摘 要：為研究不同鹽度對刀鱭（Coilia nasus）幼魚免疫酶活性和腸道菌群的影響，以人工繁育的刀鱭幼魚為試驗對象，設(shè)4個鹽度（0、10‰、20‰、30‰）處理組。結(jié)果表明：隨著鹽度的升高，刀鱭幼魚鰓組織超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）的活性先降低后升高，10‰鹽度時達(dá)到最低；而肝臟組織兩種酶的活性先升高后降低，20‰鹽度時達(dá)到最高；隨著鹽度的增加，幼魚腸道菌群中普雷沃氏菌屬（Prevotella）、棲糞桿菌屬（Faecalibacterium）等的比例逐漸增加，柯林斯菌屬（Collinsella）、芽殖菌屬A類菌群（Gemmiger_A）等的比例逐漸減少。以上研究表明，鹽度可以影響刀鱭幼魚的SOD和CAT酶活性及腸道微生物群落的變化。

關(guān)鍵詞：刀鱭（Coilia nasus）；鹽度；腸道；微生物群落；超氧化物歧化酶；過氧化氫酶

中圖分類號：S965.2"""" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1004-6755（2025）02-0004-04

刀鱭（Coilia nasus）是典型的洄游性魚類，每當(dāng)春、夏季，成群潮江而上，進(jìn)入淡水進(jìn)行生殖洄游^[1]。刀鱭在幼魚階段需適應(yīng)河流到海洋的環(huán)境變化，此時鹽度出現(xiàn)波動，刀鱭的免疫系統(tǒng)需要快速響應(yīng)，以應(yīng)對環(huán)境應(yīng)激。我國沿海鹽度差異明顯，尤其在養(yǎng)殖季節(jié)，大部分地區(qū)多雨，同時在河口等處易出現(xiàn)急性低鹽狀況，這成為制約水產(chǎn)動物生長存活的重要因素^[2]。本研究旨在探討不同鹽度條件對刀鱭幼魚超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）酶活性及腸道微生物群落的影響。研究將為評估水環(huán)境中的鹽度的變化對刀鱭幼魚的免疫系統(tǒng)和腸道健康的影響提供科學(xué)依據(jù)，促進(jìn)刀鱭的自然資源的保護(hù)，完善人工養(yǎng)殖技術(shù)。

1 試驗材料及方法

1.1 試驗材料

試驗用魚均采自遼寧省丹東市東港市長山鎮(zhèn)良種場有限公司人工繁育的刀鱭苗種。挑選規(guī)格一致的健康個體進(jìn)行試驗，初始體長為7～9 cm，初始體質(zhì)量為2～3 g。

1.2 試驗方法

試驗共設(shè)4個鹽度處理組，鹽度分別為0、10‰、20‰和30‰，每組設(shè)2個平行，每個平行放養(yǎng)30尾魚，先在淡水中暫養(yǎng)2 d。然后分別置于各處理組進(jìn)行不同梯度的鹽度脅迫，試驗期間不投喂，共進(jìn)行3 d。試驗結(jié)束后，將魚麻醉，解剖，取出肝臟和鰓。所取組織用0.9%的生理鹽水沖洗干凈，液氮速凍后保存于-80 ℃的超低溫冷凍機(jī)中。腸道做腸道微生物群落分析^[3]。

試劑盒均采購于南京建成生物工程研究所有限公司。

1.3 測定方法

抽提腸道菌群群落總DNA，采用瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA質(zhì)量，分光光度計測定DNA濃度和純度。設(shè)計上游引物（5′GTGCCAGCMGCCGCGGTAA 3′）和下游引物（ 5′ CCGTCAATTCMTTTRAGTTT 3′），進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物用基因測序儀測序。

1.4 數(shù)據(jù)分析方法

運用SPSS 17.0和Excel對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和統(tǒng)計。顯著性水平（P）設(shè)為0.05，試驗數(shù)據(jù)均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。

2 結(jié)果分析

2.1 SOD和CAT酶活性結(jié)果分析

2.1.1 不同鹽度對刀鱭幼魚肝臟和鰓SOD酶活性的影響

如表1所示，隨著鹽度的升高，鰓組織SOD活性先降低后升高，10‰鹽度時達(dá)到最低，為（7.194±1.58）U·g^-1；而肝臟組織SOD活性則先升高后降低，20‰鹽度時達(dá)到最高，為（70.211±10.58）U·g^-1。

2.1.2 不同鹽度對刀鱭幼魚肝臟和鰓CAT酶活性的影響

如表1所示，相同組織的CAT活性變化趨勢與SOD活性相同，隨著鹽度的升高，鰓組織CAT活性先降低后升高，10‰鹽度時最低，為（7.902±10.06）U·g^-1，0鹽度時最高，為（92.123±48.30）U·g^-1，且顯著高于其它鹽度組（P＜0.05）；而肝臟組織CAT活性則先升高后降低，20‰鹽度時最高，為（166.984±45.77）U·g^-1，0鹽度時最低，為（72.227±14.63）U·g^-1，且顯著低于其他鹽度組（P＜0.05）。

2.2 腸道菌群結(jié)果分析

2.2.1 腸道菌群多樣性

如表2所示，4個鹽度組的腸道菌群樣品覆蓋率均接近于1.0，表明樣品中未被測序的菌群概率非常低。Shannon 和 Simpson 指數(shù)表征物種多樣性，數(shù)值越大，表示群落多樣性越高^[4]。無論是物種豐富度還是多樣性，鹽度為10‰時均為最低，這可能與該鹽度下有害菌占據(jù)優(yōu)勢有關(guān)。

2.2.2 腸道菌群豐富度

如圖1所示，不同鹽度下，刀鱭幼魚腸道內(nèi)的優(yōu)勢菌群存在著很大差異，0鹽度時的優(yōu)勢菌屬為柯林斯菌屬（Collinsella）、芽殖菌屬A類菌群（Gemmiger_A）等；鹽度10‰時的優(yōu)勢菌屬為柯林斯菌屬（Collinsella）、假單胞菌屬E類菌群（Pseudomonas_E）等；鹽度20‰時的優(yōu)勢菌屬為普雷沃氏菌屬（Prevotella）、棲糞桿菌屬（Faecalibacterium）等；鹽度30‰時的優(yōu)勢菌屬為普雷沃氏菌屬（Prevotella）、棲糞桿菌屬（Faecalibacterium）等。

從微生物群落角度分析，普雷沃氏菌屬（Prevotella）隨著鹽度的提高，豐度顯著提高，0鹽度時幾乎無法檢測到，而30‰鹽度時的豐度顯著高于其他菌屬；柯林斯菌屬（Collinsella）在低鹽度組（鹽度0、10‰）時的豐度整體高于高鹽度組（鹽度20‰、30‰），而棲糞桿菌屬（Faecalibacterium）和有益桿狀菌屬（Agathobacter）則與前者恰恰相反，在低鹽度組（鹽度0、10‰）時的豐度整體低于高鹽度組（鹽度20‰、30‰）；布勞特氏菌屬A類菌群（Blautia_A）和水桿狀菌屬B類菌群（Aquabacterium_B）在高鹽度組（鹽度30‰）時的豐度顯著低于其他鹽度組；芽殖菌屬A類菌群（Gemmiger_A）隨著鹽度的提高，豐度先降低后提高，0鹽度組時的豐度顯著高于其它鹽度組；假單胞菌屬E類菌群（Pseudomonas_E）和鞘氨醇單胞菌屬L類菌群（Sphingomonas_L）隨著鹽度的提高，豐度先提高后降低，10‰鹽度組時的豐度顯著高于其它鹽度組。寡養(yǎng)單胞菌屬A類菌群（Stenotrophomonas_A）隨著鹽度的提高，豐度先提高后降低，當(dāng)鹽度過高（鹽度30‰）時，幾乎無法檢測到。

3 討論

3.1 SOD和CAT酶活性

鹽度對魚類的抗氧化酶活力影響較大。溫久福等^[5]研究發(fā)現(xiàn)花鱸肝臟超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活力在淡水條件下（0 鹽度組） 活性最高，且隨鹽度的增加而逐漸下降。本試驗中觀察到，鹽度從0增加到20‰時，肝臟組織的SOD和CAT的酶活性均呈現(xiàn)上升趨勢，并在20‰鹽度時達(dá)到最高。這一現(xiàn)象可以理解為，隨著鹽度的增加，魚類面臨的滲透壓變化增大，從而引起了更強烈的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致體內(nèi)產(chǎn)生了更多的活性氧自由基，與冉鳳霞等^[6]研究結(jié)果相一致。這與以往發(fā)現(xiàn)結(jié)果相似^[7]。

然而，當(dāng)鹽度繼續(xù)增加到30‰時，SOD和CAT的酶活性卻出現(xiàn)了下降。這可能是由于在高鹽度環(huán)境下，刀鱭幼魚的滲透壓調(diào)節(jié)能力已經(jīng)達(dá)到極限，此時細(xì)胞可能遭受嚴(yán)重的功能損害，導(dǎo)致了抗氧化酶的合成或活性受到影響^[8]。而對于鰓而言，由于它本身具有一定的滲透壓調(diào)節(jié)功能，所以在鹽度開始變化時，并不依賴SOD和CAT的作用，在高鹽度（30‰）的狀態(tài)下，也能通過自身的滲透壓調(diào)節(jié)減少應(yīng)激，使SOD和CAT正常工作^[9]。

3.2 腸道菌群

魚類的腸道除了作為消化吸收器官外，同時也是最重要的免疫器官，腸道是機(jī)體面對外部環(huán)境最大的表面，在防止致病性物質(zhì)入侵方面起著重要作用^[10]。本試驗發(fā)現(xiàn)，不同鹽度下刀鱭幼魚腸道內(nèi)的優(yōu)勢菌群存在著很大差異，而不同鹽度環(huán)境下不同的菌群優(yōu)勢也會給魚腸道健康和免疫功能帶來巨大影響。

0鹽度時，柯林斯菌屬（Collinsella）、芽殖菌屬A類菌群（Gemmiger_A）等占優(yōu)勢。柯林斯菌屬（Collinsella）在腸道中能夠產(chǎn)生短鏈脂肪酸，如丁酸和乙酸，這些脂肪酸有助于維持腸道細(xì)胞的正常功能，減少炎癥反應(yīng)，增強腸道屏障，從而保護(hù)魚類免受病原菌的侵害^[11]。此外，Collinsella還能夠促進(jìn)腸道免疫系統(tǒng)的發(fā)育和調(diào)節(jié)，增強魚類的免疫力。芽殖菌屬A類菌群（Gemmiger_A）則是一種能夠產(chǎn)生丁酸的益生菌，丁酸對于腸道細(xì)胞的健康至關(guān)重要，能夠提供能量，促進(jìn)細(xì)胞生長和修復(fù)，減少炎癥反應(yīng)，增強腸道屏障，保護(hù)魚類免受病原菌的侵害^[12]。此外，芽殖菌屬A類菌群（Gemmiger_A）還能夠促進(jìn)腸道免疫系統(tǒng)的發(fā)育和調(diào)節(jié)，增強魚類的免疫力。

10‰鹽度時，假單胞菌屬E類菌群（Pseudomonas_E）開始大量繁殖。假單胞菌屬是一類革蘭氏陰性的好氧細(xì)菌，具有多變的代謝能力，和廣泛的適應(yīng)環(huán)境的能力，是一種常見的機(jī)會性病原體，可產(chǎn)生內(nèi)毒素、外毒素A、彈性蛋白酶、膠原酶、胰腺肽基酶等多種毒性物質(zhì)^[13]。

高鹽度（鹽度20‰、30‰）時，普雷沃氏菌屬（Prevotella）、棲糞桿菌屬（Faecalibacterium）等占優(yōu)勢。普雷沃氏菌屬具有分解植物性多糖的能力，這有助于刀鱭幼魚更好地利用飼料中的纖維成分，提高能量利用率。糞桿菌屬能夠通過影響腸道黏膜免疫細(xì)胞的活化和增殖，促進(jìn)刀鱭幼魚腸道黏膜免疫系統(tǒng)的發(fā)育和完善。

魚類腸道菌群的組成在淡水魚和海水魚中也有明顯不同，例如，馬阿敏等研究表明，多數(shù)淡水魚的腸道菌群以氣單胞菌、假單胞菌和擬桿菌等為主^[14]，而周志剛等^[15]研究表明，海水魚主要以假單胞菌、弧菌和黃桿菌等為主。試驗發(fā)現(xiàn)刀鱭在從淡水進(jìn)入到不同鹽度水體中，腸道菌群的組成發(fā)生了一定變化。

綜上所述，本研究表明鹽度可以影響刀鱭幼魚的SOD和CAT酶活性及腸道微生物群落的變化。從而影響其免疫能力和腸道健康，研究將為促進(jìn)刀鱭野生資源的保護(hù)和完善人工養(yǎng)殖技術(shù)提供理論依據(jù)。

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The effect of salinity on the activity of immune enzymes and gut microbiota in juvenile Coilia nasus

SU Peng^1，2，DONG Jie1，HAO Qinghong1，WANG Maolin1

（1.Dalian Fugu Food Co.，Ltd.，Dalian 116400，China；2.Liao ning Northern Key Laboratory of Applied Biology and Aquaculture of Fish，Dalian Ocean University，Dalian 116023，China）

Abstract：n order to study the effects of different salinities on the immunoenzyme activity and intestinal flora of juvenile Coilia nasus， four groups with different salinity （0， 10‰， 20‰， 30‰） were set up for artificially bred juvenile C. nasus. The results showed that the activities of superoxide dismutase （SOD） and catalase （CAT） in gill tissue of the fish decreased first and then increased with the increase of salinity， and reached the lowest level at 10‰ salinity. The activity of the two enzymes in liver tissue increased first and then decreased， and reached the highest level at 20‰ salinity. With the increase of salinity， the proportion of Prevotella and Faecali bacterium in gut microbiota of the fish increased gradually， while the proportion of Collinsella and Gemmiger_A decreased gradually. The results indicated that salinity can affect the SOD and CAT enzyme activities of juvenile C. nasus and its intestinal microbial community.

Key words：Coilia nasus;salinity;intestine;microbial community;superoxide dismutase;catalase

（收稿日期：2024-12-10）