摘要：為分析北蒼術(shù)種質(zhì)資源的遺傳多樣性，以16個居群158份北蒼術(shù)種質(zhì)為研究對象，分析13個表型性狀的變異系數(shù)、多樣性指數(shù)，并對其進(jìn)行相關(guān)性分析、主成分分析和聚類分析；利用SSR分子標(biāo)記進(jìn)行遺傳多樣性分析，用Structure 2.3.4軟件解析群體遺傳結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明，158份北蒼術(shù)種質(zhì)的13個表型性狀的變異系數(shù)為0.63%～89.54%，其中莖數(shù)的變異系數(shù)最大；Shannon-Wiener多樣性指數(shù)（H）為0.58～2.95，其中主莖粗的多樣性指數(shù)最高。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，13個表型性狀間存在一定相關(guān)性，其中株高與主莖粗、葉長、葉寬、莖數(shù)、冠幅呈顯著正相關(guān)（Plt;0.05）。主成分分析發(fā)現(xiàn)，葉寬、冠幅、莖數(shù)、倒伏情況、開花時期和葉色是影響北蒼術(shù)表型性狀差異的關(guān)鍵指標(biāo)。基于13個表型性狀聚類分析將158份北蒼術(shù)種質(zhì)劃分為3個類群。17對SSR核心引物共擴增出128條多態(tài)性條帶，多態(tài)率達(dá)88.56%；Nei’s基因多樣性指數(shù)（h）、Shannon’s信息指數(shù)（I）和多態(tài)信息量分別為0.03～0.41、0.29～0.60 和0.30～0.86；基于17 對SSR 分子標(biāo)記，利用UPGMA（unweighted pair groupmethod with arithmetic mean）法將158份北蒼術(shù)種質(zhì)劃分為3個類群。Structure群體結(jié)構(gòu)分析表明，158份種質(zhì)劃分為3個類群，其中10份種質(zhì)為混合群體，遺傳背景較為復(fù)雜。綜合分析發(fā)現(xiàn)，158份北蒼術(shù)種質(zhì)基于表型和SSR標(biāo)記聚類劃分一致的有60份種質(zhì)，其中20份種質(zhì)親緣關(guān)系較近，表明地理來源對北蒼術(shù)種質(zhì)資源類群劃分有一定影響，但不是決定性因素。以上研究結(jié)果為北蒼術(shù)種質(zhì)資源鑒定與優(yōu)良種質(zhì)篩選提供了理論參考。

關(guān)鍵詞：北蒼術(shù)；表型性狀；遺傳多樣性；聚類分析；群體結(jié)構(gòu)分析doi：10.13304/j.nykjdb.2024.0174

中圖分類號：S853.75 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：10080864（2024）12003911

北蒼術(shù)[Atractylodes chinensis （DC.） Koidz.]為菊科蒼術(shù)屬多年生草本植物，屬于常用大宗中藥材，其干燥根莖入藥，具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒、明目等功效[1]，主要分布在河北、內(nèi)蒙古、遼寧和吉林等地區(qū)，其中河北省為北蒼術(shù)的道地產(chǎn)區(qū)，被列入“十大冀藥”[2]；河北省所轄秦皇島市和承德市所產(chǎn)蒼術(shù)藥材質(zhì)量最佳[3]。近年來，蒼術(shù)藥材市場需求量劇增，野生資源匱乏[4]。北蒼術(shù)屬于異花授粉植物，具有天然混雜特性，給北蒼術(shù)種質(zhì)資源開發(fā)利用、鑒定和優(yōu)良品種培育帶來極大的挑戰(zhàn)[5]。明確種質(zhì)資源的遺傳多樣性和群體結(jié)構(gòu)是藥用植物創(chuàng)新利用、遺傳改良和品種選育的重要理論基礎(chǔ)。

目前，關(guān)于北蒼術(shù)的研究多集中于藥理藥化[67]、種苗繁育與栽培[89]、種子質(zhì)量研究[1011]、組織培養(yǎng)[1213]與遺傳性狀比較等[1415]。關(guān)于北蒼術(shù)種質(zhì)資源分析方面的研究極少，在表型水平，郭欣慰等[16]分析了河北省青龍滿族自治縣北蒼術(shù)葉型，發(fā)現(xiàn)其葉型變異大，有全緣型、淺裂型和深裂型，且存在大量過渡葉型。在分子水平，姜雨昕等[17]利用ISSR（inter-simple sequence repeat）分子標(biāo)記技術(shù)對采自內(nèi)蒙古、河北等地的22 份北蒼術(shù)進(jìn)行遺傳多樣性分析，表明北蒼術(shù)種質(zhì)資源遺傳多樣性非常豐富。Ma 等[18]利用10 對SSR核心引物分析19份燕山地區(qū)北蒼術(shù)種質(zhì)資源遺傳多樣性發(fā)現(xiàn)，不同地理來源的北蒼術(shù)種質(zhì)資源遺傳多樣性豐富。綜上，北蒼術(shù)在表型和分子標(biāo)記水平均存在較高的多樣性，但關(guān)于表型與分子標(biāo)記分析間是否存在相關(guān)性尚未見報道?；诖耍狙芯繌谋硇秃蚐SR標(biāo)記2個方面綜合分析北蒼術(shù)種質(zhì)的遺傳多樣性，并解析其群體結(jié)構(gòu)，為北蒼術(shù)種質(zhì)資源鑒定和開發(fā)利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

2017年4月至2020年9月，本課題組收集了燕山地區(qū)所轄秦皇島市、唐山市、承德市和赤峰市共4個市16個居群的158份北蒼術(shù)野生種質(zhì)，定植于河北科技師范學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物科技學(xué)院綜合試驗站，建立種質(zhì)資源圃，高畦栽培，畦高20 cm，畦寬80 cm，每畦雙行種植，行距30 cm，株距25 cm。2021年6月，于旺盛生長期按照莖、葉分化特征，從16 個居群中標(biāo)記158 份北蒼術(shù)種質(zhì)（用S1～S158 表示），作為本試驗的研究材料（表1）。

1.2 試驗方法

1.2.1 表型性狀測定 2022年4—10月于北蒼術(shù)旺盛生長期調(diào)查16個居群158份北蒼術(shù)種質(zhì)的地上部分表型性狀，包括株高（plant height，PH）、主莖粗（stem width，SW）、基部葉葉型（basal leaftype，BLT）、葉長（length leaf，LL）、葉寬（leaf width，LW）、上部葉葉型（upper leaf type，ULT）、莖數(shù)（number stems，NS）、莖色（stem color，SC）、葉色（leaf colour，LC）、分枝位置（branch position，BP）、倒伏情況（lodging condition，LC）、開花時期（flowering period，F(xiàn)P）、冠幅（crown breadth，CB），共13個表型性狀。

6 個數(shù)量性狀的測定標(biāo)準(zhǔn)如下。用卷尺測量地面至植株主莖頂部的距離為株高（cm）；用游標(biāo)卡尺測量植株距離莖基部大約3 cm處莖的直徑，記作主莖粗（mm）；用直尺測量主莖上最大成熟葉片的葉柄基部到葉尖的距離，記作葉長（cm）；用直尺測量主莖上最大成熟葉片兩側(cè)最寬的距離，記作葉寬（cm）；莖數(shù)為植株的主莖數(shù)量；用卷尺測量植株的橫向?qū)挾?，記作冠幅（cm）。7 個質(zhì)量性狀的劃分等級及賦值標(biāo)準(zhǔn)如表2所示。

1.2.2 SSR分子標(biāo)記 于北蒼術(shù)旺盛生長期，分別取158份北蒼術(shù)種質(zhì)的莖頂端幼嫩葉片，用錫箔紙包裹，迅速置于液氮中，?80 ℃保存。利用植物基因組DNA試劑盒（北京華越洋生物科技有限公司）提取158份北蒼術(shù)種質(zhì)的基因組DNA。參考Zhao等[19]報道的北蒼術(shù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫，從中篩選SSR序列，篩選標(biāo)準(zhǔn)參考李錦超等[20]的方法，選擇68對，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

對68對SSR引物進(jìn)行有效性和多態(tài)性驗證，篩選出17對擴增條帶清晰、差異性好、重現(xiàn)性高的SSR核心引物（表3），用于158份北蒼術(shù)種質(zhì)的SSR 分析，利用8% 聚丙烯酰胺凝膠電泳，電壓220 V，電泳約2.5 h，使用硝酸銀染色法進(jìn)行染色，顯影后記錄基因型數(shù)據(jù)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

利用Excel 2019分析13個表型的平均值、最大值和最小值，采用SPSS 26.0 計算變異系數(shù)（variation coefficient，CV）[21]、Shannon-Weiner 多樣性指數(shù)（H）[22] 和表型性狀的主成分 （principalcomponent，PC） 分析[23]，選擇載荷絕對值大于0.5的表型性狀指標(biāo)作為該主成分的主導(dǎo)變量[24]。利用歐式距離進(jìn)行表型性狀聚類分析[25]。

根據(jù)SSR擴增結(jié)果，統(tǒng)計目標(biāo)位置條帶的有無，無條帶的記為“0”、有條帶的記為“1”，構(gòu)建“0、1”矩陣，利用Popgene 1.32軟件計算Nei’s基因多樣性指數(shù)（h）和Shannon’s 信息指數(shù)（I）；利用PIC-CALC 軟件計算多態(tài)信息量（polymorphism information content，PIC）；利用NTSYS 2.1計算158份北蒼術(shù)種質(zhì)的遺傳相似系數(shù)，并采用非加權(quán)組平均法（unweighted pairgroupmethod with arithmetic means，UPGMA）進(jìn)行聚類分析；利用MEGA 軟件構(gòu)建遺傳多樣性聚類圖。

利用Structure 2.3.4軟件，分析158份北蒼術(shù)種質(zhì)的群體遺傳結(jié)構(gòu)。參照Evanno 等[26]的方法確定最佳群體數(shù)（K）值，參照Yang等[27]的分類方法，并根據(jù)158份北蒼術(shù)種質(zhì)的群體結(jié)構(gòu)運行結(jié)果生成群體結(jié)構(gòu)Q 值（每份種質(zhì)被分配到對應(yīng)類群中的概率），當(dāng)類群中的群體結(jié)構(gòu)Q 值≥0.6時，表明群體結(jié)構(gòu)單一；當(dāng)Q 值lt;0.6時，表明群體結(jié)構(gòu)復(fù)雜，為混合類群。

2 結(jié)果與分析

2.1 北蒼術(shù)種質(zhì)基于表型性狀的多樣性分析

2.1.1 表型性狀的變異性和多樣性分析 對16 個居群158 份北蒼術(shù)種質(zhì)的13 個表型性狀進(jìn)行分析，結(jié)果（表4）表明，變異系數(shù)為0.63%～89.54%，其中莖數(shù)的變異系數(shù)最大，其余性狀的變異系數(shù)表現(xiàn)為：倒伏情況lt;葉色lt;莖色lt;開花時期lt;基生葉葉型lt;分枝位置lt;上部葉葉型lt;葉長lt;株高lt;葉寬lt;主莖粗lt;冠幅。13 個表型性狀的Shannon-Weiner 多樣性指數(shù)（H）為0.58～2.59，其中主莖粗的H 最大，其余性狀表現(xiàn)為：上部葉葉型lt;莖色lt;莖數(shù)lt;株高lt;開花時期lt;分枝位置lt;基生葉葉型lt;倒伏情況lt;葉長lt;葉色lt;葉寬lt;冠幅。

2.1.2 表型性狀的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，13 個表型性狀間存在一定的相關(guān)性（表5）。其中，株高與主莖粗、葉長、葉寬、莖數(shù)、冠幅呈顯著正相關(guān)；主莖粗與葉寬、倒伏情況呈顯著正相關(guān)；基部葉葉型與葉寬、上部葉葉型呈顯著正相關(guān)；葉長與葉寬呈顯著正相關(guān)；葉寬與上部葉葉型呈顯著正相關(guān)；莖數(shù)與分枝位置、冠幅呈顯著正相關(guān)；葉色與分枝位置、冠幅呈顯著正相關(guān)；主莖粗與冠幅呈顯著負(fù)相關(guān)；葉寬與分枝位置呈顯著負(fù)相關(guān)；冠幅與倒伏情況呈顯著負(fù)相關(guān)。

2.1.3 表型性狀的主成分分析 由表6可知，主成分分析提取到特征值gt;1 的5 個主成分，累計貢獻(xiàn)率達(dá)75.94%，能解釋北蒼術(shù)種質(zhì)表型性狀的絕大部分信息。第1主成分的貢獻(xiàn)率最大，為26.03%，葉寬、基生葉葉型、主莖粗、上部葉葉型、株高和葉長為主導(dǎo)變量，其中葉寬載荷值最大；第2 主成分的貢獻(xiàn)率為16.34%，冠幅和分枝位置為主導(dǎo)變量，其中葉寬載荷值最大，冠幅載荷值最大；第3 主成分的貢獻(xiàn)率為14.39%，莖數(shù)和倒伏情況為主導(dǎo)變量，二者載荷值一樣；第4主成分的貢獻(xiàn)率為10.85%，開花時期和莖色為主導(dǎo)變量，其中花開時期載荷值最大；第5 主成分的貢獻(xiàn)率為8.34%，其中葉色為主導(dǎo)變量。綜上，葉寬、冠幅、莖數(shù)、倒伏情況、開花時期和葉色是影響燕山地區(qū)北蒼術(shù)種質(zhì)表型性狀差異的主要指標(biāo)。

2.1.4 表型性狀的聚類分析 基于表型性狀進(jìn)行聚類分析，將158份北蒼術(shù)種質(zhì)劃分為3個類群（圖1），聚類結(jié)果與居群來源并不完全一致。

類群Ⅰ由84份來自14個居群的北蒼術(shù)種質(zhì)組成，該類群植株的株高較高，且主莖較為粗壯，葉片多表現(xiàn)為裂葉型，葉片又寬又長。

類群Ⅱ由64份來自13個居群的北蒼術(shù)種質(zhì)組成，該類群植株的株高、主莖粗、葉長、葉寬和莖色低于群體平均值。

類群Ⅲ由10份來自7個居群的北蒼術(shù)種質(zhì)組成，該類群植株高大、葉片較長、莖數(shù)多，且冠幅大。

2.2 北蒼術(shù)種質(zhì)的遺傳多樣性分析

利用17 對SSR 核心引物對158 份北蒼術(shù)種質(zhì)進(jìn)行PCR 擴增，共獲得128 條條帶，其中116條為多態(tài)性條帶，多態(tài)率達(dá)88.56%（表7）。Nei’s 基因多樣性指數(shù)（h）為0.03～0.41，平均0.29；Shannon’s 信息指數(shù)（I）為0.29～0.60，平均0.45；17 對SSR 核心引物的多態(tài)性信息量（PIC）平均為0.75，其中PICgt;0.5 的有16 對，占所用引物總數(shù)的94%，說明本研究篩選的SSR引物多態(tài)性高，可有效分析158 份北蒼術(shù)種質(zhì)的遺傳多樣性。

分析158份北蒼術(shù)種質(zhì)間的遺傳距離發(fā)現(xiàn)，S46和S47間的遺傳距離最近，為0.07；S4和S135的遺傳距離最遠(yuǎn)，為1.03?；赟SR引物擴增情況，采用UPGMA法對158份北蒼術(shù)種質(zhì)進(jìn)行聚類分析，結(jié)果（圖2）表明，將158分北倉術(shù)種質(zhì)劃分為3大類。類群Ⅰ由58份來自10個居群的北蒼術(shù)種質(zhì)組成，其中承德市27份、赤峰市15份、秦皇島市7份、唐山市9份，類群內(nèi)各種質(zhì)間的遺傳距離較近。類群Ⅱ由75份來自12個居群的北蒼術(shù)種質(zhì)組成，其中承德市35份、秦皇島市11份、赤峰市16份，該類又可劃分為3個亞類，分別為Ⅱ-1、Ⅱ-2、Ⅱ-3。類群Ⅲ由25份來自3個居群的北蒼術(shù)種質(zhì)組成，其中赤峰市7份、承德市14份。

2.3 北蒼術(shù)種質(zhì)資源群體遺傳結(jié)構(gòu)分析

根據(jù)17對SSR核心引物擴增的128個SSR位點信息，利用Structure 2.3.4軟件，基于混合模型法，對158份北蒼術(shù)種質(zhì)的群體結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，結(jié)果圖3A）表明，當(dāng)K=3時，ΔK 值最大，說明158份北蒼術(shù)種質(zhì)可劃分為3個類群，各類群的材料占比分別為46.3%、23.3%和30.54%，且各類群間存在基因交流。

進(jìn)一步分析158份北蒼術(shù)種質(zhì)的Q 值（圖3B）發(fā)現(xiàn)，Qlt;0.6 的種質(zhì)有10 份，包括S5、S158、S98、S117、S131、S37、S135、S126、S130和S41，這10份種質(zhì)的遺傳背景相對復(fù)雜，為混合群體；其余148份的Q≥0.6，表明其群體結(jié)構(gòu)較為簡單。

3 討論

表型性狀是藥用植物種質(zhì)資源評價和遺傳多樣性分析的重要方法，具有方法簡單、直觀和經(jīng)濟方便等優(yōu)點，但易受環(huán)境影響。SSR分子標(biāo)記技術(shù)可以有效鑒定種質(zhì)資源間的遺傳差異，且克服了表型分析易受環(huán)境影響的缺點[28]。利用表型性狀和SSR 分子標(biāo)記對天然混雜種質(zhì)資源進(jìn)行鑒別，能夠提供更加科學(xué)、全面、有效的理論依據(jù)。張茹等[25]研究表明，33份遠(yuǎn)志種質(zhì)蘊含豐富的表型變異，變異系數(shù)為13%～49%；賀漫媚等[29]發(fā)現(xiàn)，17 種石斛屬植物的14 個表型性狀的Shannon-Weiner 多樣性指數(shù)為1.90～2.09。本研究對來自16個居群的158份北蒼術(shù)種質(zhì)13個表型性狀的變異系數(shù)、多樣性指數(shù)及性狀間的關(guān)系進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，北蒼術(shù)表型變異豐富，且表型性狀間存在一定的相關(guān)性，與前人研究結(jié)果相似[25，29]。主成分分析發(fā)現(xiàn)，葉寬、冠幅、莖數(shù)、倒伏情況、開花時期和葉色5個表型性狀是影響北蒼術(shù)種質(zhì)資源表型性狀差異的關(guān)鍵因子。劉庭付等[30]對42份遠(yuǎn)志種質(zhì)的12個表型性狀進(jìn)行主成分分析發(fā)現(xiàn)，莖分支、葉色、花色、根重、株高等指標(biāo)是反映其表型多樣性的關(guān)鍵指標(biāo)。

對于無參考基因組的藥用植物而言，基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫挖掘SSR分子標(biāo)記是對其進(jìn)行種質(zhì)資源遺傳多樣性分析的重要途徑，已在枸杞[31]、杜仲[32]和苦參[33]等藥用植物遺傳多樣性分析中廣泛應(yīng)用。宋蕓等[33]對來自15個不同產(chǎn)地的150份苦參種質(zhì)利用SSR 分子標(biāo)記分析其遺傳多樣性分析，Shannon’s多樣性指數(shù)為0.29～0.60；Nei’s遺傳多樣性指數(shù)為0.62～0.81，PIC為0.80～0.94。本研究基于北蒼術(shù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫篩選出17對SSR核心引物，Shannon’s多樣性指數(shù)為0.29～0.60，Nei’s遺傳多樣性指數(shù)的范圍為0.03～0.41，PIC為0.30～0.86，說明北蒼術(shù)不同居群種質(zhì)間具有豐富的遺傳多樣性，且種質(zhì)資源的多樣性與地理來源具有一定的相關(guān)性。

群體結(jié)構(gòu)在一定程度上可反映物種的遺傳分化[33-35]。劉亞令等[35]基于SSR分子標(biāo)記對黃芪種質(zhì)群體遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，可將其分為3類，遺傳變異主要發(fā)生在居群內(nèi)。本研究對來自16個居群的158份北蒼術(shù)種質(zhì)進(jìn)行群體結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，可將其劃分為3個類群，且3個類群間存在基因交流，這與北蒼術(shù)的異花授粉特性有關(guān)，說明群體結(jié)構(gòu)分析能進(jìn)一步揭示北蒼術(shù)種質(zhì)資源內(nèi)部的遺傳多樣性。

基于表型性狀和SSR分子標(biāo)記對種質(zhì)資源進(jìn)行綜合分析是明確種質(zhì)表型性狀與分子標(biāo)記一致性和相關(guān)性的重要途徑。宋江琴等[36]研究發(fā)現(xiàn)，9份萬壽菊種質(zhì)基于表型性狀和SSR分子標(biāo)記的聚類結(jié)果不完全一致。本研究表明，相同地理來源的北蒼術(shù)種質(zhì)在基于表型和SSR分子標(biāo)記水平的聚類分析結(jié)果不完全一致，表明地理來源不是北蒼術(shù)遺傳聚類的決定性因素，2種聚類分析中聚在相同類群的種質(zhì)僅60份。這可能是由于北蒼術(shù)屬于異花授粉植物，具有天然混雜特性，其遺傳背景復(fù)雜；同時，表型性狀易受環(huán)境影響，遺傳表達(dá)不穩(wěn)定，且本研究所用SSR引物的數(shù)量有限，不能覆蓋北蒼術(shù)種質(zhì)的全部基因組。本研究基于表型性狀和SSR分析標(biāo)記的聚類結(jié)果及二者的綜合分析結(jié)果對北蒼術(shù)種質(zhì)資源鑒定和優(yōu)良種質(zhì)培育具有一定的參考作用。

參考文獻(xiàn)

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：168-169.

［2］ 朱文婷，陸美霞，丁燕，等.基于UPLC-Q-TOF-MS “建昌幫”蜜糠炒蒼術(shù)炮制前后化學(xué)成分分析[J]. 中南藥學(xué)，2023，21（7）：1756-1762.

ZHU W T， LU M X， DING Y， et al .. Chemical components of fried Atractylodes Rhizoma with honey bran based on UPLC-QTOF-MS before and after the processing [J]. Cent. South Pharm.， 2023，21（7）：1756-1762.

［3］ 賀字典，韓亞梅，金歌，等.木霉菌協(xié)同殺菌劑防治北蒼術(shù)白絹病的增效作用[J].中國生物防治學(xué)報，2023，39（5）：1244-1252.

HE Z D， HAN Y M， JIN G， et al .. Synergistic effect of Trichoderma and fungicides on Atractylodes chinensis southern blight caused by Sclerotium rolfsii [J]. Chin. J. Biol. Contr.，2023，39（5）：1244-1252.

［4］ 于學(xué)霖，賈琳，尹海波，等.遼寧省北蒼術(shù)生態(tài)適宜性和品質(zhì)區(qū)劃研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2023，30（8）：1-7.

YU X L， JIA L， YIN H B， et al .. Study on ecological suitability and quality regionalization of Atractylodes chinensis （DC.）Koidz. in Liaoning province [J]. Chin. J. Inf. Tradit. Chin.Med.， 2023，30（8）：1-7.

［5］ 于艷，袁媛，賈天柱，等.蒼術(shù)炮制前后化學(xué)成分及藥理作用研究近況[J].時珍國醫(yī)國藥，2016，27（1）：189-191.

［6］ 許靜，孟利娜，南楠，等.北蒼術(shù)多糖的酶法輔助超聲提取工藝的優(yōu)化及其體外抗腫瘤活性研究[J]. 現(xiàn)代藥物與臨床，2014，29（3）：231-235.

XU J， MENG L N， NAN N， et al.. Optimization of enzymatic auxiliary ultrasonic extraction of polysaccharide from Atractylodes chinensis and its antitumor activity in vitro [J]. Drugs Clin.， 2014，29（3）：231-235.

［7］ 李涵秋，杜靖艷，滿孜拉·吐達(dá)吉，等.基于HPLC優(yōu)化北蒼術(shù)三種藥用成分提取及測定方法[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報，2023，39（11）：43-49.

LI H Q， DU J Y， Manzila Tudaji， et al .. Three medicinal ingredients of Atractylodes chinensis （DC.） Koidz： extraction and determination based on HPLC [J]. Chin. Agric. Sci. Bull.，2023，39（11）：43-49.

［8］ SHIMATO Y， OTA M， ASAI K， et al .. Comparison of byakujutsu（Atractylodes rhizome） and sojutsu （Atractylodes lancea rhizome）on anti-inflammatory and immunostimulative effects in vitro [J] . J.Nat. Med.， 2018，72（1）：192-201.

［9］ 鄭金雙，王文頗，李彥生.溫度與基質(zhì)含水量對北蒼術(shù)種子萌發(fā)及幼苗形態(tài)建成的影響[J].中藥材，2018，41（6）：1282-1284.

［10］ REN C G， DAI C C. Jasmonic acid is involved in the signaling pathway for fungal endophyte-induced volatile oil accumulation of Atractylodes lancea plantlets [J/OL]. BMC Plant Biol.， 2012，12：128 [2024-02-10]. https：//doi.org/10.1186/1471-2229-12-128.

［11］ 陳璐，邢德科，吳沿友，等.不同基質(zhì)對茅蒼術(shù)移栽組培苗葉片導(dǎo)水度及光合的影響[J].種子，2021，40（2）：7-12，19.

CHEN L， XING D K， WU Y Y， et al .. Effects of different substrates on leaf water conductivity and photosynthesis of tissue culture plantlets of Atractylodes lancea [J]. Seed， 2021，40（2）：7-12，19.

［12］ 張煒坤，趙恢，張小芳，等.北蒼術(shù)組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)研究[J].種子，2018，37（12）：136-139.

ZHANG W K， ZHAO H， ZHANG X F， et al .. Study on tissue culture and rapid propagation techniques of Atractylodes chinensis （DC.） Koidz [J]. Seed， 2018，37（12）：136-139.

［13］ SUN J， WENG L， XIAO C P， et al .. Quality analysis of Atractylodes chinensis with different growth years by HPLCQAMS combined with color difference principle [J]. Chin.Phar.， 2020，31（11）：1314-1319.

［14］ 左靜靜，閆貴云，安曉寧，等.正交設(shè)計優(yōu)化北蒼術(shù)組織培養(yǎng)研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2017，33（11）：21-24.

ZUO J J， YAN G Y， AN X N， et al .. Tissue culture of Atractylodes chinensis by orthogonal design [J]. Chin. Agric. Sci.Bull.， 2017，33（11）：21-24.

［15］ ISHII T， OKUYAMA T， NOGUCHI N， et al .. Antiinflammatory constituents of Atractylodes chinensis rhizome improve glomerular lesions in immunoglobulinA nephropathy model mice [J]. J. Nat.Med.， 2020，74（1）：51-64.

［16］ 郭欣慰，喬旭，李艾蓮.河北省青龍地區(qū)北蒼術(shù)葉型變異模式初探[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2021，25（3）：76-80，90.

GUO X W， QIAO X， LI A L. Preliminary study on leaf type variation pattern of Atractylodes chinensis in Qinglong， Hebei province [J]. J. Hebei Agric. Sci.， 2021，25（3）：76-80，90.

［17］ 姜雨昕，肖春萍，孫金，等.基于ISSR標(biāo)記的北蒼術(shù)種質(zhì)資源親緣關(guān)系分析[J].種子，2021，40（12）：32-38.

JIANG Y X， XIAO C P， SUN J， et al .. Genetic relationship analysis of Atractylodes chinensis germplasm resources based on ISSR markers [J]. Seed， 2021，40（12）：32-38.

［18］ MA S S， ZHAO J H， SU W N， et al .. Transcriptome-derived SSR markers for DNA fingerprinting and inter-populations genetic diversity assessment of Atractylodes chinensis [J] .Nucleus， 2022，65（3）：321-329.

［19］ ZHAO J， SUN C， SHI F， et al .. Comparative transcriptome analysis reveals sesquiterpenoid biosynthesis among 1-，2- and 3-year old Atractylodes chinensis [J/OL]. BMC Plant Biol.，2021，21（1）：354 [2024-02-10].https：//doi.org/10.1186/s12870-021-03131-1.

［20］ 李錦超，董俊美，賈凱旋，等.基于山藥轉(zhuǎn)錄組測序的EST-SSR信息分析及分子標(biāo)記開發(fā)[J/OL].分子植物育種，2022：1-18[2024-02-10].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.s. 20221017.1120.008.html.

LI J C， DONG J M， JIA K X， et al .. EST-SSR information analysis and molecular marker development based on Chinese yam transcriptome sequencing [J/OL]. Mol. Plant Breeding，2022： 1-18 [2024-02-10]. http：//kns. cnki. net/kcms/detail/46.1068.s.20221017.1120.008. html.

［21］ 鄒學(xué)哲，鄧紅，吳嘉琳，等.基于變異系數(shù)權(quán)重法評價3種干燥方式對鐵皮石斛多糖理化性質(zhì)的影響[J].廣東藥科大學(xué)學(xué)報，2023，39（4）：87-92.

ZOU X Z， DENG H， WU J L， et al .. Evaluation of the effects of three drying methods on physicochemical properties of Dendrobium officinale polysaccharides based on coefficient of variation weighting method [J]. J. Guangdong Pharm. Univ.，2023，39（4）：87-92.

［22］ 尹光耀，袁林，王馨，等.北蒼術(shù)特異性DNA條形碼篩選、種質(zhì)鑒定及遺傳多樣性分析[J]. 藥學(xué)學(xué)報，2023，58（6）：1693-1704.

YIN G Y， YUAN L， WANG X， et al .. Screening of specific DNA barcode， identification of germplasm eesources， and analysis of genetic diversity of Atractylodes chinenesis [J]. Acta Pharm. Sin.，2023，58（6）：1693-1704.

［23］ 陳慧玲，劉華，黃國偉，等.湖北16個山桐子野生資源分布區(qū)葉片形態(tài)多樣性分析[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2023，39（5）：63-68.

CHEN H L， LIU H， HUANG G W， et al ..Leaf morphological diversity of Idesia polycarpa Maxim in sixteen wild resource distribution areas in Hubei province [J]. Chin. Agric. Sci. Bull.，2023，39（5）：63-68.

［24］ 趙慧琴.數(shù)據(jù)處理技術(shù)與SPSS實驗教程[M].廣州：華南理工大學(xué)出版社，2016：1-180.

［25］ 張茹，吳昌娟，張麗君，等.基于形態(tài)性狀和指標(biāo)成分的遠(yuǎn)志遺傳多樣性分析及綜合評價[J].核農(nóng)學(xué)報，2022，36（12）：2381-2390.

ZHANG R， WU C J， ZHANG L J， et al .. Genetic diversity and comprehensive evaluation of Polygala tenuifolia based on morphological traits and indicative components [J]. J. Nucl.Agric. Sci.， 2022，36（12）：2381-2390.

［26］ EVANNO G， REGNAUT S， GOUDET J. Detecting the number of clusters of individuals using the software STRUCTURE： a simulation study [J]. Mol. Ecol.， 2005，14（8）：2611-2620.

［27］ YANG X H， GAO S B， XU S T， et al .. Characterization of a global germplasm collection and its potential utilization for analysis of complex quantitative traits in maize [J]. Mol.Breeding， 2011，28（4）：511-526.

［28］ 李瑞峰，高鵬，朱子成，等.基于形態(tài)學(xué)標(biāo)記及 SSR 標(biāo)記的甜瓜主栽品種分類鑒定研究[J].中國蔬菜，2014（6）：20-27.

LI R F， GAO P，ZHU Z C， et al .. Studies on classification and identification based on morphological markers and SSR markers for elite varieties of Cucumis melo L. [J]. China Veg.，2014（6）：20-27.

［29］ 賀漫媚，代色平，陳秀萍，等.17種石斛屬植物表型性狀多樣性分析[J].植物資源與環(huán)境學(xué)報，2024（2）：33-39.

HE M M， DAI S P， CHEN X P， et al .. Analysis on phenotypic trait diversity of 17 Dendrobium species [J]. J. Plant Res.Environ.， 2024（2）：33-39.

［30］ 劉庭付，周大云，繆葉旻子.麗水市野生豆腐柴葉片形態(tài)多樣性研究[J].中國野生植物資源，2023，42（2）：45-50.

LIU T F， ZHOU D Y， MIAO Y M Z. Study on morphological diversity of wild Premna microphylla in Lishui city [J]. Chin.Wild Plant Resour.， 2023，42（2）：45-50.

［31］ 尹躍，安巍，趙建華，等.黑果枸杞轉(zhuǎn)錄組SSR信息分析及分子標(biāo)記開發(fā)[J].浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報，2019，36（2）：422-428.

YIN Y， AN W， ZHAO J H， et al .. SSR information in transcriptome and development of molecular markers in Lycium ruthenicum [J]. J. Zhejiang Aamp;F Univ.， 2019，36（2）：422-428.

［32］ 黃海燕，杜紅巖，烏云塔娜，等.基于杜仲轉(zhuǎn)錄組序列的SSR分子標(biāo)記的開發(fā)[J].林業(yè)科學(xué)，2013，49（5）：176-181.

HUANG H Y，DU H Y，DU H Y，et al .. Development of SSR molecular markers based on transcriptome sequencing of Eucommia ulmoides [J]. Sci. Silvae Sin.， 2013，49（5）：176-181.

［33］ 宋蕓，張鑫瑞，賀嘉欣，等.基于葉綠體SSR分子標(biāo)記的苦參種質(zhì)資源遺傳多樣性分析[J].作物雜志，2023（1）：30-37.

SONG Y， ZHANG X R， HE J X， et al .. Genetic diversity analysis of Sophora flavescens Ait. germplasm resources based on cpSSR markers [J]. Crops， 2023（1）：30-37.

［34］ 王若溪，常婧，曲凱倫，等.酸棗經(jīng)濟性狀關(guān)聯(lián)分析及優(yōu)異等位基因挖掘[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2023，51（6）：28-39.

WANG R X， CHANG J， QU K L， et al .. Association analysis of economic traits and mining of excellent alleles of Ziziphus jujuba var. Spinosa [J]. J. Northwest Aamp;F Univ. （Nat. Sci.），2023，51（6）：28-39.

［35］ 劉亞令，耿雅萍，解瀟冬，等.基于SSR分子標(biāo)記的藥用黃芪遺傳多樣性與遺傳結(jié)構(gòu)分析[J].草地學(xué)報，2019，27（5）：1154-1162.

LIU Y L， GENG Y P， XIE X D， et al .. Genetic diversity and genetic structure analysis of Astragalus based on SSR molecular marker [J]. Acta Agrestia Sin.， 2019，27（5）：1154-1162.

［36］ 宋江琴，唐楠，唐道城，等.基于表型性狀和SSR標(biāo)記的9份萬壽菊種質(zhì)遺傳多樣性分析[J].種子，2021，40（10）：6-11，19.

SONG J Q， TANG N， TANG D C， et al .. Genetic diversity analysis of 9 marigold germplasms based on phenotypic traitsand SSR markers [J]. Seed， 2021，40（10）：6-11，19.