摘""要：桑黃（Sanghuangporus"spp.）水提物中多糖、萜烯類化合物等生物大分子具有抑制腫瘤細(xì)胞的作用，但桑黃水提物中小分子化合物的功能尚不明確。本研究通過3000"D超濾法獲得桑黃小分子化合物，通過雙熒光標(biāo)記法研究其對小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6的抑制活性，通過代謝組分析法解析其抑癌活性成分。結(jié)果表明：桑樹桑黃（Sanghuangporus"sanghuang"Sheng"H."Wu，"L."W."Zhou"amp;"Y."C."Dai）和楊樹桑黃（Phellinus"baumii）小分子化合物均能誘導(dǎo)小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6的損傷和凋亡，其抑制率分別為（38.64±4.35）%和（32.52±3.57）%；桑黃小分子化合物與桑黃粗多糖共同處理Hepa"1-6細(xì)胞，其抑制率則分別達(dá)到（77.27±6.21）%和（76.92±5.45）%；代謝組分析表明桑黃小分子化合物中包括玫瑰樹堿、左旋水蘇堿、腦苷-B等已知明確具有抑癌功能的化合物，同時(shí)鑒定出雜環(huán)類（6-氟吲哚、2，4，6-三甲基吡啶、1'-萘?；?2-甲基吲哚等）、核苷-堿基類（1-甲基腺苷、N6-甲基腺苷、2'-O-甲基腺苷等）、二肽類（如亮氨酸+*、異亮氨酸+*和γ-谷氨酰+*）、糖醇類（木糖醇、核糖醇、甘露醇、赤蘚糖醇等）等可能參與腫瘤抑制作用的活性物質(zhì)。研究表明桑黃水提物含有多種抑制腫瘤細(xì)胞的小分子化合物，且與桑黃粗多糖等生物大分子起到協(xié)同抑癌作用。研究結(jié)果為解析桑黃抑制腫瘤作用機(jī)制和功能物質(zhì)開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：桑黃；水提物；小分子化合物；小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6；抑癌活性中圖分類號：R285.5""""""文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Analysis"of"Anticancer"Activity"on"Mouse"Hepatocarcinoma"Cells"Hepa"1-6"of"Small"Molecule"Compounds"in"Sanghuangporus"spp."Aqueous"Extract

GENG"Tao1，"ZHOU"Qingxiang2，"WEI"Hongxian3，"LU"Fuping1，"WU"Huazhou1，"LOU"Dezhao1，"WANG"Shuchang1*

1."Environment"and"Plant"Protectionnbsp;Institute，"Chinese"Academy"of"Tropical"Agricultural"Sciences，"Haikou，"Hainan"571101，"China;"2."College"of"Ecology"and"Environment，"Hainan"University，"Haikou，"Hainan"570228，"China

Abstract："The"biological"macromolecules"such"as"polysaccharides"and"terpenes"in"Sanghuangporus"spp."aqueous"extract"have"inhibitory"effects"on"tumor"cells，"but"the"function"was"not"yet"clear."This"study"obtained"small"molecule"compounds"of"Sanghuangporus"sanghuang"Sheng"H."Wu，"L."W."Zhou"amp;"Y."C."Dai"and"Phellinus"baumii"aqueous"extracts"through"3000"D"ultrafiltration，"and"studied"the"inhibitory"activities"on"mouse"hepatocarcinoma"cells"Hepa"1-6"using"dual"fluorescence"labeling."The"anticancer"active"ingredients"were"analyzed"using"metabolomics"analysis."The"results"showed"that"the"small"molecule"compounds"of"S."sanghuang"Sheng"H."Wu"and"P."baumii"could"induce"injury"and"apoptosis"of"Hepa"1-6，"with"inhibition"rates"of"（38.64±4.35）%"and"（32.52±3.57）%，"respectively."Meanwhile，"the"inhibition"rates"of"small"molecule"compounds"reached"（77.27±6.21）%"and"（76.92±5.45）%，"respectively，"after"mixing"with"crude"polysaccharides."Metabolomic"analysis"showed"that"anti-cancer"small"molecular"agents"such"as"ellipticine，"betonicine，"cerebroside-B"etc.，"were"identified"in"the"aqueous"extract"of"Sanghuangporus"spp."Antitumor"related"substances"such"as"heterocyclic"compounds"（6-fluoroindole，"2，4，6-trimethylpyridine，"1'-naphthoyl-2-methylindole，"etc.），"nucleoside"and"bases"（1-methyladenosine，"N6-methyladenosine，"2'-O-methyladenosine，"etc.），"dipeptides"（leucine+*，"isoleucine+*，"γ-glutamine+*，"etc.），"sugar"alcohols"（xylitol，"ribose，"mannitol，"erythritol，"etc.），"were"identified"too."The"results"indicate"that"the"aqueous"extract"of"Sanghuangporus"spp."contains"multiple"small"molecular"agents"against"tumor"cells，"which"have"a"synergistic"anti-cancer"effect"with"biological"macromolecules"such"as"polysaccharides."This"would"provide"a"scientific"basis"for"understanding"the"mechanism"of"anti-tumor"of"Sanghuangporus"spp."and"the"development"and"application"of"functional"substances.

Keywords："Sanghuangporus"spp.;"aqueous"extract;"small"molecule"compounds;"mouse"hepatocarcinoma"cells"Hepa"1-6;"anti-cancer"activity

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2024.12.022

中藥桑黃含有豐富的生物活性成分，具有抗腫瘤[1-2]、增強(qiáng)免疫力[3]、抗氧化、抗菌消炎[4]等功效。研究認(rèn)為，桑黃主要利用多糖類和萜烯類物質(zhì)，協(xié)同黃酮類、甾醇類等活性物質(zhì)[5-7]，通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖和遷移、提升機(jī)體免疫力等多種途徑抑制腫瘤細(xì)胞[7-8]，已在日本、韓國和中國臺灣等地成為抗癌輔助保健品或藥物使用[9-10]。

桑黃多糖的主要成分為β-1，3-葡聚糖，能夠抑制B淋巴細(xì)胞瘤-2的表達(dá)，激活caspase-3、caspase-9，而誘導(dǎo)白血病細(xì)胞THP-1和鼻咽癌細(xì)胞HONE-1凋亡[1-2]；協(xié)同桑黃素（glucoobovatine），誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29、人肝癌細(xì)胞HepG-2"S期阻滯[8]；提高血淋巴白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-18水平而增強(qiáng)機(jī)體免疫力[3]；通過降低血管內(nèi)皮生長因子而降低人肝癌細(xì)胞H22、肺癌細(xì)胞S-180的黏附和遷移[6-7]。木三烯酮、β-乳香酸、呋喃類三萜等桑黃三萜物質(zhì)以游離形式或三萜糖苷形式存在時(shí)，發(fā)揮抑癌、護(hù)肝、溶血、抗HIV病毒等多種藥理活性[2-4，"9]。

現(xiàn)代分析技術(shù)表明，桑黃水提液中除多糖等生物大分子外，還含有氨基酸類、生物堿類、有機(jī)酸類、可溶性糖以及無機(jī)鹽等小分子化合物[11-13]，但其抑癌功能尚不明確。本研究通過3000"D超濾法獲得桑樹桑黃（Sanghuangporus"sanghuang"Sheng"H."Wu，"L."W."Zhou"amp;"Y."C."Dai）和楊樹桑黃（Phellinus"baumii）小分子化合物，通過雙熒光標(biāo)記法檢測其對腫瘤細(xì)胞的抑制作用，然后通過代謝組學(xué)和多重比較分析其化合物組成，以明確桑黃水提物中小分子化合物的抑癌機(jī)制。

1""材料與方法

1.1""材料

桑樹桑黃（Sanghuangporus"sanghuang"Sheng"H."Wu，"L."W."Zhou"amp;"Y."C."Dai）和楊樹桑黃（Phellinus"baumii"strainnbsp;XZ-01）子實(shí)體均購自山東古桑農(nóng)副產(chǎn)品股份有限公司；菌株均經(jīng)過ITS序列鑒定為中藥桑黃標(biāo)準(zhǔn)菌株。小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6為本實(shí)驗(yàn)室保存。

總還原糖檢測試劑盒（6304）、1×PBS（P1020）購自北京索萊寶生物科技有限公司。Gibco?"DMEM（高糖，21068028）購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司。

1.2""方法

1.2.1""桑黃子實(shí)體水提物的提取""稱取桑黃子實(shí)體粉末15.0"g，倒入錐形瓶中，按料液比1∶40（g/mL）加入600"mL蒸餾水；于80～100"℃，超聲波振蕩提取4"h；12"000"r/min離心10"min，取上清；真空泵抽濾，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積1/30，即20.0"mL。于–20"℃保存，備用。

1.2.2""桑黃粗多糖的提取和桑黃水提物的超濾""桑黃水提濃縮液加5倍體積無水乙醇，室溫下放置過夜，離心收集沉淀，真空冷凍干燥，用20.0"mL蒸餾水復(fù)溶，即為粗多糖溶液。

桑黃水提濃縮液用15.0"mL"3000"D超濾管（MerckMillipore，"UF900396），12"000"r/min離心30"min，用無菌水分別補(bǔ)足截留液和超濾液體積至20.0"mL。

1.2.3""桑黃總糖含量測定""參照總還原糖檢測試劑盒（6304）說明書，采用DNS法測定桑黃粗多糖溶液和桑黃水提物超濾液在620"nm處的吸光值，通過葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中總糖含量。

1.2.4""小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6活性分析和抑制率計(jì)算""小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6用DMEM稀釋至1×106個(gè)/mL，按每孔2.0"mL接種到6孔板中。設(shè)置2組處理：A組各孔分別加入桑樹桑黃水提物20.0"μL，桑黃粗多糖20.0"μL，桑黃水提物超濾液（即小分子化合物）20.0"μL，桑黃粗多糖10.0"μL+桑黃水提物超濾液10.0"μL，以加入20.0"μL"1×PBS為對照孔，每孔3個(gè)重復(fù)；B組各孔分別加入楊樹桑黃水提物20.0"μL，桑黃粗多糖20.0"μL，桑黃水提物超濾液（即小分子化合物）20.0"μL，桑黃粗多糖10.0"μL+桑黃水提物超濾液10.0"μL，以加入20.0"μL"1×PBS為對照孔，每孔3個(gè)重復(fù)。于37"℃，5%"CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48"h，觀察細(xì)胞狀態(tài)。用Hoechst"33258/EthD-III雙熒光標(biāo)記，激光共聚焦掃描顯微鏡（Olympus"FV1000"IX81）觀察細(xì)胞損傷及凋亡情況。

參照SUN等[12]的MTT法檢測腫瘤細(xì)胞抑制率。每孔小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6加入100"μL含5.0"mg/mL"MTT的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)4"h；每孔加入150"μL二甲基亞砜（DMSO），于37"℃孵育10"min。利用Multiskan"GO酶標(biāo)儀（Thermo）檢測OD570。按以下公式計(jì)算抑制率：抑制率=（對照組OD570-實(shí)驗(yàn)組OD570）/對照組OD570×100%。用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)（差值≥10），檢測抑制率下降（或提高）10%及以上的顯著性（P≤0.05）。

1.2.5""代謝組分析""對桑樹桑黃和楊樹桑黃水提物原液、3000"D超濾截留液、粗多糖液均設(shè)置3次生物學(xué)重復(fù)，每個(gè)樣品2.0"mL，送上海百趣生物醫(yī)學(xué)科技有限公司，采用Thermo"Vanquish液相色譜儀和Thermo"Orbitrap"Exploris"120質(zhì)譜儀LC-MS進(jìn)行全靶代謝組分析。

2""結(jié)果與分析

2.1""桑黃水提物對小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6的抑制活性

添加桑樹桑黃和楊樹桑黃提取物原液能夠引起小鼠肝癌細(xì)胞Hepa1-6的細(xì)胞膜損傷并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡（圖1A，圖2A），其抑制率分別達(dá)到（80.33±5.32）%和（83.51±4.62）%（圖3）。桑樹桑黃和楊樹桑黃粗多糖液亦能使小鼠肝癌細(xì)胞Hepa1-6的細(xì)胞膜損傷并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡（圖1B，圖2B），但其作用活性較水提物原液顯著降低，其抑制率分別為（48.15±4.27）%和（57.14±4.36）%（圖3），比水提物原液分別下降32.18%和26.37%。桑黃粗多糖液中的總糖含量與水提物原液的總糖含量差異不顯著（圖4），說明采用乙醇沉淀法提取粗多糖的過程中損失了部分抗癌活性成分。

桑樹桑黃和楊樹桑黃提取物3000"D超濾液亦能對小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6造成損傷和誘導(dǎo)凋亡（圖1C，圖2C），其抑制率分別為（38.64±4.35）%和（32.52±3.57）%（圖3），而且其超濾液中總糖含量僅分別為（1.15±0.35）mg/mL和（1.44±0.42）mg/mL（圖4），說明桑黃水提物中含有分子量≤3000"Da的非還原糖類的抗癌活性成分。

用桑樹桑黃和楊樹桑黃粗多糖液分別與其超濾液共同處理小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6，能夠顯著提高細(xì)胞膜損傷和細(xì)胞凋亡率（圖1D，圖2D），其抑制率分別達(dá)到（77.27±6.21）%和（76.92±5.45）%（圖3）。說明桑黃水提物中的小分子化合物能夠與桑黃粗多糖協(xié)同抑制小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6。

2.2""桑黃水提液代謝組分析

如表1所示，桑樹桑黃水提物原液中共檢測到17"140個(gè)有效化合物，其中，特有化合物5171個(gè)，可匹配注釋物質(zhì)1861個(gè)，未知化合物15"279個(gè)；一級匹配注釋（Level"1）化合物381個(gè)，二級匹配注釋（Level"2）化合物1343個(gè)，三級匹配注釋（Level"3）化合物137個(gè)。楊樹桑黃水提物原液共檢測到有效化合物17"292個(gè)，其中特有化合物5323個(gè)，可匹配注釋物質(zhì)1866個(gè)，未知化合物15"426個(gè)；一級匹配注釋（Level"1）化合物382個(gè)，二級匹配注釋（Level"2）化合物1338個(gè)，三級匹配注釋（Level"3）化合物146個(gè)。桑樹桑黃和楊樹桑黃水提物原液中可鑒別化合物總數(shù)差異不顯著。

如圖5和表1、表2所示，與桑黃水提物原液相比，桑黃超濾截留液中約有58%的化合物含量降低，而粗多糖液中約33%的化合物含量降低。桑樹桑黃超濾截留液中共檢測出9718個(gè)化合物，可匹配注釋化合物1551個(gè)；對比原液含量減少的化合物計(jì)11"644個(gè)，其中含量降低50%及以上化合物11"526個(gè)。桑樹桑黃粗多糖液中共檢測出12nbsp;947個(gè)化合物，可匹配注釋化合物1773個(gè)；對比原液含量減少的化合物計(jì)5713個(gè)，其中含量降低50%及以上化合物5259個(gè)。楊樹桑黃超濾截留液共檢測出化合物10"228個(gè)，可匹配注釋化合物1620個(gè)；對比原液含量減少的化合物計(jì)11"645個(gè)，其中含量降低50%及以上化合物11"544個(gè)。楊樹桑黃粗多糖液中共檢測出化合物14"580個(gè)，可匹配注釋化合物1809個(gè)；對比原液含量減少的化合物有5689個(gè)，其中含量降低50%及以上化合物5164個(gè)。

通過對2種桑黃水提物的超濾截留液、粗多糖溶液、水提物原液進(jìn)行組間交叉比對分析，得出差異小分子化合物數(shù)據(jù)集，表3為含量減少前20的小分子化合物，其中包括腦苷-B（cere broside-B）、玫瑰樹堿（ellipticine）、左旋水蘇堿（betonicine）等已知明確具有抑癌功能的化合物。6-氟吲哚（6-fluoroindole）、2，4，6-三甲基吡啶（2，4，6-trimethylpyridine）、DL-2，3-二氨基丙酸（DL-2，3-diaminopropionic"acid）以及1'-萘酰基-2-甲基吲哚（1'-naphthoyl-2-methylindole）等為桑樹桑黃和楊樹桑黃粗多糖、超濾截留液中含量均顯著減少的化合物。2'-O-甲基腺苷（2'-O-methyladenosine）、7-甲基鳥嘌呤（7-methy lguanine）、2-腺嘌呤（2-aminopurine）、2-（二乙氨基）乙酸[2-（diethylamino）acetic"acid]以及腦苷-B等為桑黃粗多糖溶液中含量顯著降低的化合物。腺苷（adenosine）、2-氧代-4-苯基丁酸（2-oxo-"4-phenylbutyric"acid）、木糖醇（xylitol）、核糖醇（ribitol）、阿糖醇（arabitol）、5-[2-（4-氯苯基）肼-1-亞基]-2，2-二甲基-1，3-二惡烷-4，6-二酮[5-[2-（4-chlorophenyl）"hydrazin-1-ylidene]-2，2-di methyl-1，3-dioxane-4，6-dione]、N-（5-氯吡啶-2-基）-5-丙基噻吩-3-甲酰胺[N-（5-chloropyridin- 2-yl）-5-propylthiophene-3-carboxamide]以及玫瑰樹堿等為超濾截留液中含量顯著降低的化合物。2-（2，6-二甲基嗎啉-4-基）乙醇[2-（2，6-dimethylmor pholin-4-yl）"ethanol]、左旋水蘇堿、羥基水楊酸（hydroxysydonic"acid）為桑樹桑黃特有的含量顯著降低的化合物；而亮氨酸-異亮氨酸（Leu-Ile）、1-甲基腺苷（1-methyladenosine）、N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine）以及3-氨基-2-哌啶酮（3-amino-2-piperidone）為楊樹桑黃特有的含量顯著降低的化合物。

3""討論

桑黃水提物中含有多糖、黃酮、甾體、萜烯、生物堿、氨基酸等多種活性物質(zhì)[13]。藥理學(xué)認(rèn)為，桑黃具有抗腫瘤、抗纖維化、抗氧化、增強(qiáng)免疫力以及抑制血管增生等功效[2-4]。此外桑黃中亦分離出牛奶樹堿（hispidin）、咖啡酸（caffeic"acid）、煙堿酮（inotilone）、纖孔菌素A（phellinsin"A）、苯乙烯吡喃酮（baumin）等抗氧化、消炎和增強(qiáng)免疫力的小分子化合物[14-16]。

3.1""傳統(tǒng)桑黃抑癌機(jī)理

桑黃水提物對肝癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、腦癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、口腔癌、宮頸癌等具有顯著的抑制作用[9]。桑黃水提物中的多糖、三萜類物質(zhì)協(xié)同桑黃素等黃酮類物質(zhì)通過多種渠道實(shí)現(xiàn)抑癌活性：（1）通過抑制細(xì)胞周期，造成細(xì)胞周期阻滯，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖[2，"8]；（2）通過增加凋亡相關(guān)蛋白，活化caspase表達(dá)，減少抗凋亡蛋白表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[7，"17]；（3）通過下調(diào)磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositide"3-kinases，"PI3K）表達(dá)、抑制絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B（RAC-alpha"serine/threonine-protein"kinase，"AKT）和哺乳動(dòng)物西羅莫司靶點(diǎn)（mammalian"target"of"rapamycin，"mTOR）磷酸化水平，干擾腫瘤細(xì)胞PI3K/AKT/mTOR信號通路[18]；通過降低細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular"regulated"protein"kinases，"ERK）、c-Jun"kinase（JNK）和p38的磷酸化水平，抑制絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated"protein"kinase，"MAPK）通路，抑制腫瘤細(xì)胞增殖和遷移[1，"18]；（4）促進(jìn)干擾素（interferon，"IFN）和白細(xì)胞介素（IL）合成，抑制腫瘤壞死因子合成，調(diào)高機(jī)體免疫機(jī)能[3-4]。

3.2""桑黃水提物中小分子化合物的抑癌活性

桑黃水提物中小分子化合物的抑癌活性研究鮮有報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)，桑黃小分子化合物能夠顯著抑制小鼠肝癌細(xì)胞Hepa"1-6。本研究通過代謝組分析從桑黃水提液中鑒定出玫瑰樹堿、左旋水蘇堿、腦苷-B等具有腫瘤細(xì)胞抑制活性的化合物，同時(shí)鑒定出6-氟吲哚、2，4，6-三甲基吡啶、1'-萘?；?2-甲基吲哚等雜環(huán)類，1-甲基腺苷、N6-甲基腺苷、蟲草素、2'-O-甲基腺苷、2-腺嘌呤等核苷-堿基類，亮氨酸+*、異亮氨酸+*和γ-谷氨酰+*等二肽-環(huán)肽類，木糖醇、核糖醇等糖醇類等可能參與腫瘤細(xì)胞抑制化合物合成或直接作用于腫瘤細(xì)胞生長的功能活性物質(zhì)。

3.2.1""生物堿類化合物及其抑癌機(jī)理""本研究在桑黃中鑒定出玫瑰樹堿和左旋水蘇堿。玫瑰樹堿主體為吲哚結(jié)構(gòu)，由共平面的3個(gè)六元環(huán)和1個(gè)五元環(huán)組成，玫瑰樹堿及9-羥基-N2-甲基玫瑰樹堿（NSC264-137）等衍生物對黑色素瘤、肉瘤、肝癌、結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌等腫瘤細(xì)胞均有抑制作用[19-20]。玫瑰樹堿及其衍生物能夠通過調(diào)節(jié)IL-6、IL-18、caspase"3、caspase"4、gasdermin"D等基因表達(dá)，以及提高腫瘤細(xì)胞活性氧（reactive"oxygen"species，"ROS）水平等，誘導(dǎo)胰腺癌PANC-1細(xì)胞焦亡和損傷[21]。玫瑰樹堿亦可上調(diào)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)分子A和B（major"histocompatibility"complex"class"Ⅰ-related"chain"A"and"B，"MICA/B）的表達(dá)水平，進(jìn)而提高自然殺傷（natural"killer，"NK）細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的識別與殺傷效率[22]。左旋水蘇堿能夠通過抑制平滑肌肌動(dòng)蛋白2（smooth"muscle"actin"2，"ACTG2）的表達(dá)，進(jìn)而下調(diào)VEGF、bFGF、TNF-α及PDGF等血管生成因子的表達(dá)，抑制乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖與侵襲[23-25]。

3.2.2""雜環(huán)類化合物及其抑癌機(jī)理""6-氟吲哚、1'-萘酰基-2-甲基吲哚是合成吲哚系列抗腫瘤藥物、精神病藥物所需的重要中間體[26-29]。玫瑰樹堿的6位氮游離對其抗腫瘤活性尤其重要，而甲基吲哚是化學(xué)合成玫瑰樹堿的出發(fā)底物之一[30]，因此本研究推測桑黃中可能存在以吲哚衍生物為底物合成玫瑰樹堿等抗腫瘤藥物的生物代謝途徑，但桑黃中的吲哚類化合物抑制腫瘤細(xì)胞的分子機(jī)制有待深入研究。3-甲基吡啶是另一類抑癌藥物合成的重要原料，通過分子改造和修飾，可以得到含有3-甲基吡啶結(jié)構(gòu)的衍生物，具有抗炎、抗菌、抗腫瘤等生物活性[31]。

3.2.3""核苷-堿基類化合物及其抑癌機(jī)理""桑黃中含有大量的腺苷類物質(zhì)，如腺苷、N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine，"m6A）、N1-甲基腺苷、2'-O-甲基腺苷等。其中腺苷是桑樹桑黃和鮑氏桑黃中含量最高的化合物，推測桑黃中可能存在復(fù)雜多樣的腺苷類衍生物代謝合成途徑。N6-甲基腺苷等參與的甲基化修飾是一種動(dòng)態(tài)且可逆的修飾，參與mRNA、miRNA的合成、翻譯等生物過程，引起基因的表達(dá)異常，與白血病、肝癌、肺癌、宮頸內(nèi)膜癌、胰腺癌和乳腺癌等多種癌癥的發(fā)生密切關(guān)聯(lián)[32-34]。腫瘤細(xì)胞可能通過吸收大量的甲基腺苷類物質(zhì)導(dǎo)致mRNA的m6A修飾水平提高，進(jìn)而引起腫瘤細(xì)胞凋亡[34-35]。本研究發(fā)現(xiàn)，桑黃中含有蟲草素，研究表明蟲草素具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗三高、肺腎保護(hù)以及抗菌消炎等功能[36-38]。但桑黃中是否真正存在蟲草素相關(guān)代謝途徑需進(jìn)一步驗(yàn)證。

3.2.4""二肽-環(huán)肽類化合物及其抑癌機(jī)理""桑黃水提物中含有的大量的亮氨酸+*（Leu-Val、Leu-Trp、Leu-Thr、Leu-Leu、Leu-Ile、Leu-Gly、Leu-Glu）、異亮氨酸+*（Ile-Tyr、Ile-Pro、Ile-Leu、Ile-Glu、Ile-Gln、Ile-Asp、Ile-Asn）等二肽類化合物，以及Leu-Gly-Leu、Val-Gly-Val、Trp-Gly-"Trp、Gly-Pro-Arg、Gly-Gly-Leu、Arg-Pro-Pro等三肽類化合物，但其具體抑癌機(jī)制尚不明確。環(huán)二肽、環(huán)三肽等肽類具有抗菌消炎、抗氧化、抑制腫瘤等生物學(xué)活性[39-40]，推測桑黃水提物中的二肽和三肽類物質(zhì)可能參與環(huán)二肽、環(huán)三肽化合物的合成。此外本研究還發(fā)現(xiàn)桑黃中含有大量的γ-谷氨酰+*二肽化合物，如γ-谷氨酰丙氨酸、γ-谷氨酰蘇氨酸、γ-谷氨酰賴氨酸、γ-谷氨酰谷氨酰胺、γ-谷氨酰谷氨酸等。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（gamma-glutamyltransferase，"GGT）酶活在原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性腫瘤中異常升高，是重要的腫瘤臨床檢測指標(biāo)，而補(bǔ)充谷氨酰丙氨酸等化合物可以有效控制腫瘤惡化[41-44]。本研究推測桑黃中大量的γ-谷氨酰+*等二肽類物質(zhì)可能通過調(diào)節(jié)谷胱甘肽（glutathione，"GSH）代謝途徑，調(diào)節(jié)ROS水平，抑制腫瘤細(xì)胞增殖和遷移。

3.2.5""其他化合物""（1）腦苷脂-B。本研究在桑黃中鑒定出腦苷-B。腦苷-B是一種中性鞘糖脂，廣泛存在于動(dòng)植物及低等生物的細(xì)胞膜中，通過活化Ⅱ型NKT細(xì)胞快速分泌IL-10、IL-4、IL-13、IFN-γ等細(xì)胞因子，發(fā)揮抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)以及調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)等功效[45-46]。

（2）糖醇類物質(zhì)。桑黃中含有大量的糖醇類物質(zhì)，包括木糖醇、核糖醇、甘露醇、赤蘚糖醇、葡萄糖醇以及阿拉伯糖醇等除半乳糖外幾乎所有的常見單糖糖醇。糖醇類物質(zhì)可能通過破壞腫瘤細(xì)胞的能量代謝，延緩細(xì)胞增殖抑制腫瘤細(xì)胞；亦可能參與多種糖醇酯、糖醇蛋白、糖苷類物質(zhì)的合成，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞代謝紊亂[47]。桑黃中還鑒定出甘露糖赤蘚糖醇酯（mannosylerythritol"lipids，"MEL），為糖脂類生物表面活性劑，具有抗菌、抗氧化、界面活性和抗腫瘤等活性，但其抑制腫瘤細(xì)胞的分子機(jī)制尚不明確[48]。

綜上所述，桑黃水提物中鑒定出玫瑰樹堿、左旋水蘇堿、腦苷-B等具有抑癌活性的小分子化合物，以及多種抑癌化合物合成的中間體分子，為解析桑黃抑癌的分子機(jī)制提供了新的見解。此外桑黃中還有10"000余種未知化合物，可能蘊(yùn)藏更豐富的抑癌或其他醫(yī)藥功能物質(zhì)，需要進(jìn)一步純化和功能鑒定。

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