【摘 要】目的：探討蛋白激酶RNA樣ER激酶（protein kinase RNA-like ER kinase，PERK）信號(hào)通路介導(dǎo)的線粒體未折疊蛋白反應(yīng)（mitochondrial unfolded protein response，mtUPR）在缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemic brain injury，HIBI）中的作用。方法：將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)（Sham）組和5個(gè)HIBI亞組（HIBI后3、6、12、24、48 h）。用于蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)PERK、轉(zhuǎn)錄激活因子4（activating transcription factor 4，ATF4）、熱休克蛋白60（heat shock protein 60，HSP60）蛋白的時(shí)程表達(dá)。將大鼠隨機(jī)分為Sham組、HIBI組、HIBI + PERK組和HIBI+載體（Vector）組，每組15只。HIBI+PERK組和HIBI+Vector組大鼠在HIBI手術(shù)前1 h，將基于腺病毒相關(guān)病毒（adeno-associated virus，AAV）的PERK過(guò)表達(dá)質(zhì)?；駻AV載體注射到腦室內(nèi)，用于特異性表達(dá)PERK。在HIBI后24 h進(jìn)行FJC染色分析神經(jīng)元變性和DHE染色、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分析氧化應(yīng)激。將大鼠隨機(jī)分為Sham組、HIBI組、HIBI+PERK激動(dòng)劑（CCT020312）組，每組12只。在HIBI手術(shù)前1 h，向HIBI+CCT020312組大鼠腦室內(nèi)注射CCT020312。在HIBI后3周進(jìn)行開(kāi)闊場(chǎng)地測(cè)試和莫里斯水迷宮測(cè)試。結(jié)果：與Sham組相比，PERK、ATF4、HSP60在HIBI后3 h開(kāi)始明顯升高，在12 h達(dá)到高峰，然后逐漸下降，直到48 h（F=60.23、56.72、74.31，均Plt;0.001）。與HIBI組相比，HIBI+PERK組神經(jīng)元變性的數(shù)量（100.2±3.1 vs. 582.4±15.7，Plt;0.001）、活性氧（reactive oxygen species，ROS）（42.4±2.9 vs. 17.7±2.1，Plt;0.01）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）（0.81±0.06 vs. 0.54±0.04，Plt;0.001）水平顯著降低，和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSHPx）（112.4±3.6 vs. 177.5±6.6，Plt;0.05）、超氧化物歧化酶（superoxide Dismutase，SOD）活性（46.3±1.9 vs. 64.2±2.3，Plt;0.05）活性明顯增加。與Sham組相比，HIBI組大鼠海馬組織中PERK（1.00±0.03 vs. 1.66±0.08，Plt;0.01）、ATF4（1.00±0.04 vs.1.53±0.06，Plt;0.05）、動(dòng)力蛋白相關(guān)蛋白1（dynamin-related protein 1，Drp1）（1.00±0.02 vs. 1.98±0.07，Plt;0.01）、HSP60（1.00±0.03 vs. 1.37±0.04，Plt;0.05）蛋白表達(dá)均明顯增加（Plt;0.05）。與HIBI組相比，HIBI+PERK組大鼠海馬組織中PERK（1.66±0.08vs. 2.95±0.17，Plt;0.01）、ATF4（1.53±0.06 vs. 3.42±0.22，Plt;0.01）、HSP60（1.37±0.04 vs. 2.03±0.09，Plt;0.05）蛋白表達(dá)均明顯增加（F=46.72、30.63、20.64，Plt;0.001），和Drp1（1.98±0.07 vs. 1.04±0.05，Plt;0.05）蛋白表達(dá)明顯降低（F=35.72，Plt;0.001）。HIBI+CCT020312組的平均逃避潛伏期和平臺(tái)穿越次數(shù)均較HIBI組明顯增加（F=246.84、113.62，Plt;0.001）。結(jié)論：PERK減輕HIBI模型誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和神經(jīng)元凋亡，其機(jī)制可能涉及PERK/ATF4信號(hào)通路對(duì)mtUPR的調(diào)節(jié)。通過(guò)CCT020312給藥具有神經(jīng)保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】蛋白激酶RNA樣ER激酶；線粒體未折疊蛋白反應(yīng)；缺氧缺血性腦損傷；神經(jīng)元

【中圖分類號(hào)】R743.31 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【收稿日期】2023-09-25

缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemic brain in?jury，HIBI）主要由圍產(chǎn)期窒息引起，發(fā)生率為2.5/千，通常會(huì)導(dǎo)致長(zhǎng)期的神經(jīng)損傷和障礙（如學(xué)習(xí)和記憶障礙）[1]。盡管低溫治療已在臨床上批準(zhǔn)用于HIBI，但治療效果并不令人滿意，并且在最佳治療窗口內(nèi)（HIBI 后6 h 內(nèi)）進(jìn)行低溫干預(yù)可能很困難[2-3]。此外，由于對(duì)HIBI相關(guān)的確切潛在機(jī)制和病理生理學(xué)了解不足，個(gè)性化治療的發(fā)展受到限制；因此，進(jìn)一步的研究是必要的，以適應(yīng)HIBI治療方案。神經(jīng)元損傷是導(dǎo)致HIBI后認(rèn)知功能障礙的直接原因[4]。氧化應(yīng)激被認(rèn)為是導(dǎo)致神經(jīng)元損傷的重要機(jī)制[5]。在實(shí)驗(yàn)性模型中，抗氧化治療具有神經(jīng)保護(hù)和抗血管痙攣?zhàn)饔肹6]。線粒體是活性氧（reactiveoxygen species，ROS）的重要產(chǎn)生者，也是氧化應(yīng)激的主要場(chǎng)所，氧化應(yīng)激可以破壞線粒體的完整性，并在許多病理狀態(tài)下引發(fā)線粒體功能障礙[7]。已證實(shí)線粒體功能障礙可引起多種神經(jīng)系統(tǒng)異常[8]。線粒體生物發(fā)生在維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)中線粒體的完整性方面起著重要的作用；其中線粒體未折疊蛋白反應(yīng)（mitochondrial unfolded protein response，mtUPR）通過(guò)調(diào)節(jié)分子伴侶和線粒體相關(guān)蛋白酶的轉(zhuǎn)錄而被激活，以恢復(fù)線粒體功能[9-10]。最近研究表明，mtUPR參與了受損線粒體的修復(fù)，以減輕帕金森氏病毒介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷[11]。此外，mtUPR是細(xì)胞適應(yīng)低氧微環(huán)境的一種自我保護(hù)過(guò)程[12]。然而，HIBI期間mtUPR在海馬神經(jīng)元損傷中的作用仍不清楚。蛋白激酶RNA 樣ER 激酶（protein kinaseRNA-like ER kinase，PERK）是一種氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子，參與氨基酸的代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)以及蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)的維持[13]。研究表明，PERK 與線粒體功能密切相關(guān)[14]。最近1項(xiàng)研究報(bào)道，PERK可以通過(guò)誘導(dǎo)mtUPR來(lái)減輕肺泡上皮細(xì)胞的損傷[15]。因此，這項(xiàng)研究重點(diǎn)分析了HIBI期間PERK通路在新生大鼠海馬組織中的時(shí)程表達(dá)，并分析PERK通路表達(dá)上調(diào)對(duì)mtUPR和海馬神經(jīng)元損傷的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

7 d齡Sprague-Daw ley大鼠購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，飼養(yǎng)在無(wú)特定病原體的動(dòng)物區(qū)，溫度為（24±1） ℃，光照/黑暗周期為12 h，可隨意進(jìn)食和飲水。本研究中使用的方法和協(xié)議由本院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 新生兒HIBI模型

參照文獻(xiàn)方法建立新生兒HIBI模型[16]。在七氟醚麻醉后5 min內(nèi)，通過(guò)頸部的小切口，使用7-0外科手術(shù)絲線永久結(jié)扎大鼠（性別比為1∶1）的左側(cè)頸總動(dòng)脈。喚醒后讓大鼠恢復(fù)2 h。此后，將大鼠幼仔置于8%O2、92%N2和37 ℃下的低氧室中2 h。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)

1.3.1 實(shí)驗(yàn)1 將24只大鼠分為假手術(shù)（Sham）組（n=6）和5個(gè)HIBI亞組[HIBI后3 h（n=3）、6 h（n=3）、12 h（n=3）、24 h（n=6）、48 h（n=3）]。各組取3只用于蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)PERK、轉(zhuǎn)錄激活因子4（activating transcription factor 4，ATF4）、熱休克蛋白60（heat shock protein 60，HSP60）蛋白的時(shí)程表達(dá)。此外，將假手術(shù)組和HIBI 24 h亞組其余3只通過(guò)雙重?zé)晒馊旧M(jìn)行PERK的細(xì)胞定位。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)2 將60 只大鼠隨機(jī)分為Sham 組、HIBI 組、HIBI+PERK 組和HIBI+載體（Vector）組，每組15只。HIBI+PERK組和HIBI+Vector組大鼠在HIBI手術(shù)前1 h，將基于腺病毒相關(guān)病毒（adeno-associated virus，AAV）的PERK過(guò)表達(dá)質(zhì)?；駻AV載體（1×1012 vg/mL，3 μL）注射到腦室內(nèi)，用于特異性表達(dá)PERK。在HIBI 后24 h 進(jìn)行DHE 染色（n=4）、FJC染色（n=4）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（n=6）、蛋白質(zhì)印跡（n=6）和免疫熒光染色（n=4）。

1.3.3 實(shí)驗(yàn)3 將36 只大鼠隨機(jī)分為Sham 組、HIBI 組、HIBI+PERK激動(dòng)劑（CCT020312）組，每組12只。在HIBI手術(shù)前1 h，向HIBI+CCT020312組大鼠腦室內(nèi)注射3 pmol/3 μLCCT020312（溶解在含有1%二甲基亞砜中，美國(guó)MedChem?Express公司）。在HIBI后3周進(jìn)行開(kāi)闊場(chǎng)地測(cè)試（n=8）和莫里斯水迷宮測(cè)試（n=8）。

1.4 蛋白質(zhì)印跡

收集實(shí)驗(yàn)大鼠的海馬組織，并在放射免疫沉淀分析裂解緩沖液中制備勻漿（上海碧云天公司）。通過(guò)電泳分離等量的蛋白質(zhì)到聚偏二氟乙烯膜，用初級(jí)抗體在4 ℃探測(cè)膜過(guò)夜，并在室溫下用辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二級(jí)抗體（美國(guó)Affinity公司）孵育2 h。使用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光對(duì)免疫反應(yīng)性進(jìn)行可視化。使用的一抗如下：抗PERK 抗體（1∶1 000）、抗ATF4抗體（1∶1 000）、抗動(dòng)力蛋白相關(guān)蛋白1（dynamin-relatedprotein 1，Drp1）抗體（1∶1 000）、抗HSP60抗體（1∶1 000）、抗甘油醛3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydro?genase，GAPDH）抗體（1∶1 000，均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司）。

1.5 免疫熒光染色

制備石蠟包埋的腦切片（4 μm厚度），在室溫下用5%山羊血清（北京Solarbio公司）封閉切片30 min，然后在4 ℃下與抗PERK抗體（1∶50）、抗HSP60抗體（1∶60）孵育過(guò)夜。用Alexa Fluor 594山羊抗小鼠IgG（1∶400，美國(guó)Abcam公司）或Alexa Fluor 488 山羊抗兔IgG（1∶400，美國(guó)Abcam 公司）在37 ℃下反應(yīng)1 h。使用Hoechst 33342（美國(guó)Sigma公司）對(duì)細(xì)胞核染色15 min。由DMI8熒光顯微鏡（德國(guó)Leica公司）捕捉圖像。

1.6 氟玉C（fluoro-Jade C，F(xiàn)JC）染色

使用商業(yè)檢測(cè)試劑盒（德國(guó)Millipore公司）進(jìn)行FJC染色以評(píng)估退化的神經(jīng)元。腦切片與FJC反應(yīng)混合物在室溫下孵育1 h。切片用4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（4'，6-di?amidino-2-phenylindole，DAPI）染色以顯示細(xì)胞核。在DM2500 光學(xué)顯微鏡系統(tǒng)（德國(guó)Leica 公司）下觀察并獲得圖像。

1.7 ROS水平的測(cè)量

將新鮮制備的冷凍腦切片（10 μm）與2 μmol/L熒光染料二氫乙錠（dihydroethidium，DHE，美國(guó)Thermo Fisher Sci?entific公司）在37 ℃下在潮濕的室溫中避光孵育30 min。通過(guò)光學(xué)顯微鏡獲得DHE染色的圖像。

1.8 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定

分別用蛋白質(zhì)羰基（proteincarbonylation，PCO）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）檢測(cè)試劑盒分析腦氧化損傷指標(biāo)的水平。分別用SOD測(cè)定試劑盒和GSHPx測(cè)定試劑盒測(cè)定抗氧化因子超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSHPx）活性水平。所有試劑盒均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.9 開(kāi)闊場(chǎng)地測(cè)試（open-field test，OFT）

在HIBI 后第21 天使用黑色正方形開(kāi)放視野裝置（100 cm×100 cm×45 cm）進(jìn)行OFT。地板分為中心區(qū)和邊緣區(qū)，并在2次測(cè)試之間用70%的乙醇清洗。使用EthoVisionXT視頻跟蹤系統(tǒng)（荷蘭Noldus公司）監(jiān)測(cè)其活動(dòng)10 min，記錄運(yùn)動(dòng)、行進(jìn)距離和平均速度。

1.10 莫里斯水迷宮（morris water maze，MWM）

在HIBI 后第22～27 天進(jìn)行MWM 測(cè)試。將溫水（20±1） ℃注入1個(gè)圓形水池（直徑，160 cm；高度，60 cm）中，水深度為15 cm。連續(xù)5 d每天進(jìn)行4次訓(xùn)練。將8只大鼠分別從不同象限放入水中，并允許它們搜尋平臺(tái)長(zhǎng)達(dá)90 s。未能找到平臺(tái)的大鼠被引導(dǎo)至平臺(tái)。誘導(dǎo)所有大鼠在平臺(tái)上停留20 s。逃避潛伏期定義為到達(dá)平臺(tái)所需的時(shí)間。對(duì)于無(wú)法在規(guī)定時(shí)間內(nèi)找到平臺(tái)的大鼠，逃跑潛伏期記錄為90 s。在HIBI后第27天，將大鼠放入水中，并在沒(méi)有平臺(tái)的情況下自由游泳90 s。使用EthoVision XT 視頻跟蹤系統(tǒng)（荷蘭Noldus公司）監(jiān)測(cè)和分析逃避潛伏期、游泳路徑、游泳速度。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行所有統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（x±s）表示。采用單因素方差分析進(jìn)行多組間比較，隨后進(jìn)行LSD檢驗(yàn)或Dunnett的T3檢驗(yàn)組間兩兩比較。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 HIBI模型和HIBI后PERK、ATF4、HSP60的時(shí)程表達(dá)

與Sham組相比，PERK、ATF4、HSP60在HIBI后3 h開(kāi)始明顯升高，在12 h 達(dá)到高峰，然后逐漸下降，直到48 h（F=60.23、56.72、74.31，均Plt;0.001）（圖1A、B）。此外，雙重免疫熒光染色顯示PERK位于大腦皮質(zhì)的神經(jīng)元（NeuN）中，并且在HIBI后24 h，PERK陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)量明顯高于Sham組（圖1C）。

2.2 PERK參與調(diào)節(jié)保護(hù)HIBI后的神經(jīng)元變性、氧化應(yīng)激

FJC染色分析大鼠大腦海馬組織中神經(jīng)元變性情況顯示：與Sham 組相比，HIBI 組神經(jīng)元變性的數(shù)量明顯增加（Plt;0.001）。與HIBI組相比，HIBI+PERK組神經(jīng)元變性的數(shù)量明顯降低（Plt;0.01）（圖2A、表1）。DHE染色和ELISA分析大鼠大腦海馬組織中氧化應(yīng)激情況顯示：與Sham組相比，HIBI 組ROS、MDA、PCO 水平明顯增加（Plt;0.001），和GSHPx、SOD 活性明顯降低（Plt;0.001）。與HIBI 組相比，HIBI+PERK 組ROS、MDA、PCO 水平明顯降低（Plt;0.01），和GSHPx、SOD活性明顯增加（Plt;0.05）（圖2B、表1）。

2.3 PERK參與調(diào)節(jié)保護(hù)HIBI后的mtUPR調(diào)節(jié)

通過(guò)蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)大鼠大腦海馬組織中PERK、ATF4、Drp1、HSP60的蛋白表達(dá)水平情況顯示：與Sham組相比，HIBI組大鼠海馬組織中PERK、ATF4、Drp1、HSP60蛋白表達(dá)均明顯增加（Plt;0.05）。與HIBI組相比，HIBI+PERK組大鼠海馬組織中PERK、ATF4、HSP60蛋白表達(dá)均明顯增加（Plt;0.05），和Drp1蛋白表達(dá)明顯降低（Plt;0.05）（圖3A、表2）。此外，與免疫印跡分析一致，來(lái)自不同組的神經(jīng)元中HSP60也出現(xiàn)類似變化（圖3B）。

2.4 CCT020312治療可緩解HIBI相關(guān)的學(xué)習(xí)和記憶障礙

CCT020312是一種PERK激動(dòng)劑，本研究進(jìn)行了行為測(cè)試，以確定PERK/ATF4信號(hào)在HIBI誘導(dǎo)的學(xué)習(xí)和記憶障礙中的作用。OFT結(jié)果顯示，3組的平均速度和總距離差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。與Sham組相比，HIBI組的平臺(tái)穿越次數(shù)明顯降低（Plt;0.001）。與HIBI組相比，HIBI+CCT020312組的平臺(tái)穿越次數(shù)顯著增加（Plt;0.001）（表3）。此外，MWM結(jié)果表明，與Sham組相比，HIBI組的平均逃避潛伏期顯著降低（Plt;0.05）。HIBI+CCT020312 組的平均逃避潛伏期較HIBI組顯著增加（Plt;0.01）（表4）。

3 討 論

HIBI是新生兒腦損傷的一種常見(jiàn)形式，具有終身神經(jīng)損傷的高風(fēng)險(xiǎn)[17]。本研究的主要發(fā)現(xiàn)如下：①PERK/ATF4 信號(hào)通路在HIBI 后12 h 達(dá)到高峰，并在之后逐漸降低；②施用外源性PERK 促進(jìn)了mtUPR 相關(guān)蛋白HSP60 的表達(dá)，并在一定程度上保護(hù)了大腦免受HIBI 的影響；③PERK 激動(dòng)劑CCT020312在一定程度上恢復(fù)了HIBI導(dǎo)致的學(xué)習(xí)和記憶損傷。這些數(shù)據(jù)突出了PERK/ATF4信號(hào)通路可作為HIBI治療的潛在治療靶點(diǎn)。

線粒體生物發(fā)生在維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)中線粒體的完整性方面起著重要的作用[18]。最近研究證實(shí)，低氧微環(huán)境可能影響線粒體生物發(fā)生的基因變化[19]。另一項(xiàng)研究表明，線粒體抗氧化劑保護(hù)缺氧缺血性神經(jīng)元損傷[20-21]。當(dāng)線粒體應(yīng)激發(fā)生時(shí)，細(xì)胞通過(guò)激活mtUPR啟動(dòng)部分保護(hù)[22]。此外，mtUPR是細(xì)胞適應(yīng)低氧微環(huán)境的一種自我保護(hù)過(guò)程[12]。PERK/ATF4 通路被證明是調(diào)節(jié)mtUPR 的關(guān)鍵因子[23-24]。因此，本研究試圖確定PERK/ATF4通路調(diào)節(jié)的mtUPR對(duì)HIBI誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響。在目前的研究中，本課題組發(fā)現(xiàn)PERK、ATF4的表達(dá)和mtUPR相關(guān)蛋白HSP60在HIBI后12 h內(nèi)顯著上調(diào)，之后逐漸下調(diào)。外源性PERK 增加PERK/ATF4通路和HSP60表達(dá)。本研究結(jié)果表明，PERK/ATF4通路可能參與調(diào)節(jié)mtUPR激活。

細(xì)胞啟動(dòng)一系列適應(yīng)性修復(fù)保護(hù)機(jī)制，以抵抗線粒體功能障礙，如mtUPR。HSP60是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)代謝的mtUPR 相關(guān)分子，其具有與線粒體DNA 穩(wěn)定性相關(guān)的特異性結(jié)合活性，并維持線粒體功能[25]。PERK作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中啟動(dòng)未折疊蛋白反應(yīng)的傳感器之一，其能與線粒體通訊，調(diào)節(jié)線粒體相關(guān)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜（mitochondria-associated endoplasmic reticulummembranes，MAM）的氧化應(yīng)激[12]。此外，PERK 是MAM的主要成分之一，能與多功能主鏈蛋白相互作用，并在接觸部位調(diào)節(jié)整體代謝物如脂質(zhì)、ROS和Ca2+的交換。MAM也是啟動(dòng)自噬的關(guān)鍵位點(diǎn)，通過(guò)特定的調(diào)節(jié)蛋白清除有缺陷的細(xì)胞器和錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)[26]。因此，PERK 將信號(hào)從細(xì)胞核傳遞到這些膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器，這些細(xì)胞器形成一個(gè)相互連接的網(wǎng)絡(luò)來(lái)調(diào)節(jié)mtUPR。近年來(lái)，靶向異常的mtUPR信號(hào)是神經(jīng)系統(tǒng)疾病新的治療策略研究的焦點(diǎn)，并且研究證實(shí)PERK通路介導(dǎo)的mtUPR激活在神經(jīng)疾病中在治療作用，如神經(jīng)退行性疾病[27]。在本研究中，PERK過(guò)表達(dá)減輕了HIBI誘導(dǎo)的神經(jīng)元變性、氧化應(yīng)激，抑制Drp1觸發(fā)的線粒體凋亡?；谶@一發(fā)現(xiàn)，本課題組認(rèn)為PERK 可能調(diào)節(jié)mtUPR水平，并在HIBI模型中對(duì)神經(jīng)元損傷發(fā)揮保護(hù)作用。

由于對(duì)臨床醫(yī)生管理HIBI患者的現(xiàn)有方法不滿意，一些新的治療概念，包括外源性和內(nèi)源性修復(fù)策略，已被研究用于未來(lái)的臨床治療。外源性修復(fù)方法，如采用干細(xì)胞來(lái)取代丟失的神經(jīng)元，并將其整合到現(xiàn)有的宿主受損區(qū)域中，促進(jìn)生長(zhǎng)因子的釋放，以支持和刺激內(nèi)源性修復(fù)過(guò)程等[28]。然而，在這些方法轉(zhuǎn)化為臨床治療之前，需要克服許多障礙，如注射細(xì)胞（主要研究間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞）的長(zhǎng)期存活，以及患者未來(lái)將面臨的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[29]。相反，基于提高存活細(xì)胞的活力和功能的內(nèi)源性修復(fù)策略抵消了與外源性修復(fù)療法相關(guān)的缺點(diǎn)，這種策略在臨床翻譯中表現(xiàn)出更大的潛力，并吸引了當(dāng)今研究者的更多目光[30]。本研究中，利用大鼠HIBI模型，本研究發(fā)現(xiàn)了CCT020312（PERK信號(hào)化學(xué)激動(dòng)劑）治療可緩解HIBI相關(guān)的學(xué)習(xí)和記憶障礙。因此，CCT020312 可能是內(nèi)源性mtUPR 靶向治療的潛在候選物，以延緩甚至逆轉(zhuǎn)HIBI的進(jìn)程。

總之，本研究結(jié)果表明PERK 減輕HIBI 模型誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和神經(jīng)元凋亡，其機(jī)制可能涉及PERK/ATF4 信號(hào)通路對(duì)mtUPR 的調(diào)節(jié)。通過(guò)CCT020312 給藥具有神經(jīng)保護(hù)作用。這些結(jié)果在一定程度上為HIBI的治療提供了新的見(jiàn)解。需要強(qiáng)調(diào)的是，這項(xiàng)研究有以下局限性。首先，腦室注射CCT020312在臨床實(shí)踐中還沒(méi)有廣泛應(yīng)用。第二，雖然本研究關(guān)注的是PERK/ATF4信號(hào)通路，但其他途徑可能與mtUPR有關(guān)。因此，在未來(lái)的研究中應(yīng)進(jìn)一步考察PERK/ATF4信號(hào)通路的作用機(jī)制，并探討其他可能與mtUPR相關(guān)的途徑。

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（責(zé)任編輯：李青穎）