摘""要：本研究旨在分離并鑒定造成蘇鐵屬植物羽葉褐斑病的病原真菌，篩選出對該病原真菌具有強(qiáng)烈抑制作用的化學(xué)防治藥劑，為蘇鐵的保護(hù)提供理論依據(jù)。首先，通過病斑組織分離、純化后回接滇南蘇鐵葉片，根據(jù)科赫氏法完成其致病性驗(yàn)證。其次，對其進(jìn)行形態(tài)鑒定；再應(yīng)用SSU、LSU、GAPDH、tef1、rpb2、Alt、OPA10-2、ITS"8個(gè)基因序列，構(gòu)建多基因進(jìn)化樹進(jìn)一步鑒定病原真菌。最后，通過平板抑菌試驗(yàn)，從7種化學(xué)藥劑中篩選出高效的抗菌藥劑。本研究發(fā)現(xiàn)，形態(tài)學(xué)鑒定與多基因聯(lián)合進(jìn)化分析表明，該病原菌為鏈格孢屬的巴斯基鏈格孢（Alternaria"burnsii）；在7種化學(xué)藥劑平板抑菌試驗(yàn)中，氟酰羥·苯甲唑效果最佳，其濃度在0.67"mg/L時(shí)抑菌率達(dá)到73.48%。

關(guān)鍵詞：蘇鐵；褐斑??；病原鑒定；巴斯基鏈格孢；平板抑菌試驗(yàn)。中圖分類號：S432.4+4""""""文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Identification"of"Pathogen"Causing"Brown"Spot"in"Leaves"of"Cycas"and"Its"Chemical"Control"Agent"Screening

QIN"Qian1，"DING"Liqiong1，"CHI"Zhaojin1，"LU"Zuzheng1，"SHAN"Bin1，"XIE"Zhenxing1，"HUANG"Xinyi1，"XU"Tian2*

1."Guangxi"Subtropical"Crops"Research"Institute，"Nanning，"Guangxi"530001，"China;"2."Nanning"Botanical"Garden，"Nanning，"Guangxi"530029，"China

Abstract："This"research"aimed"to"identify"a"pathogenic"fungus"of"the"brown"spot"disease"in"the"leaves"of"Cycas"and"screen"for"its"chemical"control"agents，"which"provides"a"theoretical"basis"for"the"protection"of"Cycas."The"pathogenic"fungus"was"isolated"from"the"lesion"spots"in"some"Cycas"leaves."The"pathogenicity"of"the"fungus"was"confirmed"by"isolating"and"purifying"the"infected"leaf"tissuesnbsp;and"reintroduced"to"thenbsp;healthy"leaves"of"Cycas"diannanensis"following"Koch’s"postulates."Morphological"identification"of"the"pathogenic"fungus"was"conducted."To"further"confirm"the"identification，"a"phylogenetic"tree"was"constructed"using"eight"gene"sequences："SSU，"LSU，"GAPDH，"tef1，"rpb2，"Alt，"OPA10-2"and"ITS."Effective"chemical"control"agents"were"screened"from"seven"chemical"agents"by"inhibition"assay"in"vitro."Phylogenetic"analyses"showed"that"this"pathogen"was"Alternaria"burnsii."Among"the"tested"chemical"agents，"the"most"effective"inhibition"was"fluoxastrobin，"which"displayed"73.48%"inhibition"rate"at"a"concentration"of"0.67"mg/L.

Keywords："Cycas;"brown"spot;"pathogen"identification;"Alternaria"burnsii;"the"inhibition"assay"in"vitro

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2024.08.017

我國蘇鐵屬植物種類豐富，主要包括：蘇鐵（Cycas"revoluta）、叉孢蘇鐵（C."segmentifida）、叉葉蘇鐵（C."bifida）、寬葉蘇鐵（C."balansae）、長葉蘇鐵（C."dolichophylla）、單羽蘇鐵（C."simplicipinna）、篦齒蘇鐵（C."pectinata）、多歧蘇鐵（C."multipinnata）、銹毛蘇鐵（C."ferruginea）、灰干蘇鐵（C."hongheensis）、六籽蘇鐵（C."sexseminifera）、陳氏蘇鐵（C."chenii）、四川蘇鐵（C."szechuanensis）、德保蘇鐵（C."debaoensis）、貴州蘇鐵（C."guizhouensis）、臺灣蘇鐵（C."taiwaniana）、滇南蘇鐵（C."diannanensis）、攀枝花蘇鐵（C."panzhihuaensis）、臺東蘇鐵（C."taitungensis）和譚清蘇鐵（C."tanqingii）[1]。由于蘇鐵屬植物化石記錄豐富，它們?yōu)楣派飳W(xué)、古氣候?qū)W及古地理研究提供了大量證據(jù)，也為研究種子植物的起源和進(jìn)化提供了重要線索[2]。蘇鐵屬早在1974年就被納入《瀕危野生動植物物種國際貿(mào)易公約》（CITES）保護(hù)范圍。在我國，蘇鐵屬在1996年被列為一級保護(hù)植物。目前，在我國多個(gè)地區(qū)，已專門為蘇鐵建立自然保護(hù)區(qū)。其中，遷地保護(hù)是一種有效的保護(hù)手段。南寧植物園（南寧青秀山）從1998年至今遷入蘇鐵屬、非洲鐵屬、澤米鐵屬等蘇鐵類植物1萬多株[3]。蘇鐵病害不僅破壞其觀賞價(jià)值，也是目前造成樹木死亡的主要原因之一，對蘇鐵資源的保護(hù)利用構(gòu)成嚴(yán)重威脅。因此，對南寧植物園進(jìn)行系統(tǒng)性的蘇鐵病害調(diào)查十分有必要。

目前，已有報(bào)道表明，蘇鐵屬真菌性病害主要包括由炭疽菌屬（Colletotrichum）的兩個(gè)種C."siamense[4]和C."cycadis[5]侵染引起的葉斑病，由蘇鐵擬莖點(diǎn)霉（Phomopsis"cycadis）引起的蘇鐵葉枯病[6]，由蘇鐵殼二孢菌（Ascochyta"cycadia）引起的蘇鐵白斑病[7]，由蘇鐵間座殼菌（Diaporthe"cycasis）引起蘇鐵葉枯病[8]，由茄腐皮鐮刀菌（Fusarium"solani）引起的蘇鐵根莖腐爛病[9]，由蘇鐵擬盤多毛孢（Pestalotiopsis"cycadis），蘇鐵殼蠕孢（Stagonospora"caricinella），鏈格孢屬（Alternaria）、葉點(diǎn)霉屬（Phyllosticta）和色二孢屬（Diplodia）引起的葉斑病[10-11]，由煤炱菌屬（Capnodium）引起的蘇鐵煤污病[12]以及由殼針孢屬（Septoria）引起的蘇鐵葉枯病[13]。曾報(bào)道印度有鏈格孢屬（Alternaria）和膠孢炭疽菌（C."gloeosporioides）引起的蘇鐵葉部病害。在美國佛羅里達(dá)和巴基斯坦有莖點(diǎn)霉屬（Phoma"sp.）引起的蘇鐵葉枯病[14-15]。

針對Colletotrichum"sp.、P."cycadis和A."cycadia引起的葉斑病所使用的化學(xué)防治藥劑主要包括多菌靈、苯甲丙環(huán)唑和戊唑醇[3]。放線菌屬（Streptomyces）及其次生代謝物對A."alternata的抑制率可達(dá)到（65.43±1.63）%[16]。但與大田作物相比，在蘇鐵上使用的化學(xué)藥劑種類報(bào)道較少。

我們在南寧植物園的蘇鐵園采集了多種病樣標(biāo)本，其中包括發(fā)病羽片及莖稈標(biāo)本，寄主包含德保蘇鐵（C."debaoensis）、篦齒蘇鐵（C."pectinata）、滇南蘇鐵（C."diannanensis）、叉葉蘇鐵（C."bifida）、叉孢蘇鐵（C."segmentifida）等。對所采集病害標(biāo)本進(jìn)行單孢分離純化，得到82個(gè)菌株。根據(jù)ITS區(qū)域?qū)@些真菌進(jìn)行初步鑒定，這些菌株主要包括炭疽菌屬（Colletotrichum）、鐮刀菌屬（Fusarium）、鏈格孢屬（Alternaria）、擬盤多毛孢屬（Pestalotiopsis）、葉點(diǎn)霉屬（Phyllosticta）、黑孢霉屬（Nigrospora）、枝孢菌屬（Cladosporium）、球毛殼屬（Chaetomium）、炭團(tuán)菌屬（Hypoxylon）、炭角菌屬（Xylaria）、葡萄座腔菌屬（Botryosphaeria）、曲霉屬（Aspergilus）、小新殼梭孢屬（Neofusicoccum），其中炭疽菌屬、葉點(diǎn)霉屬、鐮刀菌屬、鏈格孢屬、擬盤多毛孢屬的分離頻率最高。在已有文獻(xiàn)報(bào)道中，引起蘇鐵葉部病害的鏈格孢菌僅鑒定到屬。因此，需要進(jìn)一步明確致病的鏈格孢菌物種，并確認(rèn)其寄主類型。同時(shí)初步篩選出具有防治潛力的化學(xué)藥劑，為蘇鐵屬植物保護(hù)奠定理論基礎(chǔ)。

1""材料與方法

1.1""材料

用于分離病原真菌的蘇鐵品種：德保蘇鐵、滇南蘇鐵、叉孢蘇鐵。

用于致病性測定的蘇鐵品種：滇南蘇鐵。

1.2""病原菌的分離與純化

從南寧植物園青秀山蘇鐵園采集蘇鐵羽葉典型褐斑病的樣品，采用常規(guī)組織分離法分離病原菌[4]。待病原菌的菌落長出后，挑取頂端菌絲進(jìn)行純化。采用單孢分離法獲得純培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)入PDA斜面培養(yǎng)與保存。

1.3""病原菌的致病性測定

采用離體葉片無傷、刺傷接種和幼苗刺傷接種2種方法測定菌株致病性。從田間摘取健康且長勢較為一致的滇南蘇鐵羽葉，用清水洗凈，再用75%乙醇進(jìn)行表面消毒。用6"mm打孔器取供試菌株的菌餅分別接種于無傷和刺傷的離體羽葉，羽葉另一邊于無傷、刺傷處貼上空白PDA圓塊為對照，放入培養(yǎng)皿中保濕培養(yǎng)。離體羽葉接種，每個(gè)處理重復(fù)6次，無傷和刺傷接種共計(jì)24個(gè)樣品。同時(shí)接種滇南蘇鐵幼苗，每個(gè)處理接種3盆幼苗，每盆幼苗接種3片羽葉。保濕培養(yǎng)10～"15"d，觀察處理的發(fā)病情況。再從發(fā)病的部位對病原菌進(jìn)行分離。

1.4""病原菌的形態(tài)觀察及多序列系統(tǒng)發(fā)育樹分析

在PDA上培養(yǎng)病原菌，觀察菌落形態(tài)，培養(yǎng)14"d后，產(chǎn)生孢子。洗脫孢子制成孢子懸浮液，

在顯微鏡（Leica"DM2500"Microscope）下觀察。觀察樣本共計(jì)30份。

收集培養(yǎng)5～7"d的菌絲，使用Biospin真菌基因組DNA提取試劑盒提取菌株DNA。以DNA為模板，擴(kuò)增SSU（NS1/NS4）、ITS（ITS1/ITS4）[17]、LSU（LSUFd/LR5）[18]、GAPDH（GPD1/GPD2）[19]、tef1（EF1-728F/EF1-986R）[20]、rpb2（RPB2-5F2[21]/"fRPB2-7cR[22]）、Alt（Alt-for/Alt-rev）[23]和OPA10-2（OPA10-2R/OPA10-2L）[24]8個(gè)基因序列。擴(kuò)增所需引物如表2所示。

擴(kuò)增體系如下：2×Es"Taq"MasterMix"20"μL，DNA"1"μL，10"mmol/L上游引物與10"mmol/L下游引物各1"μL，ddH2O"17"μL。PCR擴(kuò)增條件為：94"℃預(yù)變性3"min；94"℃變性30"s，55"℃退火30nbsp;s，72"℃延伸1"min，共35個(gè)循環(huán)；72"℃終延伸5"min。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖進(jìn)行凝膠電泳，電壓為120"V，時(shí)間為30"min。在熒光圖像分析系統(tǒng)上成像拍照。將片段大小符合預(yù)期的擴(kuò)增產(chǎn)物送至廣州擎科生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測序，在NCBI（National"Center"for"Biotechnology"Information）數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行測序結(jié)果的BLAST分析，并選擇同源性相近的真菌種屬序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。并將本研究擴(kuò)增出來的正確序列提交至NCBI的

GenBank數(shù)據(jù)庫。通過MEGA6軟件對樣品及同源性相近的真菌種屬進(jìn)行進(jìn)化樹構(gòu)建。采用Neighbor-"Joining法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，bootstrap值為1000。

1.5""殺菌劑對病原菌室內(nèi)防效測定

測定啶氧菌酯、苯甲·丙環(huán)唑、氟酰羥·苯甲唑、苯甲·嘧菌酯、氟菌·肟菌酯、氯氟醚·吡唑酯、吡唑醚菌酯7種殺菌劑對蘇鐵褐斑病病原菌的抑菌效果。將殺菌劑配制成不同濃度的母液，將母液依次以5倍的比例稀釋成4個(gè)濃度梯度，制成含藥PDA平板，含藥平板為田間用量的1/30。加入ddH2O為空白對照，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)。用打孔器沿菌落外圍切成6"mm的菌餅，接種于含藥平板上，于（28±"1）℃培養(yǎng)箱中，黑暗培養(yǎng)7"d。通過菌落生長速率計(jì)算其抑菌率。采用十字交叉法測量菌落直徑，計(jì)算公式：相對抑菌率=（對照菌落平均直徑-處理菌落平均直徑）/對照菌落直徑×100%，以藥劑濃度對數(shù)值為自變量（x）、相對抑菌率的幾率值為因變量（y），建立毒力回歸方程，計(jì)算相關(guān)系數(shù)（R）和抑菌有效中濃度（ID50）。

2""結(jié)果與分析

2.1""蘇鐵褐斑病病原菌的分離與鑒定

在對青秀山蘇鐵病害進(jìn)行調(diào)查的過程中，在德保蘇鐵、滇南蘇鐵以及叉孢蘇鐵中觀察到一種褐色病斑，這種病斑中心呈淺褐色，邊緣呈深褐色，有的病斑周圍還有黃色暈圈（圖1A），在癥狀類似的葉部病斑上均可分離到病原菌。在滇南蘇鐵的離體葉片上，接種該病原菌，保濕培養(yǎng)10～15"d，羽葉上逐漸出現(xiàn)類似癥狀。離體葉片上的病斑中心和邊緣區(qū)別并不明顯，病斑周圍也有黃色暈圈（圖1B），接種該病原菌的12片離體葉片均出現(xiàn)上述癥狀。在滇南蘇鐵幼苗羽葉上，接種該病原菌，在30"d左右出現(xiàn)癥狀（圖1C），在接種該病原菌的滇南蘇鐵幼苗共計(jì)6盆中的18片羽葉均出現(xiàn)上述癥狀。在出現(xiàn)上述癥狀的羽葉上，可以重新分離到該病原菌，我們將該病原菌編號為GX225。

該病原菌在PDA上培養(yǎng)初期菌落成灰白色，菌落邊緣整齊，菌絲絨毛狀，氣生菌絲發(fā)達(dá)。在培養(yǎng)10"d后，菌落逐漸變成深棕色（圖1D），并在培養(yǎng)基中產(chǎn)生黑色色素（圖1E）。分生孢子梗呈棕色至深褐色，大多呈銳角分枝（圖1F）。分生孢子呈灰棕色至褐色，大多呈酒瓶狀，有縱隔和橫隔。有的分生孢子頂部有臍點(diǎn)（圖1G），有的分生孢子沒有明顯的臍點(diǎn)（圖1H）。分生孢子一般具有1～4個(gè)橫隔，0～2個(gè)縱隔，隔膜處有縊縮；長23.7～"31.5"μm，寬7.9～13.2"μm"（n=30）。我們根據(jù)分生孢子形態(tài)初步鑒定該病原菌為Alternaria"sp.。

以提取的致病菌株GX225的DNA為模板，采用PCR方法擴(kuò)增SSU、LSU、GAPDH、tef1、rpb2、Alt、OPA10-2、ITS"8段基因序列。通過凝膠電泳檢測，將大小符合預(yù)期的片段進(jìn)行測序分析。將獲得的序列提交至NCBI的GenBank數(shù)據(jù)庫獲得序列登記號（表2）。將上述8段序列與Alternaria"sp.不同種的同源序列進(jìn)行比對，并進(jìn)行ClustalW分析，基于上述8個(gè)序列用鄰接法（Neighbor-Joining）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖2）。根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育的進(jìn)化關(guān)系，得知GX225菌株與Alternaria"burnsii關(guān)系最近。進(jìn)化樹的所有分支置信值均大于50%，GX225菌株所在的分枝內(nèi)的置信值達(dá)100%；GX225菌株與A."burnsii的相似性達(dá)99.2%，故將GX225菌株鑒定為A."burnsii。

2.2""7種殺菌劑對A."burnsii的抑制作用評估

為了篩選出具有防治潛力的化學(xué)藥劑，我們評估了市場上常用的殺菌劑對GX225菌株（A."burnsii）的抑制效果，結(jié)果如表3所示。在7種供試藥劑中，氟酰羥·苯甲唑的抑菌效果最佳，抑制中量（inhibition"dose，"ID50）為0.011"mg/L。當(dāng)濃度為0.67"mg/L時(shí)，氟酰羥·苯甲唑的抑菌率可達(dá)到73.48%。氟菌·肟菌酯抑菌效果僅次于氟酰羥·苯甲唑，濃度為1.43"mg/L時(shí)抑菌率為73.45%，抑制中量為0.021"mg/L。此外，其余5種菌劑對菌株GX225（A."burnsii）均有較強(qiáng)的抑制作用（表3）。

3""討論

3.1""A."burnsii的寄主范圍

在孟加拉國，有研究報(bào)道A."burnsii可以寄生筍瓜（Cucurbita"maxima）的種子，但不引起明顯的病癥[25]。在印度則發(fā)現(xiàn)A."burnsii侵染孜然芹（Cuminum"cyminum）引起葉斑病，最終造成植株枯萎的情況[26]。而本研究是首次報(bào)道在蘇鐵中A."burnsii侵染的情況，從而豐富了該菌的寄主范圍。在形態(tài)鑒定中，蘇鐵上分離的A."burnsii與筍瓜和孜然芹上分離得到的A."burnsii描述基本一致，分生孢子的顯微形態(tài)也基本相同。

本研究不僅在滇南蘇鐵（C."diannanensis）上發(fā)現(xiàn)褐斑病，在具有相類似癥狀的德保蘇鐵（C."debaoensis）、叉孢蘇鐵（C."segmentifida）和2種蘇鐵屬的植物羽葉上均分離到A."burnsii。在滇南蘇鐵的離體葉片接種出現(xiàn)相似的癥狀，這表明A."burnsii可寄生蘇鐵屬植物的多個(gè)種。據(jù)前期研究報(bào)道，Alternaria"sp.可引起蘇鐵屬蘇鐵（C."revoluta）葉斑病，其病狀表現(xiàn)為：發(fā)病初期病斑為不規(guī)則形或長形病斑，后期擴(kuò)展，病癥部位變?yōu)楹诤稚〗〗唤缣帪榧t褐色波浪狀，病葉上有黑色霉層[10]。但上述研究并未將Alternaria鑒定到種，且根據(jù)其對蘇鐵羽葉上癥狀的描述，與本研究在德保蘇鐵、滇南蘇鐵、叉孢蘇鐵觀察到的癥狀有相似之處。故推測A."burnsii在蘇鐵屬植物的寄主范圍可能并不局限于上述3個(gè)種。關(guān)于A.nbsp;burnsii在蘇鐵屬植物是否存在其他寄主，有待進(jìn)一步研究。

3.2""Alternaria"sp.的鑒定

根據(jù)WOUDENBERG等[27]的報(bào)道，鏈格孢屬（Alternaria）內(nèi)種的鑒定可基于SSU、LSU、GAPDH、tef1、rpb2、Alt、OPA10-2、ITS和endoPG"9個(gè)序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。而本研究中根據(jù)上述文獻(xiàn)推薦的endoPG擴(kuò)增引物擴(kuò)增出的片段與其預(yù)期大小不符，這可能是其推薦的endoPG引物序列在Alternaria"spp.不夠保守導(dǎo)致的。而根據(jù)WOUDENBERG等[28]早期的文獻(xiàn)報(bào)道，GAPDH、tef1、rpb2、Alt和ITS也可以較好地區(qū)分鏈格孢屬內(nèi)不同的種。因此，本研究基于SSU、LSU、GAPDH、tef1、rpb2、Alt、OPA10-2和ITS構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹分析，可以較好地將Alternaria"spp.包括A."alstroemeriae、A."arborescens、A."burnsii、A."eichhorniae、A."gaisen、A."gossypina、A."iridiaustralis、A."jacinthicola、A."longipes、A."tenuissima和A."alternata區(qū)分開。

3.3""A."burnsii引起的蘇鐵褐斑病的防治

多菌靈、苯甲丙環(huán)唑和戊唑醇可防治Colletotrichum"sp.、P."cycadis和A."cycadia引起的葉斑病[3]。本研究在啶氧菌酯，苯甲·丙環(huán)唑、氟酰羥·苯甲唑、苯甲·嘧菌酯、氟菌·肟菌酯、氯氟醚·吡唑酯和吡唑醚菌酯7種藥劑中，篩選到抑菌效果最好的是氟酰羥·苯甲唑。然而，眾所周知，長期使用單一化學(xué)藥劑極易使病原菌產(chǎn)生抗藥性。所以，后續(xù)研究可以擴(kuò)大藥劑的篩選范圍，同時(shí)也可以篩選具有生物防治潛力的微生物，用于防治A.burnsii引起的蘇鐵屬植物葉斑病。根據(jù)報(bào)道，針對115株A."alternata菌株的抗藥性測定顯示，A."alternata對嘧菌酯類藥物尚未產(chǎn)生抗藥性，而對戊唑醇類藥物抗藥性的頻率達(dá)100%；同時(shí)，雖然A."alternata對啶酰菌胺產(chǎn)生的抗藥性弱，但抗藥性發(fā)生頻率達(dá)98.26%；此外，即使A."alternata對腐霉利抗藥性發(fā)生頻率僅為12.17%，但所產(chǎn)生的抗藥性較為強(qiáng)烈[29]。因此，我們在使用化學(xué)藥劑防治時(shí)需要警惕菌株抗藥性的產(chǎn)生。據(jù)報(bào)道，在室內(nèi)平板抑菌試驗(yàn)中，濃度為100"μg/mL的ε-聚賴氨酸鹽酸鹽對A."dumosa的抑制率可達(dá)80.10%，濃度為200"μg/mL的肉桂酸鉀對A."dumosa的抑制率可達(dá)71.80%[30]。放線菌屬（Streptomyces"sp.）NEAU-ZC16菌株在平板對峙試驗(yàn)中對A."alternata的抑菌率可達(dá)到（69.77±"1.20）%。其次生代謝物分離出的活性成分Ⅲ-2-1對A."alternata抑菌率可達(dá)到（65.43±1.63）%，其ID50為1.89"pg/mL，毒力回歸方程為y=4.8357+"0.5949x，r=0.9820[16]。由此可見，通過篩選拮抗菌及其次生代謝產(chǎn)物來防治A."burnsii引起的蘇鐵屬植物褐斑病是一種極具潛力的方式。

4""結(jié)論

A."burnsii能引起德保蘇鐵（C."debaoensis）、滇南蘇鐵（C."diannanensis）、叉孢蘇鐵（C."segmentifida）褐斑病。通過SSU、LSU、GAPDH、tef1、rpb2、Alt、OPA10-2、ITS"8個(gè)基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，可以有效鑒定Alternaria"sp.。氟酰羥·苯甲唑能有效抑制A."burnsii的生長，因此，氟酰羥·苯甲唑是一種具有防治A."burnsii引起的蘇鐵屬植物褐斑病潛力的化學(xué)藥劑。

參考文獻(xiàn)

[1]"席輝輝，"王祎晴，"潘躍芝，"許恬，"湛青青，"劉健，"馮秀彥，"龔洵."中國蘇鐵屬植物資源和保護(hù)[J]."生物多樣性，"2022，"30（7）："73-85.XI"H"H，"WANG"Y"Q，"PAN"Y"Z，"XU"T，"ZHAN"Q"Q，"LIU"J，"FENG"X"Y，"GONG"X."Resources"and"protection"of"Cycas"plants"in"China[J]."Biodiversity"Science，"2022，"30（7）："73-85."（in"Chinese）

[2]"梁水清，"蘇濤，"胡瑾瑾，"李楠."蘇鐵屬植物葉表皮特征及其分類學(xué)和古生態(tài)學(xué)意義[J]."古生物學(xué)報(bào)，"2019，"58（4）："526-542.LIANG"S"Q，"SU"T，"HU"J"J，"LI"N."Pattern"of"leaf"epidermal"characters"in"Cycas"and"its"significance"of"taxonomy"and"paleoecology[J]."Acta"Palaeontologica"Sinica，"2019，"58（4）："526-542."（in"Chinese）

[3]"許恬."青秀山蘇鐵園蘇鐵類植物病蟲害調(diào)查與綜合防治對策研究[D]."南寧："廣西大學(xué)，"2021.XU"T."Investigation"and"integrated"controlnbsp;measures"of"diseases"and"pests"of"Cycad"in"the"Cycad"garden"of"Qingxiushan"scenic"spot[D]."Nanning："Guangxi"University，"2021."（in"Chinese）

[4]"HAN"S，"MA"J"M，"LI"Y"Y，"LI"S"J，"LIU"Y"G，"QIAO"T"M，"LIN"T"T，"YANG"C"L，"LUO"T"T，"XIANG"L，"ZHU"T"H."Brown"leaf"spot"of"Cycas"debaoensis"caused"by"Colletotrichum"siamense"in"Sichuan，"China[J]."Plant"Disease，"2021，"105："7.

[5]"CROUS"P"W，"COWAN"D"A，"MAGGS-K?LLING"G，"EDWARDS"J，SEIFERT"K"A，ALFENAS"A"C，ALFENAS"R"F，"BURGESS"T"I，"CARNEGIE"A"J，"HARDY"G"E"S"J."Fungal"planet"description"sheets："1112–1181[J]."Persoonia，"2020，"45："251–409.

[6]"李小霞，"肖仲久，"許艾斌，"徐剛紅."蘇鐵葉枯病病原菌鑒定[J]."熱帶作物學(xué)報(bào)，"2014，"35（10）："2066-2070.LI"X"X，"XIAO"Z"J，"XU"A"B，"XU"G"H."Identification"of"leaf"blight"pathogen"on"Cycas"revoluta"Thunb[J]."Chinese"Journal"of"Tropical"Crops，"2014，"35（10）："2066-2070."（in"Chinese）

[7]"陳曉欽."石獅市森林病蟲害現(xiàn)況分析及主要病蟲害空間分布預(yù)測[D]."福州："福建農(nóng)林大學(xué)，"2020.CHEN"X"Q."Analysis"on"the"present"situation"of"forest"diseases"and"pests"and"prediction"of"the"spatial"distribution"of"major"diseases"and"pests"in"Shishi[D]."Fuzhou："Fujian"Agriculture"and"Forestry"University，"2020."（in"Chinese）

[8]"龍慧."西南地區(qū)間座殼屬真菌（Diaporthe）的系統(tǒng)學(xué)研究[D]."貴陽："貴州大學(xué)，"2020.LONG"H."The"phylogenetic"study"of"Diaporthe"in"southwest"China[D]."Guiyang："Guizhou"University，"2020."（in"Chinese）

[9]"李楠，"林月娥，"胡國雄，"劉齊芳，"鄧名榮，"王新榮."蘇鐵鐮刀菌球莖腐爛病癥狀及病原鑒定[J]."中國森林病蟲，"2002，"21（6）："8-10.LI"N，"LIN"Y"E，"HU"G"X，"LIU"Q"F，"DENG"M"R，"WANG"X"R."Pathogen"identification"and"symptom"development"of"stem-bulb"rotten"disease"in"Cycas[J]."Forest"Pest"and"Disease，"2002，"21（6）："8-10."（in"Chinese）

[10]"鄭曉慧，"徐彪."攀西地區(qū)蘇鐵葉部真菌病害鑒定[J]."西昌農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，"2003，"17（3）："9-11.ZHENG"X"H，"XU"B."Identifying"the"disease"of"Cycad"leaf"epiphyte"in"Pan-xi"area[J]."Journal"of"Xichang"Agricultural"College，"2003，"17（3）："9-11."（in"Chinese）

[11]"張家祥."中國南方擬盤多毛孢屬（Pestalotiopsis）真菌及其分種性狀的研究[D]."杭州："浙江大學(xué)，"2002.ZHANG"J"X."Identification"of"Pestalotiopsis"spp."from"Southern"China"and"study"on"the"species-recognizing"characters[D]."Hangzhou："Zhejiang"University，"2002."（in"Chinese）

[12]"傅美招，"徐正會，"黃忠強(qiáng)."中國蘇鐵科植物已知病蟲害及其防治研究概況[J]."西南林學(xué)院學(xué)報(bào)，"2005，"25（2）："44-49，"52FU"M"Z，"XU"Z"H，"HUANG"Z"Q."Summary"of"the"known"diseases"and"insect"pests"of"Cycadaceae"in"China"and"their"control[J]."Journal"of"Southwest"Forestry"College，"2005，"25（2）："44-49，"52."（in"Chinese）

[13]"余金勇，"彭東虎."烏魯木齊市花卉病害調(diào)查[J]."新疆林業(yè)，"2019（3）："33-37YU"J"Y，"PENG"D"H."Flower"disease"survey"in"Urumqi[J]."Forestry"of"Xinjiang，"2019（3）："33-37."（in"Chinese）

[14]"FARAZ"A，"LATIF"M"Z，"YASEEN"O."Fungal"diseases"of"Kangi"Palm"（Cycas"revoluta）[M]//Ul"H，"I，"IJAZ"S."eds."Etiology"and"Integrated"Management"of"Economically"Important"Fungal"Diseases"of"Ornamental"Palms."Sustainability"in"Plant"and"Crop"Protection，"Springer，"Cham.，"2020，"256-274.

[15]"PANDEY"S"K，"ROY"A"K，"AGARWAL"D"K."Some"new"host"records"of"Coelomycetes[J]."Indian"Phytopathology，"2009，"62（1）："135.

[16]"李靜."二月蘭葉斑病病原菌的分離鑒定及其拮抗放線菌的篩選和抑菌活性物質(zhì)初步研究[D]."哈爾濱："東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，"2022.LI"J."Identification"of"pathogen"causing"leaf"spot"disease"of"Orychophragmus"violaceus"and"screening"of"antagonistic"actinomycetes"and"the"active"substances[D]."Harbin："Northeast"Agricultural"University，"2022."（in"Chinese）

[17]"WHITE"T"J，"BRUNS"T，"LEE"S，"TAYLOR"J."Amplification"and"direct"sequencing"of"fungal"ribosomal"RNA"genes"for"phylogenetics[M]."California："Academic"Press，"1990："315-322.

[18]"CROUS"P"W，"SCHOCH"C"L，"HYDE"K"D，"WOOD"R"A，"GUEIDAN"C."Phylogenetic"lineages"in"the"Capnodiales[J]."Studies"in"Mycology，"2009，"64："17-47.

[19]"BERBEE"M"L，"PIRSEYEDI"M，"HUBBARD"S."Cochliobolus"phylogenetics"and"the"origin"of"known，"highly"virulent"pathogens，"inferred"from"ITS"and"glyceraldehyde-3-phosphate"dehydrogenase"gene"sequences[J]."Mycologia，"1999，"91："964-977.

[20]"CARBONE"I，"KOHN"L"M."A"method"for"designing"primer"sets"for"speciation"studies"in"filamentous"ascomycetes[J]."Mycologia，"1999，"91："553-556.

[21]"SUNG"G"H，"SUNG"J"M，"HYWEL-JONES"N"L，"SPATAFORA"J"W."A"multi-gene"phylogeny"of"Clavicipitaceae"（Ascomycota，"Fungi）："identification"of"localized"incongruence"using"a"combinational"bootstrap"approach[J]."Molecular"Phylogenetics"and"Evolution，"2007，"44："1204-1223.

[22]"LIU"Y"J，"WHELEN"S，"HALL"B"D."Phylogenetic"relationships"among"ascomycetes："evidence"from"an"RNA"polymerse"II"subunit[J]."Molecular"Biology"and"Evolution，"1999，"16："1799-1808

[23]"HONG"S"G，"CRAMER"R"A，"LAWRENCE"C"B，"PRYOR"B"M."Alt"a"1"allergen"homologs"from"Alternaria"and"related"taxa："analysis"of"phylogenetic"content"and"secondary"structure[J]."Fungal"Genetics"and"Biology，"2005，"42："119-129.

[24]"ANDREW"M，"PEEVER"T"L，"PRYORnbsp;B"M."An"expanded"multilocus"phylogeny"does"not"resolve"species"among"the"small-spored"Alternaria"species"complex[J]."Mycologia，"2009，"101："95-109.

[25]"PAUL"N"C，"DENG"J"X，"LEE"H"B，"YU"S"H."Characterization"and"pathogenicity"of"Alternaria"burnsii"from"seeds"of"Cucurbita"maxima"（Cucurbitaceae）"in"Bangladesh[J]."Mycobiology，"2015，"43（4）："384-391.

[26]"SAWANT"S"B，"PARMAR"R"G，"PATIL"G"B，"MANKAD"M，"PATEL"R，"PARMAR"K"D，"GOHEL"N"M."Zinc"nanoparticles"and"their"antifungal"activity"against"Alternaria"burnsii"causing"blight"of"Cumin[J]."Current"Journal"of"Applied"Science"and"Technology，"2020，"39（48）："116-123.

[27]"WOUDENBERG"J"H"C，"JOYCE"H"C，"MICHAEL"F，"GROENEWALD"J"Z，"VRIES"M"D，"STIELOW"J"B，"THOMMA"B"P"H"J，"CROUS"P"W."Alternaria"section"Alternaria："species，"formae"speciales"or"pathotypes[J]."Studies"in"Mycology，"2015，"82："1-21.

[28]"WOUDENBERG"J"H"C，"TRUTER"M，"GROENEWALD"J"Z，"CROUS"P"W."Large-spored"Alternaria"pathogens"in"section"Porri"disentangled[J]."Studies"in"Mycology，"2014，"79："1-47.

[29]"魏令令."大蒜紫斑病菌（Alternaria"alternata）對四類殺菌劑的抗藥性檢測及其生物學(xué)性質(zhì)[D]."南京："南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，"2020.WEI"L"L."Detection"and"biological"characteristics"of"Alternaria"alternata"from"garlic"field"resistant"to"four"fungicides"with"different"modes"of"action[D]."Nanjing："Nanjing"Agricultural"University，"2020."（in"Chinese）

[30]"張娟."藍(lán)莓采后鏈格孢果腐病的食品級抑菌劑研究[D]."沈陽："沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)，"2022.ZHANG"J."Edible"grade"inhibitors"inhibit"blueberry"fruit"rot"caused"by"Alternaria"sp.[D]."Shenyang："Shenyang"Agricultural"University，"2022."（in"Chinese）