio-Rad CFX 96 熒光定量PCR 儀器（Bio-Rad CFX-96，BIO-RAD，USA）上進(jìn)行qPCR，對(duì)文庫的有效濃度進(jìn)行準(zhǔn)確定量，要求文庫有效濃度大于3 nmol/L，以保證文庫質(zhì)量。文庫質(zhì)量檢測(cè)合格后，根據(jù)測(cè)序所需數(shù)據(jù)量匯集文庫，將文庫加入Illumina NovaSeq 6000測(cè)序平臺(tái)測(cè)序，測(cè)序策略為雙端150 bp，測(cè)序數(shù)據(jù)量為每個(gè)樣本20 G。數(shù)據(jù)下機(jī)后進(jìn)行數(shù)據(jù)質(zhì)控、組裝、基因預(yù)測(cè)及豐度分析和物種注釋及功能數(shù)據(jù)庫注釋等宏病毒組分析。

測(cè)序結(jié)果5號(hào)樣本和6號(hào)樣本呈AIV陽性，5號(hào)樣本AIV 覆蓋度為17%，6 號(hào)樣本AIV 覆蓋度為100%。序列組裝結(jié)果顯示，5號(hào)樣本得到核輸出蛋白/非結(jié)構(gòu)蛋白（nuclear export protein/nonstructuralprotein1，NEP/NS1）表達(dá)基因的不完整序列；6 號(hào)樣本得到堿性聚合酶1/堿性聚合酶2-F2（polymerasebasic 1/polymerase basic 2-F2，PB1/PB2-F2）、堿性聚合酶2（polymerase basic 2，PB2）、酸性聚合酶（poly?merase acid，PA）、血凝素（hemagglutinin，HA）、核蛋白（nuclear protein，NP）、神經(jīng)氨酸酶（neuraminidase，NA）、基質(zhì)蛋白1/基質(zhì)蛋白2（matrix protein 1/matrixprotein 2，M1/M2）和NEP/NS1 八個(gè)表達(dá)基因片段的不完整序列，命名HA 基因序列為NC_004908. 1，NA基因序列為NC_004909. 1。

2. 2. 2 qPCR驗(yàn)證

根據(jù)高通量測(cè)序的分析結(jié)果選取流感病毒陽性樣本，利用High Pure Viral RNA Kit劑盒（No. 11828665001，Roche，瑞士）提取RNA病毒，然后通過Prime?Script Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit with gDNAEraser試劑盒（RR047A，TaKaRa，日本）反轉(zhuǎn)錄生成cDNA，利用甲流分型檢測(cè)試劑盒H1 ～ H16 和N1 ～N9（碩世生物，中國江蘇）進(jìn)行qPCR檢測(cè)。結(jié)果顯示，5號(hào)樣本H9 Ct值為31. 35，N2 Ct值為36. 16；6號(hào)樣本H9 Ct值為27. 46，N2 Ct值為29. 57。判為5號(hào)和6號(hào)樣本為H9N2陽性，其他分型結(jié)果均為陰性。

2. 2. 3 基因序列分析

使用NCBI的BLAST工具分析基因相似性，將6號(hào)樣本各基因片段序列分別在NCBI上用BLAST工具比對(duì)序列相似性，與各基因片段序列相似性最高的毒株信息見表2；將5號(hào)樣本NEP/NS1 基因片段序列在NCBI上用BLAST進(jìn)行序列相似性比對(duì)，與該基因片段序列相似性最高的毒株信息見表3。

在NCBI核酸基因數(shù)據(jù)庫中選取參考毒株的基因序列，使用MEGA6. 0，采用最大相似法，設(shè)置Boot?strap replications值為1 000，構(gòu)建HA 基因和NA 基因系統(tǒng)進(jìn)化樹。結(jié)果顯示，NC_004908. 1與A/chicken/China/FY110/2022（H9N2）株和A/chicken/China/JN35/2021（H9N2）株的HA 基因遺傳距離最近，與A/turkey/Wisconsin/1/1966（H9N2）株的遺傳距離最遠(yuǎn)（圖1）；NC_004909. 1與A/chicken/China/KM216/2022（H9N2）株和A/chicken/China/KM212/2022（H9N2）株的NA 基因遺傳距離最近，與A/turkey/Wisconsin/1/1966（H9N2）株的遺傳距離最遠(yuǎn)（圖2）。

3 診斷、治療和防控

3. 1 診斷

與王曉佳等［6］對(duì)長臂猿血液的常規(guī)檢測(cè)結(jié)果相比，在本案例早期發(fā)病長臂猿的血液中單核細(xì)胞百分比略微升高，白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比和淋巴細(xì)胞百分比均在正常范圍內(nèi)；而在疾病后期出現(xiàn)咳嗽癥狀長臂猿的血液中白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞百分比均略微升高。高通量測(cè)序法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)病原的結(jié)果提示患病長臂猿鼻咽處有H9N2 亞型禽流感病毒定植，診斷本群長臂猿為H9N2亞型禽流感病毒引起的流感。

3. 2 治療措施

以抗炎、化痰止咳和防止繼發(fā)感染為治療原則對(duì)癥治療。在治療上，給予小兒氨酚磺那敏顆粒1包/只（1包小兒氨酚磺那敏顆粒含對(duì)乙酰氨基酚125. 0 mg，馬來酸氯苯那敏0. 5 mg，人工牛黃5. 0 mg），鹽酸氨溴索片60 mg/只，小兒麻甘顆粒2. 5 g/只，頭孢克肟顆粒50 mg/只，連喂7 d；咳嗽嚴(yán)重的長臂猿加服利肺片2片/次，2次/d，連喂10 d。

3. 3 防控

對(duì)該群長臂猿原地隔離，飼養(yǎng)間出入口設(shè)置消毒墊，每4 h更換1次消毒液。對(duì)患病長臂猿專人專養(yǎng)，飼養(yǎng)人員做好個(gè)人防護(hù)，作業(yè)時(shí)戴好帽子、口罩和手套，穿戴工作服和靴子。同棟館舍其他飼養(yǎng)間相對(duì)隔離，其他作業(yè)人員不得進(jìn)入患病長臂猿飼養(yǎng)間，做好個(gè)人防護(hù)。館舍出入口設(shè)置消毒墊，每4 h更換1次消毒液，將掃把、刷子、垃圾鏟、料盆和水盆等生產(chǎn)用具嚴(yán)格分開。在治療期間，該棟館舍所有飼養(yǎng)員不得進(jìn)入其他館舍，防止病毒擴(kuò)散，飼養(yǎng)館舍地面、飼養(yǎng)籠用84消毒液按1∶100噴灑消毒，飼養(yǎng)間內(nèi)室空間每天用白醋按7 mL/m3的濃度進(jìn)行空氣熏蒸消毒，連續(xù)消毒1周。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，館舍配置多個(gè)小太陽保暖器提升空間溫度，白天適時(shí)通風(fēng)換氣，供給豐富多樣的水果，增加鵪鶉蛋等高蛋白質(zhì)食物的供給頻次，提高患病長臂猿營養(yǎng)攝入和機(jī)體免疫力。經(jīng)過10 d的治療和防控，群體內(nèi)未再出現(xiàn)新病例，發(fā)病的6只長臂猿全部康復(fù)。

4 討論

從臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果可知，本案例是一起由H9N2亞型禽流感病毒引起的流感。Paung?pin et al.［7］對(duì)自由放養(yǎng)的672只食蟹猴（Macaca fas?cicularis）進(jìn)行AIV 監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)自由放養(yǎng)的食蟹猴存在AIV自然感染；Zhang et al.［8］建立H9N2亞型禽流感病毒感染獼猴（M. mulatta）的動(dòng)物模型表明，H9N2可以引起非人靈長類動(dòng)物與人類流感相似的癥狀，可以引起包括肺炎在內(nèi)的呼吸系統(tǒng)疾病，非人靈長類感染H9N2亞型禽流感病毒后的病癥比季節(jié)性流感病毒嚴(yán)重，但比感染HPAIV的癥狀輕。本案例的長臂猿自然感染H9N2 亞型禽流感病毒后癥狀較輕，主要是流涕和咳嗽，未引起明顯的發(fā)熱和嚴(yán)重的肺炎，也未引起大范圍的感染、傳播以及猿—人傳播，符合低致病性禽流感的特征。

與一般的低致病性禽流感相似，長臂猿感染H9N2亞型禽流感病毒后一般7 ～ 10 d臨床癥狀會(huì)消失。研究人員對(duì)本案例患病長臂猿進(jìn)行常規(guī)對(duì)癥治療和預(yù)防繼發(fā)感染的同時(shí)，做好了環(huán)境消毒和增強(qiáng)營養(yǎng)供給，保證水合狀態(tài)，以提高機(jī)體免疫力，最終10 d后全部康復(fù)。在治療過程中，使用頭孢克肟顆粒能夠有效控制流感過程繼發(fā)的細(xì)菌感染；使用小兒氨酚黃那敏能有效減少流感早期引起的流涕、咽喉腫痛和頭痛發(fā)熱等癥狀；使用鹽酸氨溴索能促進(jìn)痰液的稀釋和排出；使用小兒麻甘顆粒能平喘止咳，利咽祛痰。利肺片主要成分是百部、百合、五味子、枇杷葉、白及、牡蠣、甘草、冬蟲夏草和蛤蚧，對(duì)頑固性肺炎有驅(qū)癆補(bǔ)肺，鎮(zhèn)咳化痰的作用，對(duì)久咳難愈的病例有較明顯的治療作用。

HA蛋白是AIV表面重要的糖蛋白，其功能結(jié)構(gòu)域的改變會(huì)導(dǎo)致AIV 的致病力和宿主特異性的改變。AIV致病性和毒力強(qiáng)弱的關(guān)鍵因素是其HA蛋白裂解位點(diǎn)的氨基酸序列，AIV的宿主特異性與HA蛋白受體結(jié)合位點(diǎn)的氨酸殘基有著密切的關(guān)系；NA蛋白是AIV另一種重要糖蛋白，在病毒復(fù)制與病毒從細(xì)胞逸出中具有重要功能，與病毒毒力和跨物種傳播的能力相關(guān)，在同一宿主身上同時(shí)感染多種亞型AIV容易發(fā)生流感病毒基因的重組［9?13］。本案例采用高通量測(cè)序?qū)颖具M(jìn)行病原檢測(cè)AIV呈陽性，采用qPCR進(jìn)行病原驗(yàn)證，證實(shí)這是一起由H9N2亞型低致病性禽流感病毒引起的感染。由于實(shí)驗(yàn)條件限制，未能開展病毒培養(yǎng)及更深一步的研究，該毒株的致病力是否發(fā)生改變，以及其是否具備跨物種傳播的能力尚不明確。H9N2亞型禽流感病毒屬于低致病性禽流感病毒，感染鳥類的報(bào)道較多，1998年以來陸續(xù)有H9N2亞型禽流感病毒感染人的報(bào)道，說明H9N2對(duì)人類健康的威脅不可忽視［3，10?11］。本案例首次發(fā)現(xiàn)H9N2亞型禽流感病毒也可自然感染長臂猿，說明H9N2亞型禽流感病毒宿主范圍仍具有很大的不確定性，其跨物種傳播的能力值得繼續(xù)關(guān)注和研究。

本案例長臂猿能自然感染H9N2 亞型禽流病毒，與飼養(yǎng)管理比較粗放和針對(duì)該亞型流感病毒的免疫措施缺失有關(guān)。同棟飼養(yǎng)物種較多，有猴科（Cercopithecidae）、靈貓科（Viverridae）等多種動(dòng)物；外運(yùn)動(dòng)場(chǎng)臨時(shí)放養(yǎng)孔雀（Pavo spp.），有多種候鳥到運(yùn)動(dòng)場(chǎng)覓食；館舍臨近開放性水禽飼養(yǎng)湖，每年都有多種候鳥在湖中小島停留，部分成為留鳥。這種粗放型飼養(yǎng)模式大大增加了長臂猿與病原體接觸的機(jī)會(huì)。該動(dòng)物園每年春秋兩季均對(duì)飼養(yǎng)的鳥禽進(jìn)行H5 亞型和H7 亞型高致病性禽流感疫苗的接種免疫，但園內(nèi)所有物種均未接種低致病性禽流感疫苗。有研究表明，季節(jié)性流感疫苗接種對(duì)H9N2的交叉保護(hù)較低［14］，H5亞型和H7亞型高致病性禽流感疫苗對(duì)H9N2的交叉保護(hù)作用較低［15］，使得低致病性禽流感病毒感染園內(nèi)動(dòng)物的可能性大大提高。越來越多的研究表明，H9N2亞型禽流感病毒HA 基因第226位氨基酸突變?yōu)榱涟彼釙r(shí)更易于與哺乳動(dòng)物的唾液酸SAɑ2-6Gal 結(jié)合，PA-356R、PB1-K557E 和PB2-E627K 等突變可增強(qiáng)病毒對(duì)哺乳動(dòng)物的適應(yīng)性［10，16］。因此，筆者推測(cè)該群長臂猿感染的H9N2亞型禽流感病毒可能來源于園內(nèi)候鳥。據(jù)張官婷等［16］統(tǒng)計(jì)，人感染H9N2流感病毒的疫情多發(fā)生在冬春季節(jié)，每年10月至次年3月報(bào)道的病例最多，H9N2禽流感病毒感染人后癥狀輕，易自愈，往往被人們忽略。在平時(shí)飼養(yǎng)作業(yè)和對(duì)外展出過程中，長臂猿有與人類直接或間接接觸的機(jī)會(huì)。本群長臂猿感染H9N2 亞型禽流感病毒的時(shí)間為1 月，不排除同期H9N2 在人間隱性感染的可能，該群長臂猿感染H9N2亞型禽流感病毒也有可能來源于人。該群長臂猿感染H9N2亞型禽流感病毒發(fā)生在搬遷之后，搬遷應(yīng)激、新環(huán)境應(yīng)激和溫差變化大等都是感染發(fā)病的主要誘因。

為防止該群長臂猿再次感染禽流感病毒，應(yīng)將其與其他物種分開飼養(yǎng)，遠(yuǎn)離候鳥集中地，減少接觸禽流感病毒的機(jī)會(huì)。對(duì)園內(nèi)飼養(yǎng)的禽鳥接種H9N2亞型禽流感疫苗，嘗試開展長臂猿科接種H9N2亞型禽流感疫苗效果研究，提高園內(nèi)禽類和長臂猿對(duì)H9N2亞型禽流感病毒的抵抗力。近年來，一些新發(fā)或再發(fā)人獸共患病在世界范圍內(nèi)廣泛流行，野生動(dòng)物在人獸共患病的發(fā)生和傳播過程中發(fā)揮了重要作用［17］，開展H9N2亞型禽流感病毒本底調(diào)查，摸清園內(nèi)物種攜帶和感染情況，對(duì)全園的禽流感防控具有重要意義，對(duì)社會(huì)具有重要的公共衛(wèi)生意義。

參考文獻(xiàn)：

［1］ ALEXANDER D J. A review of avian influenza in different birdspecies［J］. Veterinary Microbiology， 2000， 74（1/2）： 3-13.

［2］ 顧宏偉， 祁賢， 陳磊垚， 等. 人感染高致病性H5N6禽流感病毒表面糖蛋白分子進(jìn)化特征［J］. 中華疾病控制雜志， 2020，24（4）： 456-461.

GU H W， QI X， CHEN L Y， et al. Molecular characteristic of thetwo surface glycoproteins of highly pathogenic avian influenza AH5N6 viruses from human， 2014-2018， China［J］. Chinese Jour?nal of Disease Control amp; Prevention， 2020， 24（4）： 456-461.

［3］ LEE D H， CRIADO M F， SWAYNE D E. Pathobiological originsand evolutionary history of highly pathogenic avian influenza vi?ruses［J］. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine， 2021， 11（2）： a038679.

［4］ 趙善露， 黃超洋， 劉子言， 等. 2013—2022 年湖南省人感染H9N2禽流感病例及外環(huán)境H9亞型禽流感病毒監(jiān)測(cè)分析［J］.疾病監(jiān)測(cè)， 2024， 39（7）： 836-840.

ZHAO S L， HUANG C Y， LIU Z Y， et al. Surveillance for hu?man H9N2 avian influenza cases and H9 subtype avian influenzavirus in the external environment in Hunan， 2013-2022［J］. Dis?ease Surveillance， 2024， 39（7）： 836-840.

［5］ 國家林業(yè)和草原局， 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部. 國家重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物名錄（2021 年2 月1 日修訂）［J］. 野生動(dòng)物學(xué)報(bào)， 2021， 42（2）：605-640.

National Forestry and Grassland Administration， Ministry of Agri?culture and Rural Affairs. List of national key protected wild ani?mals（ revised on February 1， 2021）［J］. Chinese Journal of Wild?life， 2021， 42（2）： 605-640.

［6］ 王曉佳， 袁梨， 喻元， 等. 長臂猿血常規(guī)和血液生化指標(biāo)的測(cè)定［J］. 中國獸醫(yī)雜志， 2023， 59（11）： 128-131.

WANG X J，YUAN L，YU Y，et al. Determination of blood routineand blood biochemical indexes in Hylobatidae［J］. Chinese Jour?nal of Veterinary Medicine， 2023， 59（11）： 128-131.

［7］ PAUNGPIN W， THONGDEE M， KETCHIM N， et al. Evidenceof influenza A virus infection in cynomolgus macaques， Thailand［J］. Veterinary Sciences， 2022， 9（3）： 132.

［8］ ZHANG K， XU W W， ZHANG Z W， et al. Experimental infec?tion of non-human primates with avian influenza virus （H9N2）［J］. Archives of Virology， 2013， 158（10）： 2127-2134.

［9］ 馮肖肖， 趙靈燕， 劉霞， 等. 14株H9N2亞型禽流感病毒分離株的HA 和NA 基因序列分析［J］. 中國獸醫(yī)雜志， 2023， 59（3）： 1-11.

FENG X X， ZHAO L Y， LIU X， et al. HA and NA gene se?quences analysis of fourteen H9N2 subtype avian influenza virusisolates［J］. Chinese Journal of Veterinary Medicine， 2023， 59（3）： 1-11.

［10］ 鄧斐， 祁賢， 余慧燕， 等. 江蘇省首例人感染H9N2禽流感病毒分子溯源研究［J］. 醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)， 2021， 34（10）： 1057-1061.

DENG F， QI X， YU H Y， et al. Genetic origin of human infec?tion with avian influenza A H9N2 virus in Jiangsu Province［J］.Journal of Medical Postgraduates， 2021， 34（10）： 1057-1061.

［11］ 陳瑤瑤， 楊映芳， 孫艷紅， 等. 云南省2019年人感染H9N2禽流感病毒血凝素和神經(jīng)氨酸酶基因序列分析［J］. 中國熱帶醫(yī)學(xué)， 2023， 23（7）： 692-696； 714.

CHEN Y Y， YANG Y F， SUN Y H， et al. Sequence analysis ofHA and NA genes of human infected H9N2 avian influenza virusin Yunnan Province， 2019［J］. China Tropical Medicine， 2023，23（7）： 692-696； 714.

［12］ 劉彥云， 劉春國， 王壽山， 等. 10株H9N2亞型禽流感病毒血凝素基因的序列分析［J］. 中國畜牧獸醫(yī)， 2013， 40（8）：13-19.

LIU Y Y， LIU C G， WANG S S， et al. Sequence analysis of thehaemagglutinin genes of ten H9N2 subtype avian influenza vi?ruses［J］. China Animal Husbandry amp; Veterinary Medicine，2013， 40（8）： 13-19.

［13］ 陳聞天， 黃鶴， 于漢杰， 等. 甲型流感病毒基因組的進(jìn)化與變異［J］. 中國病毒病雜志， 2018， 8（5）： 411-420.

CHEN W T， HUANG H， YU H J， et al. Evolution and variationin the genome of influenza A virus［J］. Chinese Journal of ViralDiseases， 2018， 8（5）： 411-420.

［14］ 甘芳容. H9N2禽流感病毒的滅活條件評(píng)估及季節(jié)性流感疫苗接種對(duì)H9N2的交叉保護(hù)性研究［D］. 北京： 中國疾控中心病毒病預(yù)防控制所， 2020.

GAN F R. Studies on viral inactivation and cross-protection sea?sonal influenza vaccination against H9N2 avian influenza virus［D］. Beijing： Chinese Center for Disease Control and Preven?tion of Viral Diseases， 2020.

［15］ 劉平平. 禽流感滅活油乳劑疫苗的交叉保護(hù)作用［J］. 山東畜牧獸醫(yī)， 2015， 36（1）： 26-27.

LIU P P. Cross-protection of inactivated oil emulsion vaccineagainst avian influenza［J］. Shandong Journal of Animal Scienceand Veterinary Medicine， 2015， 36（1）： 26-27.

［16］ 張官婷， 梁丹， 李安安， 等. 人感染H9N2禽流感相關(guān)研究進(jìn)展［J］. 中國公共衛(wèi)生， 2022， 38（10）： 1359-1363.

ZHANG G T， LIANG D， LI A A， et al. Human infection ofH9N2 avian influenza viruses： progress in epidemi-ological re?search［J］. Chinese Journal of Public Health， 2022， 38（10）：1359-1363.

［17］ 秦思源， 孫賀廷， 耿海東， 等. 野生動(dòng)物與外來人獸共患?。跩］. 野生動(dòng)物學(xué)報(bào)， 2019， 40（1）： 204-208.

QIN S Y， SUN H T， GENG H D， et al. Wildlife and exotic zoo?noses［J］. Chinese Journal of Wildlife， 2019， 40（1）： 204-208.

基金項(xiàng)目：廣西野生動(dòng)物救護(hù)與疫源疫病監(jiān)測(cè)專題研究項(xiàng)目（GXZTYJXM202101）