關(guān)鍵詞黃芪；葛根；配伍；鐵死亡；2型糖尿??；胰島素抵抗

2型糖尿?。╰ype2diabetesmellitus，T2DM）是一種由多種原因引起的以慢性高血糖為特點(diǎn)的代謝性疾病，該病具有較高的發(fā)病率，作為慢性非傳染性疾病對(duì)人類健康的影響僅次于腫瘤和心血管疾病[1]。T2DM可誘發(fā)多種嚴(yán)重的并發(fā)癥，甚至導(dǎo)致患者死亡[2―3]。胰島素抵抗（insulinresistance，IR）和胰島β細(xì)胞損傷為T2DM的主要病理機(jī)制。流行病學(xué)研究顯示，IR作為T2DM發(fā)病的病理基礎(chǔ)及關(guān)鍵環(huán)節(jié)貫穿于該病的始終[4]，因此積極改善IR是治療T2DM的關(guān)鍵策略之一。

鐵死亡是一種以鐵依賴性的脂質(zhì)過(guò)氧化物蓄積為特征的新型程序性細(xì)胞死亡方式[5]。鐵過(guò)載和脂質(zhì)過(guò)氧化物蓄積是鐵死亡發(fā)生的啟動(dòng)子與介質(zhì)，參與包括T2DMIR在內(nèi)的多種鐵過(guò)載相關(guān)疾病[6―7]。肝臟是儲(chǔ)存鐵的主要部位[8]，過(guò)量的鐵參與氧化還原反應(yīng)，可產(chǎn)生大量活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS），引發(fā)氧化應(yīng)激、脂質(zhì)過(guò)氧化和DNA損傷，從而破壞細(xì)胞膜成分，損傷肝細(xì)胞并促進(jìn)細(xì)胞程序性死亡，發(fā)生鐵死亡，繼而降低胰島素靶器官——肝臟對(duì)胰島素的敏感性，誘發(fā)T2DMIR。由此可見(jiàn)，抑制鐵死亡可能是緩解T2DMIR的有效手段。

盡管近年來(lái)適用于T2DM的化學(xué)藥種類日益增多，但其存在明顯的副作用（如低血糖風(fēng)險(xiǎn)、胃腸道反應(yīng)、肝損害、藥物依賴性及繼發(fā)性失效等），而具有多成分、多靶點(diǎn)、多途徑特點(diǎn)的中藥在T2DM（屬消渴癥范疇）治療領(lǐng)域具有一定優(yōu)勢(shì)。黃芪-葛根配伍出自《證治匯補(bǔ)》之黃芪葛根湯，黃芪補(bǔ)氣健脾、升陽(yáng)舉陷，葛根生津止渴，二者配伍，共奏健脾益氣、生津止渴之功，臨床多用于治療消渴，療效佳[9]。本課題組前期通過(guò)藥效學(xué)研究證實(shí)，黃芪-葛根配伍可顯著減輕T2DM大鼠IR程度，降低大鼠空腹血糖（fastingbloodglucose，F(xiàn)BG）水平，且黃芪、葛根以質(zhì)量比2∶1配伍時(shí)與降糖相關(guān)的主要成分析出最多[10]。本研究通過(guò)建立T2DMIR大鼠模型，以黃芪葛根配伍水煎液、鐵死亡抑制劑ferrostatin-1（Fer-1）及鐵死亡誘導(dǎo)劑erastin為干預(yù)手段，進(jìn)一步探討黃芪-葛根配伍對(duì)T2DMIR大鼠肝組織鐵死亡的影響及其潛在作用機(jī)制，以期為黃芪-葛根配伍防治T2DMIR的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括ACCU-CHEK型血糖儀（羅氏診斷產(chǎn)品有限公司），BIOBASE-EL10A型自動(dòng)酶標(biāo)儀（山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司），VE-180型垂直電泳槽、Tanon-5200型凝膠成像系統(tǒng)（上海天能科技有限公司），MiniProtean3Cell型電泳儀（美國(guó)Bio-Rad公司），TE77XP型電轉(zhuǎn)儀（美國(guó)Hoefer公司），PCL20型全自動(dòng)生化分析儀（深圳市活水床旁診斷儀器有限公司）。

1.2 主要藥物與試劑

黃芪飲片（產(chǎn)地內(nèi)蒙古，批號(hào)20221101）、葛根飲片（產(chǎn)地河南，批號(hào)20220321）均購(gòu)自北京同仁堂藥房；鐵死亡抑制劑Fer-1、鐵死亡誘導(dǎo)劑erastin（批號(hào)分別為132693、20230512，純度分別為99.96%、99.75%）均購(gòu)自美國(guó)MCE公司；鏈脲佐菌素（批號(hào)S-0130-5G）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；高密度脂蛋白膽固醇（high-densitylipoproteincholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（lowdensitylipoproteincholesterol，LDL-C）、總膽固醇（totalcholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）測(cè)試盒，肝功能酶測(cè)定試劑盒[貨號(hào)BC6，檢測(cè)指標(biāo)為丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alaninetransaminase，ALT）及天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartatetransaminase，AST）]，空腹胰島素（fastinginsulin，F(xiàn)INS）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒，以及丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）試劑盒（批號(hào)分別為20230131、20230218、20230129、20230221、20230315、20230521、20221020、20221024、20220804）均購(gòu)自南京建成科技有限公司；ROC試劑盒（批號(hào)MA0219）購(gòu)自大連美侖生物技術(shù)有限公司；鼠源谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4（glutathioneperoxidase4，GPX4）抗體、鼠源鐵蛋白重鏈1（ferritinheavychain1，F(xiàn)TH1）抗體、鼠源長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶4（long-chainacyl-CoAsynthetase4，ACSL4）抗體、鼠源β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）抗體（內(nèi)參）、兔源線粒體鐵蛋白（ferritinmitochondrial，F(xiàn)TMT）抗體、兔源胱氨酸/谷氨酸反向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（cystine/glutamateanti-porter，xCT）抗體、兔源ACSL3抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔、羊抗鼠IgG二抗（貨號(hào)分別為67763-1-Ig、68068-1-Ig、66617-1-Ig、66009-1-Ig、10727-1-AP、DF10202、20710-1-AP、SA00002-1、SA00002-2）均購(gòu)自美國(guó)Proteintech公司；BCA蛋白定量試劑盒（批號(hào)20220820）購(gòu)自北京蘭杰柯科技有限公司；煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）/還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）、Fe2+、Fe檢測(cè)試劑盒（批號(hào)分別為20230531、20230521、20230531）均購(gòu)自蘇州格銳思生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼料

雄性SPF級(jí)SD大鼠60只，體重（160±20）g，由江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（贛）2023-0001。大鼠架籠飼養(yǎng)，自然采光，實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)良好，溫度、濕度適宜。實(shí)驗(yàn)飼料（普通飼料和高脂飼料）由江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技中心提供。本實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核，編號(hào)為20230306030。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)藥物及制備

依據(jù)黃芪葛根湯原方劑量、古今度量衡、2020年版《中國(guó)藥典》（一部）所載黃芪參考用量及文獻(xiàn)報(bào)道[11]，本實(shí)驗(yàn)參考成人日服黃芪30g、葛根15g的劑量，并依據(jù)《人和動(dòng)物間按體表面積折算的等效劑量比值表》中人與大鼠體表面積換算系數(shù)（6.3），計(jì)算得到黃芪葛根配伍大鼠等效給藥劑量為4.05g/（kg·d）（以生藥總量計(jì)）。黃芪、葛根以質(zhì)量比2∶1配取后，加10倍量水，浸泡0.5h，武火快速煮沸后轉(zhuǎn)文火煎煮30min，過(guò)濾；藥渣按上述方法重復(fù)提取1次，過(guò)濾；合并2次濾液，蒸發(fā)濃縮，得質(zhì)量濃度為0.405g/mL（以生藥總量計(jì)）的黃芪-葛根水煎液，于4℃下保存，備用。

2.2 分組、造模與給藥

取雄性SD大鼠60只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，測(cè)量大鼠體重及FBG并據(jù)此分為對(duì)照組（12只）和造模組（48只）。造模組大鼠給予高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)4周后以25mg/kg的劑量一次性尾靜脈注射1%鏈脲佐菌素溶液以復(fù)制T2DMIR大鼠模型；3d后，禁食、不禁水12h，檢測(cè)大鼠FBG水平，若FBG≥11.7mmol/L表示T2DMIR大鼠模型復(fù)制成功[12]。對(duì)照組大鼠以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)4周后，一次性尾靜脈注射等體積檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。依據(jù)體重及FBG將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、黃芪-葛根配伍組（QG組）、鐵死亡抑制劑組（Fer-1組）、黃芪-葛根配伍+鐵死亡誘導(dǎo)劑組（QG+erastin組），每組12只。對(duì)照組大鼠給予等體積生理鹽水灌胃，自由飲水，基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，腹腔注射等體積生理鹽水；模型組大鼠給予等體積生理鹽水灌胃，自由飲水，高脂飼料喂養(yǎng)，腹腔注射等體積生理鹽水；QG組大鼠按4.05g/（kg·d）的劑量灌胃黃芪葛根水煎液，同時(shí)以高脂飼料喂養(yǎng)，自由飲水，腹腔注射等體積生理鹽水；Fer-1組大鼠灌胃等體積生理鹽水，并腹腔注射Fer-15mg/kg[13―14]，隔日1次，同時(shí)以高脂飼料喂養(yǎng)，自由飲水；QG+erastin組大鼠按4.05g/（kg·d）的劑量灌胃黃芪-葛根水煎液，并腹腔注射erastin10mg/（kg·d）[15]，同時(shí)以高脂飼料喂養(yǎng)，自由飲水。灌胃及腹腔注射體積均為10mL/kg，連續(xù)干預(yù)4周。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中共有14只大鼠死亡，其中模型組4只、QG組3只、Fer-1組2只、QG+erastin組5只。

2.3 大鼠一般情況觀察

每天更換墊料前觀察大鼠的一般狀態(tài)，包括大鼠的毛色、精神狀態(tài)、反應(yīng)力，并記錄大鼠的飲水量及尿量等。

2.4 大鼠血清、組織采集與留存

末次干預(yù)結(jié)束后，禁食、不禁水12h，麻醉大鼠，于腹主動(dòng)脈取血。血樣靜置后于4℃下以3000r/min離心10min，分離血清，于－20℃下保存，備用。取血后，迅速打開(kāi)大鼠腹腔，充分暴露肝臟組織，快速取出，剪取相同部位肝臟組織，洗凈，吸干。一部分肝臟組織固定于多聚甲醛溶液中，待后續(xù)行蘇木精-伊紅（hematoxylineosin，HE）染色；剩余肝臟組織于－80℃下凍存，用于后續(xù)相關(guān)指標(biāo)及蛋白檢測(cè)。

2.5 大鼠FBG及生化指標(biāo)檢測(cè)

藥物干預(yù)前及干預(yù)后使用血糖儀對(duì)各組大鼠尾尖采血，檢測(cè)FBG水平；取“2.4”項(xiàng)下各組大鼠的血清樣品，嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)方法操作，使用微板法檢測(cè)各組大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平，使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)AST、ALT水平。

2.6 大鼠FINS及IR相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)

取“2.4”項(xiàng)下各組大鼠的血清樣品，按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)要求，采用ELISA法檢測(cè)血清中FINS水平，并按下式計(jì)算穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)（homeostasismodelassessmentofinsulinresistance，HOMA-IR）和胰島素敏感性指數(shù)（insulinsensitivityindex，ISI）：HOMA-IR＝FBG×FINS/22.5[16]；ISI＝1/（FBG×FINS）[因ISI值為非正態(tài)分布，故以其計(jì)算結(jié)果的自然對(duì)數(shù)（insulinactionindex，IAI）表示并分析][17]。

2.7 大鼠肝臟組織中脂質(zhì)過(guò)氧化、內(nèi)源性抗氧化活性指標(biāo)及Fe2+、Fe水平檢測(cè)

取“2.4”項(xiàng)下各組大鼠凍存的肝臟組織樣品，按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)要求，以羥胺法檢測(cè)各組大鼠肝臟組織中SOD、MDA水平，以比色法檢測(cè)GSH水平，以亞鐵嗪比色法檢測(cè)Fe2+、Fe水平，以微板法檢測(cè)NADP+/NADPH水平，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)大鼠ROS水平。

2.8 大鼠肝臟組織病理形態(tài)學(xué)觀察

取“2.4”項(xiàng)下各組大鼠經(jīng)固定（48h）的肝臟組織，用水沖洗，經(jīng)乙醇脫水后，包埋、切片；取切片，進(jìn)行HE染色后，脫水封片，使用顯微鏡觀察大鼠肝臟組織病理形態(tài)并拍照[18]。

2.9 大鼠肝臟組織鐵死亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平檢測(cè)

采用Westernblot法檢測(cè)。取“2.4”項(xiàng)下各組大鼠凍存的肝臟組織樣品，提取總蛋白后，以BCA法測(cè)定蛋白濃度，并將蛋白煮沸變性；配制分離膠、上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、洗膜、封閉；分別加入GPX4、FTH1、ACSL3、ACSL4、FTMT、xCT一抗（稀釋度均為1∶2000）及內(nèi)參β-actin一抗（稀釋度為1∶10000），4℃孵育過(guò)夜；洗膜、加入相應(yīng)二抗（稀釋度均為1∶10000），于室溫下孵育60min；以TBST洗膜，加入ECL化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行顯色，置于凝膠成像系統(tǒng)成像，采用ImageJ軟件進(jìn)行灰度值檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析，以目的蛋白與內(nèi)參β-actin的灰度值比值表示目的蛋白的表達(dá)水平。

2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS25.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以x±s表示，多組間比較采用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較使用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠一般情況比較

對(duì)照組大鼠反應(yīng)靈敏、活躍，毛發(fā)柔順光澤，日排尿量、飲水量均正常；與對(duì)照組比較，模型組大鼠精神狀態(tài)欠佳，消瘦，毛發(fā)干枯晦暗，部分見(jiàn)脫毛、尾部潰爛癥狀，反應(yīng)遲緩，活動(dòng)減少，喜聚群，日排尿量、飲水量均顯著增加（P＜0.05）。與模型組比較，各給藥組大鼠上述表現(xiàn)均有不同程度減輕，日排尿量、飲水量均顯著降低（P＜0.05）。

3.2 各組大鼠FBG及生化指標(biāo)比較

給藥前，與對(duì)照組比較，其余各組大鼠FBG水平均顯著升高（P＜0.01）。給藥后，與對(duì)照組比較，模型組大鼠FBG、TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平均顯著升高，HDL-C水平顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，QG組和Fer-1組大鼠FBG、TC、TG、LDL-C、ALT水平均顯著降低，HDL-C水平均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），QG組AST水平顯著降低（P＜0.05）。與QG組比較，QG+erastin組大鼠FBG、ALT、AST、TC、TG、LDL-C水平均顯著升高，HDL-C水平顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.3 各組大鼠FINS及IR相關(guān)指標(biāo)比較

與對(duì)照組比較，模型組大鼠FINS水平、HOMA-IR均顯著升高，IAI顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，QG組和Fer-1組大鼠FINS水平、HOMA-IR均顯著降低，IAI均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。與QG組比較，QG+erastin組大鼠FINS水平、HOMA-IR均顯著升高，IAI顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表2。

3.4 各組大鼠脂質(zhì)過(guò)氧化、內(nèi)源性抗氧化活性指標(biāo)及Fe2+、Fe水平比較

與對(duì)照組比較，模型組大鼠GSH、SOD水平均顯著降低，MDA、ROS、Fe2+、Fe水平和NADP+/NADPH均顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，QG組與Fer-1組大鼠GSH、SOD水平均顯著升高，MDA、ROS、Fe2+、Fe水平和NADPH/NADP+均顯著降低（P＜0.01）。與QG組比較，QG+erastin組大鼠GSH、SOD水平均顯著降低，MDA、ROS、Fe2+、Fe水平和NADP+/NADPH均顯著升高（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表3。

3.5 各組大鼠肝臟組織病理學(xué)比較

對(duì)照組大鼠肝臟組織內(nèi)細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞排列整齊，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肝細(xì)胞空泡和脂肪變性，胞質(zhì)含粉紅色嗜酸性顆粒。與對(duì)照組比較，模型組大鼠肝臟組織內(nèi)肝細(xì)胞排列紊亂、腫脹，細(xì)胞核染色加深，可見(jiàn)較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和大量肝細(xì)胞空泡、脂肪變性。與模型組比較，QG組與Fer-1組大鼠肝臟組織的病理?yè)p傷均有不同程度改善。與QG組比較，QG+erastin組大鼠肝臟組織的病理?yè)p傷未見(jiàn)明顯改善，且肝細(xì)胞腫脹嚴(yán)重，可見(jiàn)較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和大量肝細(xì)胞空泡、脂肪變性。結(jié)果見(jiàn)圖1。

3.6 各組大鼠肝臟組織中鐵死亡相關(guān)蛋白表達(dá)比較

與對(duì)照組比較，模型組大鼠肝臟組織中GPX4、FTH1、FTMT、xCT、ACSL3T蛋白表達(dá)均顯著下調(diào)，ACSL4蛋白表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.01）。與模型組比較，QG組和Fer-1組大鼠肝臟組織中GPX4、FTH1、FTMT、xCT、ACSL3蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)，ACSL4蛋白表達(dá)均顯著下調(diào)（P＜0.05或P＜0.01）。與QG組比較，QG+erastin組大鼠肝臟組織中GPX4、FTH1、FTMT、xCT、ACSL3蛋白表達(dá)均顯著下調(diào)，ACSL4蛋白表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表4、圖2。

4 討論

目前，我國(guó)現(xiàn)有糖尿病患者數(shù)量居世界首位，且全世界每年因該病及其并發(fā)癥死亡的人數(shù)居高不下[1]，其中90%以上為T2DM患者[19]。在T2DM胰島β細(xì)胞功能障礙和IR這兩大主要病理表現(xiàn)中，IR是關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，參與了T2DM的發(fā)生，并貫穿整個(gè)病程。有學(xué)者提出，治療T2DM時(shí)，若僅改善胰島β細(xì)胞功能而未對(duì)IR進(jìn)行干預(yù)則效果欠佳[2]?？梢?jiàn)，積極改善IR是治療T2DM的關(guān)鍵策略，具有重要的臨床意義。

T2DM及IR屬中醫(yī)學(xué)“消渴”范疇，脾氣虛乃消渴發(fā)生的內(nèi)在因素，健脾益氣升陽(yáng)為主要治法[20]。黃芪與葛根配伍，辛甘而溫，有健脾益氣、升清止渴之功，可用治于屬“消渴”范疇之T2DM及IR。本研究結(jié)果顯示，黃芪-葛根配伍可顯著降低T2DMIR大鼠血清FBG、TC、TG、LDL-C、AST、ALT、FINS水平及HOMA-IR，升高HDL-C水平和IAI，表明該配伍確有降血糖、減輕IR、治療T2DM之功效。

以鐵過(guò)載及脂質(zhì)過(guò)氧化物蓄積為特征的鐵死亡可誘發(fā)包括T2DM及IR在內(nèi)的大量疾病[21]，而胰島素靶器官肝臟是最有可能被鐵過(guò)載累及的器官之一[8]。研究指出，抑制肝細(xì)胞鐵死亡的發(fā)生可能是緩解和治療T2DMIR的有效手段。鐵水平是鐵死亡發(fā)生的重要條件，且在機(jī)體鐵穩(wěn)態(tài)中，F(xiàn)TH1具有重要的鐵儲(chǔ)存作用，當(dāng)該蛋白表達(dá)減少，可使細(xì)胞內(nèi)Fe2+水平上升，誘發(fā)芬頓反應(yīng)，使ROS大量蓄積，從而促進(jìn)氧化應(yīng)激發(fā)生[22]；ACSL4是鐵死亡過(guò)程中的必需因子，其表達(dá)產(chǎn)物在滅活GPX4、促進(jìn)鐵死亡的進(jìn)展中扮演著重要角色[6]；多不飽和脂肪酸可促進(jìn)鐵死亡，ACSL3可將單不飽和脂肪酸催化為單不飽和脂肪酸乙酰輔酶A，進(jìn)而與多不飽和脂肪酸拮抗脂質(zhì)過(guò)氧化的不良效應(yīng)；NADP+/NADPH可反映肝臟組織脂質(zhì)過(guò)氧化水平；GPX4具有抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、清除脂質(zhì)過(guò)氧化物、維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原穩(wěn)態(tài)的作用，其表達(dá)下調(diào)通常被認(rèn)為是鐵死亡發(fā)生的關(guān)鍵；xCT在GSH的合成、細(xì)胞內(nèi)GSH含量的維持、抑制細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷方面具有重要作用，是細(xì)胞抵抗鐵死亡的重要因素[23―24]；FTMT在維持細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)和防止ROS生成的過(guò)程中起著重要作用，可通過(guò)減少細(xì)胞氧化應(yīng)激和ROS使線粒體鐵依賴性氧化損傷減少[25]，在保護(hù)線粒體免受鐵過(guò)量引起的鐵死亡損傷方面發(fā)揮重要作用[26]。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組大鼠肝臟組織中FTH1蛋白的表達(dá)顯著降低，血清Fe2+及Fe水平均顯著升高，提示模型組大鼠肝組織中出現(xiàn)明顯的鐵過(guò)載；經(jīng)黃芪-葛根配伍水煎液或Fer-1干預(yù)后，大鼠肝臟組織中FTH1蛋白的表達(dá)上調(diào)，血清Fe2+及Fe水平均顯著降低，說(shuō)明黃芪-葛根配伍可有效緩解T2DMIR大鼠肝組織中的鐵負(fù)荷。本研究結(jié)果還顯示，與對(duì)照組比較，模型組大鼠肝臟組織中ROS、MDA、ACSL4的表達(dá)及NADP+/NADPH均顯著升高，GSH、SOD及ACSL3表達(dá)顯著降低，提示模型組大鼠肝臟組織氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，存在較高水平的脂質(zhì)過(guò)氧化和明顯的氧化損傷；經(jīng)黃芪-葛根配伍水煎液或Fer-1干預(yù)后，大鼠肝臟組織中ROS、MDA、ACSL4的表達(dá)及NADP+/NADPH均顯著降低，SOD、GSH及ACSL3的表達(dá)均顯著升高，提示黃芪-葛根配伍水煎液可有效減輕T2DMIR大鼠氧化應(yīng)激損傷，拮抗脂質(zhì)過(guò)氧化及出現(xiàn)的不良效應(yīng)。此外，本研究結(jié)果還顯示，與對(duì)照組大鼠比較，模型組大鼠肝臟組織中GPX4、xCT、FTMT的表達(dá)均顯著降低，提示模型組大鼠發(fā)生鐵死亡；經(jīng)黃芪-葛根配伍水煎液或Fer-1干預(yù)后，GPX4、xCT、FTMT表達(dá)顯著升高，提示黃芪-葛根配伍水煎液可抑制T2DMIR大鼠體內(nèi)鐵死亡的發(fā)生。為了進(jìn)一步驗(yàn)證鐵死亡在黃芪-葛根配伍水煎液改善T2DM大鼠IR中的作用，本研究在黃芪-葛根配伍水煎液的基礎(chǔ)上加用了鐵死亡激活劑erastin，結(jié)果顯示，erastin可顯著逆轉(zhuǎn)該水煎液對(duì)T2DMIR大鼠各定量指標(biāo)的改善作用，提示其改善T2DMIR的作用可能是通過(guò)抑制鐵死亡實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，黃芪-葛根配伍水煎液可降低T2DMIR大鼠的FBG水平，減輕其IR程度和肝臟組織鐵負(fù)荷，緩解大鼠肝臟組織病理?yè)p傷，上述作用與其抑制鐵死亡有關(guān)。但本研究并未通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)以進(jìn)一步證實(shí)鐵死亡與肝臟組織損傷之間的具體聯(lián)系，尚待進(jìn)一步探索，以明確其作用機(jī)制。