中圖分類號(hào) R965；R735.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2025）02-0191-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.02.10

摘要 目的 探究歐前胡素（IMP-SD）調(diào)節(jié)含鋅指和BTB結(jié)構(gòu)域7B（ThPOK）表達(dá)對(duì)胃癌（GC）細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響。方法 取人GC細(xì)胞MKN-7，分為對(duì)照組（不給藥），IMP-SD低、中、高濃度組（分別給予40、80、160 μmol/L 的IMP-SD），si-ThPOK和si-NC組[先給予160 μmol/L 的IMP-SD，再分別轉(zhuǎn)染ThPOK小分子干擾RNA（si-ThPOK）及其陰性對(duì)照（si-NC）]）。經(jīng)相應(yīng)處理后，檢測(cè)各組細(xì)胞的克隆形成、遷移、侵襲能力及凋亡情況，自然殺傷（NK）細(xì)胞的殺傷作用，T細(xì)胞的分布情況，以及ThPOK、程序性死亡受體1（PD-1）及其配體（PD-L1）的表達(dá)情況。結(jié)果 與對(duì)照組比較，IMP-SD各濃度組的細(xì)胞克隆數(shù)、遷移細(xì)胞數(shù)、侵襲細(xì)胞數(shù)和PD-1、PD-L1 蛋白的表達(dá)均顯著降低或下調(diào)，細(xì)胞凋亡率、NK細(xì)胞的殺傷活性、CD4+ T細(xì)胞比例、CD4+ T細(xì)胞比例與CD8+ T細(xì)胞比例的比值（CD4+ T/CD8+ T）、ThPOK蛋白的表達(dá)均顯著升高或上調(diào)，且有濃度依賴性（P＜0.05）；與IMP-SD高濃度組和si-NC組比較，si-ThPOK組的細(xì)胞克隆數(shù)、遷移細(xì)胞數(shù)、侵襲細(xì)胞數(shù)和PD-L1、PD-1 蛋白的表達(dá)均顯著升高或上調(diào)，細(xì)胞凋亡率、NK細(xì)胞的殺傷活性、CD4+ T細(xì)胞比例、CD4+ T/CD8+ T、ThPOK蛋白的表達(dá)均顯著降低或下調(diào)（P＜0.05）。結(jié)論 IMP-SD可能通過(guò)促進(jìn)ThPOK蛋白的表達(dá)，從而減弱GC細(xì)胞的克隆形成、遷移、侵襲能力，促進(jìn)其凋亡，抑制其免疫逃逸。

關(guān)鍵詞 歐前胡素；ThPOK；胃癌細(xì)胞；免疫逃逸；惡性生物學(xué)行為

近年來(lái)，盡管胃癌（gastric cancer，GC）的發(fā)病率和相關(guān)死亡率持續(xù)降低，但2020 年全球新發(fā)病例近109萬(wàn)、死亡病例約77 萬(wàn)，GC仍是全球第三大癌癥死亡原因[1]。GC患者確診時(shí)常處于晚期，主要通過(guò)手術(shù)切除治療，但可因轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)而導(dǎo)致患者總體預(yù)后不佳。研究指出，轉(zhuǎn)移、免疫逃逸和對(duì)治療的抵抗與GC患者的不良預(yù)后密切相關(guān)[2]。腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸是其通過(guò)修飾自身表面抗原、募集抑制性免疫細(xì)胞/分子及改變腫瘤組織周圍微環(huán)境等途徑來(lái)逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)控、識(shí)別及攻擊，從而繼續(xù)分裂生長(zhǎng)的過(guò)程[3]。因此，了解GC細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制并開發(fā)針對(duì)該機(jī)制的藥物，對(duì)于GC的臨床治療具有重要的意義。

歐前胡素（imperatorin，IMP-SD）能抑制腫瘤細(xì)胞的活力，使細(xì)胞周期停滯，抑制喉癌、橫紋肌肉瘤、骨肉瘤和GC等腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移，并促進(jìn)其凋亡[4―7]。含鋅指和BTB結(jié)構(gòu)域7B（zinc finger and BTB domain 7B，ThPOK）是POZ 結(jié)構(gòu)域Krüppel 樣鋅指（POZ domainKrüppel-like zinc finger，POK）家族成員，對(duì)成熟輔助性T細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)和分化至關(guān)重要，可控制CD4+ T細(xì)胞的分化并調(diào)節(jié)其功能，在直腸癌、胸腺癌、GC細(xì)胞的免疫逃逸過(guò)程中具有重要作用[8―9]。ThPOK轉(zhuǎn)錄沉默元件可抑制ThPOK 的表達(dá)，從而啟動(dòng)腸黏膜中CD4+腸上皮淋巴細(xì)胞的分化[10]?？梢?jiàn)，調(diào)控ThPOK的表達(dá)是調(diào)節(jié)T細(xì)胞分化的重要機(jī)制。此外，過(guò)表達(dá)的ThPOK可減弱GC細(xì)胞的活力，增加T 細(xì)胞的分化，并可通過(guò)誘導(dǎo)精子尾部富含PG的重復(fù)序列1 使胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶信號(hào)通路失活，從而抑制GC細(xì)胞的免疫逃逸[11]。然而，IMP-SD 能否通過(guò)調(diào)節(jié)ThPOK 的表達(dá)來(lái)影響GC細(xì)胞免疫逃逸等惡性生物學(xué)行為尚不明確?；诖耍狙芯繑M探討IMPSD對(duì)GC細(xì)胞多種惡性生物學(xué)行為的影響，并探討相應(yīng)作用的發(fā)揮是否與調(diào)控ThPOK的表達(dá)有關(guān)，以期為GC有效治療藥物的研發(fā)及應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所有主要儀器包括NanoFCM型流式細(xì)胞儀（廈門福流生物科技有限公司），ChemiDocTM型化學(xué)發(fā)光成像儀、CriterionTM型垂直電泳儀（美國(guó)Bio-Rad 公司），CX40M 型顯微鏡[舜宇光學(xué)科技（集團(tuán)）有限公司]，F(xiàn)ormaTM Steri-Cult型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱、Multiskan SkyHigh型生物酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

IMP-SD 對(duì)照品（ 批號(hào)M71520230321，純度≥95.0%）購(gòu)自美國(guó)MSD公司；GC細(xì)胞專用培養(yǎng)基RPMI-1640、胎牛血清、青- 鏈霉素雙抗溶液（貨號(hào)分別為PM150110、164210-50、PB180120）均購(gòu)自武漢普諾賽生命科技有限公司；鼠源ThPOK單克隆抗體、鼠源程序性死亡受體1（programmed death-1，PD-1）單克隆抗體、兔源程序性死亡受體配體1（programmed death-ligand 1，PD-L1）單克隆抗體、兔源甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）多克隆抗體（貨號(hào)分別為GTX83353、GTX20256、GTX635975、GTX100118）均購(gòu)自美國(guó)GenTex 公司；CD4+、CD8+熒光抗體和山羊抗兔、山羊抗鼠IgG（Hamp;L）二抗（批號(hào)分別為ab95591、ab210372、ab6702、ab6708）均購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司；人CD4+ T、CD8+ T細(xì)胞檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)分別為TBDCH100154、TBDCH100140）均購(gòu)自上海研瑾生物科技有限公司；人自然殺傷（naturalkill，NK）細(xì)胞檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)qy-1953R）購(gòu)自齊一生物科技（上海）有限公司；CCK-8 試劑（批號(hào)96992）購(gòu)自德國(guó)Merck 公司；Annexin Ⅴ-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（批號(hào)MA0220）購(gòu)自大連美侖生物技術(shù)有限公司；基質(zhì)膠（批號(hào)AC-M082704）購(gòu)自百普賽斯生物科技有限公司；Lipofectamine 2000 轉(zhuǎn)染試劑（批號(hào)11668019）購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司；ThPOK 小分子干擾RNA（si-ThPOK）及其陰性對(duì)照（si-NC）（批號(hào)分別為siB112503026314-1-5、siB108436814-123-1-5）均購(gòu)自廣州市銳博生物科技有限公司。

1.3 細(xì)胞

人GC細(xì)胞MKN-7（貨號(hào)CL-0574）購(gòu)自武漢普諾賽生命科技有限公司；人外周血CD8+ T細(xì)胞（貨號(hào)PRI-H-00121）購(gòu)自上海中喬新舟生物科技有限公司；人外周血CD4+ T 細(xì)胞（貨號(hào)ABC-TC3993）購(gòu)自北京百奧創(chuàng)新科技有限公司；人NK細(xì)胞（貨號(hào)CP-H168）購(gòu)自武漢益普生物科技有限公司。

2 方法

2.1 IMP-SD干預(yù)濃度篩選

采用CCK-8 法檢測(cè)、篩選。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN-7 細(xì)胞，按每孔3 000 個(gè)接種于96 孔板中，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后，分別加入含不同濃度IMP-SD[0（對(duì)照）、20、40、80、160、200 μmol/L[12]]的含胎牛血清、青-鏈霉素雙抗的RPMI-1640 培養(yǎng)基（以下稱“完全培養(yǎng)基”），并設(shè)置不含藥物、不含細(xì)胞的空白對(duì)照（每濃度設(shè)置6 個(gè)復(fù)孔）。培養(yǎng)48 h 后，每孔加入CCK-8 試劑10 μL，孵育2 h，使用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔的吸光度，并計(jì)算細(xì)胞存活率[細(xì)胞存活率＝（實(shí)驗(yàn)孔吸光度值－空白對(duì)照孔吸光度值）/（對(duì)照孔吸光度值－空白對(duì)照吸光度值）×100%]和半數(shù)抑制濃度（IC50），以確定后續(xù)實(shí)驗(yàn)IMP-SD的低、中、高濃度。

2.2 MKN-7 細(xì)胞分組與干預(yù)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN-7 細(xì)胞，隨機(jī)分為對(duì)照組，IMP-SD 低、中、高濃度組（L-IMP-SD 組、M-IMP-SD 組、H-IMP-SD組），si-NC組和si-ThPOK組，每組設(shè)置6 個(gè)復(fù)孔。對(duì)照組細(xì)胞加入完全培養(yǎng)基；IMP-SD 各濃度組細(xì)胞分別加入含相應(yīng)濃度IMP-SD（根據(jù)“2.1”項(xiàng)下結(jié)果設(shè)置）的完全培養(yǎng)基；si-NC、si-ThPOK 組細(xì)胞經(jīng)含高濃度IMP-SD 的完全培養(yǎng)基處理后，分別轉(zhuǎn)染si-NC、si-ThPOK（以si-NC組的ThPOK 表達(dá)較H-IMP-SD 組基本不變且si-ThPOK組的ThPOK表達(dá)較H-IMP-SD組顯著下降為轉(zhuǎn)染成功）。

2.3 MKN-7 細(xì)胞克隆形成能力檢測(cè)

采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN-7細(xì)胞，按“2.2”項(xiàng)下方法分組、處理。培養(yǎng)10 d（每3 d 更換培養(yǎng)基并重新給藥）后，棄去培養(yǎng)基，細(xì)胞以4% 多聚甲醛溶液固定30 min，再以0.1% 結(jié)晶紫染液染色30min；移除染液，細(xì)胞用磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗，風(fēng)干后，使用顯微鏡觀察并記錄各組的細(xì)胞克隆數(shù)（＞10 個(gè)細(xì)胞即算1個(gè)克隆）。

2.4 MKN-7 細(xì)胞遷移和侵襲能力檢測(cè)

均采用Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN-7 細(xì)胞，經(jīng)消化后以PBS 漂洗，并以不含血清的RPMI-1640 培養(yǎng)基重懸，制成1×105個(gè)/mL的細(xì)胞懸液。取上述懸液100 μL，加至Transwell 小室上層；取完全培養(yǎng)基600 μL，置于小室下層。上層細(xì)胞按“2.2”項(xiàng)下方法分組、處理。培養(yǎng)24 h 后，收集穿膜細(xì)胞，以4% 多聚甲醛溶液固定30 min，再以0.1％結(jié)晶紫染液染色10min，自然風(fēng)干后，使用顯微鏡觀察并記錄各組的遷移細(xì)胞數(shù)。以基質(zhì)膠處理小室上層，其余操作同前，使用顯微鏡觀察并記錄各組的侵襲細(xì)胞數(shù)。

2.5 MKN-7 細(xì)胞凋亡檢測(cè)

采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN-7 細(xì)胞，按“2.2”項(xiàng)下方法分組、處理。培養(yǎng)24 h 后，收集各組細(xì)胞，以PBS漂洗后，加入binding buffer 200 μL重懸；加入Annexin Ⅴ-FITC 染液5 μL，于室溫下孵育10 min；加入PI 染液10 μL，于避光條件下孵育10 min，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況。

2.6 NK細(xì)胞對(duì)MKN-7細(xì)胞的殺傷作用檢測(cè)

采用乳酸脫氫酶釋放法檢測(cè)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN-7 細(xì)胞，按“2.2”項(xiàng)下方法分組、處理。培養(yǎng)24 h后，收集各組細(xì)胞，與NK細(xì)胞（各組MKN-7 細(xì)胞與NK細(xì)胞的數(shù)量比均為1∶10）混合，于37 ℃下共同培養(yǎng)6 h；收集細(xì)胞，加入乳酸脫氫酶50 μL，于室溫下孵育30min，使用酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)其光密度（OD450）值，再按相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書方法計(jì)算NK細(xì)胞殺傷活性。

2.7 MKN-7 細(xì)胞的T細(xì)胞分布情況檢測(cè)

采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN-7 細(xì)胞，按“2.2”項(xiàng)下方法分組、處理。培養(yǎng)24 h 后，收集各組細(xì)胞，分別與CD4+ T、CD8+ T 細(xì)胞（各組MKN-7 細(xì)胞與T細(xì)胞的數(shù)量比均為1∶10）混合，于37 ℃下共同培養(yǎng)6 h；收集細(xì)胞，分別加入CD4+、CD8+熒光抗體（稀釋比例均為1∶500），于室溫下避光孵育20 min；收集細(xì)胞，以PBS重懸后，使用流式細(xì)胞儀分析CD4+ T細(xì)胞、CD8+ T細(xì)胞比例及兩者比值（CD4+ T/CD8+ T）。

2.8 MKN-7 細(xì)胞中ThPOK、PD-1、PD-L1 蛋白表達(dá)檢測(cè)

采用Western blot 法檢測(cè)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN-7細(xì)胞，按“2.2”項(xiàng)下方法分組、處理。培養(yǎng)24 h 后，收集各組細(xì)胞，提取蛋白。蛋白經(jīng)定量、變性后進(jìn)行電泳分離、轉(zhuǎn)膜、封閉；洗膜后，加入ThPOK、PD-1、PD-L1、GAPDH一抗（稀釋比例分別為1∶500、1∶1 000、1∶1 000、1∶5 000），于4 ℃下孵育過(guò)夜；洗膜后，加入相應(yīng)二抗（稀釋比例均為1∶5 000），于室溫下孵育1 h，使用化學(xué)發(fā)光試劑顯影后，于化學(xué)發(fā)光成像儀下成像。使用Image J 軟件，以GAPDH為內(nèi)參，量化各目的蛋白的表達(dá)情況。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.00 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以x±s 表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 IMP-SD干預(yù)濃度的篩選結(jié)果

經(jīng)0、20、40、80、160、200 μmol/L IMP-SD干預(yù)后，細(xì)胞存活率隨其濃度的增加而逐漸降低，IC50 為168.42μmol/L，遂確定以40、80、160 μmol/L 作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的低、中、高濃度。結(jié)果見(jiàn)圖1。

3.2 IMP-SD對(duì)MKN-7 細(xì)胞克隆形成能力的影響

與對(duì)照組比較，L-IMP-SD、M-IMP-SD、H-IMP-SD組的細(xì)胞克隆數(shù)均顯著降低，且有濃度依賴性（P＜0.05）；與H-IMP-SD 組、si-NC組比較，si-ThPOK 組的細(xì)胞克隆數(shù)顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3。

3.3 IMP-SD對(duì)MKN-7 細(xì)胞遷移和侵襲的影響

與對(duì)照組比較，L-IMP-SD、M-IMP-SD、H-IMP-SD組的遷移細(xì)胞數(shù)、侵襲細(xì)胞數(shù)均顯著減少，且有濃度依賴性（P＜0.05）；與H-IMP-SD 組、si-NC 組比較，si-ThPOK 組的遷移細(xì)胞數(shù)、侵襲細(xì)胞數(shù)均顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1、圖4。

3.4 IMP-SD對(duì)MKN-7 細(xì)胞凋亡的影響

與對(duì)照組[（2.96±0.28）%]比較，L-IMP-SD、M-IMPSD、H-IMP-SD 組細(xì)胞的凋亡率[（18.47±1.29）% 、（31.85±2.57）%、（49.55±3.64）%]均顯著升高，且有濃度依賴性（P＜0.05）；與H-IMP-SD組、si-NC組[（47.26±3.78）% ] 比較，si-ThPOK 組細(xì)胞的凋亡率[（12.78±3.19）%]顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖5。

3.5 IMP-SD對(duì)NK細(xì)胞殺傷活性的影響

與對(duì)照組[（8.50±0.43）%]比較，L-IMP-SD、M-IMPSD、H-IMP-SD 組細(xì)胞的NK 細(xì)胞殺傷活性[（16.28±0.54）%、（28.77±1.08）%、（43.39±1.24）%]均顯著升高，且有濃度依賴性（P＜0.05）；與H-IMP-SD 組、si-NC 組[（42.67±1.36）%]比較，si-ThPOK 組細(xì)胞的NK 細(xì)胞殺傷活性[（14.95±1.07）%]顯著降低（P＜0.05）。

3.6 IMP-SD對(duì)MKN-7 細(xì)胞中T細(xì)胞分布情況的影響

與對(duì)照組比較，L-IMP-SD、M-IMP-SD、H-IMP-SD組的CD4+ T細(xì)胞比例和CD4+ T/CD8+ T均顯著升高，且有濃度依賴性（P＜0.05）；與H-IMP-SD 組、si-NC 組比較，si-ThPOK組的CD4+ T細(xì)胞比例和CD4+ T/CD8+ T均顯著降低（P＜0.05）；而各組的CD8+ T細(xì)胞比例比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

3.7 IMP-SD對(duì)MKN-7 細(xì)胞中相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，L-IMP-SD、M-IMP-SD、H-IMP-SD組細(xì)胞中ThPOK蛋白的表達(dá)顯著上調(diào)，PD-L1、PD-1 蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)，且有濃度依賴性（P＜0.05）；與HIMP-SD組、si-NC組比較，si-ThPOK組細(xì)胞中ThPOK蛋白的表達(dá)顯著下調(diào)，PD-L1、PD-1 蛋白的表達(dá)均顯著上調(diào)（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表3、圖6。

4 討論

GC是全球第四大常見(jiàn)癌癥、第三大癌癥死亡原因，在全球范圍內(nèi)造成了嚴(yán)重的健康負(fù)擔(dān)[1]。由于GC早期癥狀不明顯、定期篩查率低，大多數(shù)患者在確診時(shí)已處于晚期，手術(shù)切除和圍手術(shù)期化療的效果有限，加之轉(zhuǎn)移率、復(fù)發(fā)率較高，導(dǎo)致GC患者的總體預(yù)后不佳[1]。因此，闡釋GC發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制并挖掘新的治療策略是有必要的。

IMP-SD 是香豆素類天然化合物，具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性，并可增強(qiáng)多種抗腫瘤藥物的細(xì)胞毒性[4―6]。IMP-SD 能拮抗三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G 家族成員2（ATP-binding cassette subfamily Gmember 2，ABCG2）的活性，并可濃度依賴性地逆轉(zhuǎn)ABCG2 蛋白介導(dǎo)的多重耐藥性，以提高治療藥物用于ABCG2 高表達(dá)惡性腫瘤患者的有效性[4]。以往研究表明，IMP-SD 對(duì)人橫紋肌肉瘤和喉癌細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的生長(zhǎng)抑制作用，這種作用主要是通過(guò)阻滯與特定基因表達(dá)變化相關(guān)的細(xì)胞周期進(jìn)程而實(shí)現(xiàn)的[5]。研究指出，IMP-SD可通過(guò)第10 號(hào)染色體上缺失的磷酸酶及張力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog deleted onchromosome ten，PTEN）/磷脂酰肌醇3 激酶/蛋白激酶B/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白/p21 信號(hào)通路靶向上調(diào)人骨肉瘤細(xì)胞中的PTEN，使細(xì)胞周期停滯，從而抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖、遷移[6]。另有研究指出，IMP-SD 可下調(diào)環(huán)磷腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白1 的表達(dá)，從而阻斷食管癌細(xì)胞的侵襲，進(jìn)而減弱成纖維細(xì)胞旁分泌對(duì)腫瘤血管生成和轉(zhuǎn)移的影響[13]。還有研究指出，IMP-SD 可濃度依賴性地抑制人GC細(xì)胞的生長(zhǎng)，誘導(dǎo)DNA片段化，使細(xì)胞周期停滯在G1 期并促進(jìn)其凋亡[7]。以上研究均證實(shí)，IMP-SD 具有抗腫瘤活性。本研究也得出了相似的結(jié)果，即IMP-SD能抑制GC細(xì)胞的活力，可濃度依賴性地抑制GC細(xì)胞的克隆形成、遷移、侵襲，并誘導(dǎo)其凋亡。

ThPOK是轉(zhuǎn)錄因子POK家族成員，其Krüppel 樣鋅指結(jié)構(gòu)域（負(fù)責(zé)與DNA結(jié)合）和調(diào)節(jié)性POZ/BTB結(jié)構(gòu)域（介導(dǎo)與其他因子的相互作用）對(duì)成熟輔助性T 細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)和分化至關(guān)重要，與CD4+ T細(xì)胞的功能密切相關(guān)，也是介導(dǎo)CD4+ T 細(xì)胞轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)[14]。過(guò)表達(dá)的ThPOK 可抑制GC細(xì)胞的活力，可促進(jìn)與GC細(xì)胞共培養(yǎng)的T 細(xì)胞的活化，進(jìn)而抑制GC 細(xì)胞的免疫逃逸[11]。此外，GC細(xì)胞可提高CD4+ T 細(xì)胞中ThPOK 的表達(dá)，促進(jìn)CD4+ T 細(xì)胞的分化，使后者參與GC 細(xì)胞的免疫逃逸[15]。效應(yīng)細(xì)胞在免疫系統(tǒng)的監(jiān)視下優(yōu)先清除免疫原性高的腫瘤細(xì)胞，而腫瘤細(xì)胞的有效清除需要CD4+ T和CD8+ T細(xì)胞[16―17]。其中，CD4+ T細(xì)胞對(duì)適應(yīng)性免疫應(yīng)答的發(fā)生和維持具有核心調(diào)控作用；CD8+ T細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)有關(guān)，可識(shí)別腫瘤細(xì)胞的表面抗原并轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)至細(xì)胞內(nèi)部，從而殺死腫瘤細(xì)胞，釋放更多的抗原，進(jìn)一步激活T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)；兩者比例失衡（如CD8+ T細(xì)胞耗竭而CD4+ T細(xì)胞生成）可促進(jìn)免疫逃逸的發(fā)生[18]。NK細(xì)胞是一種先天免疫細(xì)胞，在先天免疫防御中發(fā)揮重要作用，是抵御惡性腫瘤的第一道防線，其活力降低與GC進(jìn)展有關(guān)[2]。PD-1、PD-L1 對(duì)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸至關(guān)重要，腫瘤細(xì)胞可通過(guò)高表達(dá)PDL1而與CD8+ T 細(xì)胞表面的PD-1 結(jié)合，抑制T 細(xì)胞的活化，從而協(xié)助腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視，實(shí)現(xiàn)免疫逃逸[19]。本研究結(jié)果表明，經(jīng)IMP-SD 處理后，MKN-7 細(xì)胞中ThPOK 蛋白的表達(dá)、NK細(xì)胞殺傷活性，CD4+ T 細(xì)胞比例、CD4+ T/CD8+ T 均顯著升高或上調(diào)，PD-L1、PD-1 蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)；而轉(zhuǎn)染si-ThPOK后，細(xì)胞上述指標(biāo)的變化趨勢(shì)則剛好與H-IMP-SD 組相反。這表明，IMP-SD 能夠促進(jìn)ThPOK 蛋白的表達(dá)，抑制GC細(xì)胞的免疫逃逸。

綜上所述，IMP-SD可能通過(guò)促進(jìn)ThPOK蛋白的表達(dá)，從而減弱GC細(xì)胞的克隆形成、遷移、侵襲能力，促進(jìn)其凋亡，抑制其免疫逃逸。但本研究?jī)H基于細(xì)胞水平進(jìn)行了相關(guān)探索，尚需通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

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（收稿日期：2024-06-07 修回日期：2024-10-16）

（編輯：張?jiān)拢?/p>