李敬巖　楊京京　何麗馥　萬義增

[關(guān)鍵詞] 病理制片；脫水；浸蠟；包埋

[中圖分類號] R446.8 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]C[文章編號]1673-7211（2009）01（b）-160-01

在病理技術(shù)領(lǐng)域中，HE染色是最常規(guī)和最基本的操作技術(shù)，一張優(yōu)質(zhì)的HE切片，是病理診斷、教學(xué)和科研中一個不可缺少的環(huán)節(jié)。病理制片技術(shù)是病理學(xué)的一項重要組成部分。一位病理技術(shù)工作者，首先要求能懂得組織的石蠟包埋和HE染色的機(jī)制，熟練石蠟切片和HE染色技術(shù)的操作。幾十年來，病理技術(shù)有了較大的發(fā)展，新設(shè)備的問世使病理技術(shù)工作者大大減少了繁瑣的手工操作，新技術(shù)的應(yīng)用充實了病理診斷的方法，提高了診斷的準(zhǔn)確性。盡管如此，最常規(guī)、最基本、最重要的仍然是石蠟切片和HE染色，因為它的質(zhì)量與病理診斷的準(zhǔn)確性休息相關(guān)。一張優(yōu)質(zhì)的HE染色切片，可以清晰地觀察到各種不同的組織結(jié)構(gòu)作為病理診斷上的確切依據(jù)。制備一張優(yōu)質(zhì)的HE染色切片，絕非僅指染色，它包括很多方面：

1 固定

固定應(yīng)及時。采用10％的甲醛溶液固定組織，組織固定是制片的關(guān)鍵。新鮮的組織經(jīng)過適當(dāng)?shù)墓潭?，才能保持?xì)胞和組織的固有形態(tài)，否則，細(xì)胞內(nèi)的各種酶在缺氧時將細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)分解破壞，導(dǎo)致組織自溶。因此，手術(shù)切除的組織標(biāo)本一定要及時固定。固定液的選擇、固定液的量、組織塊的大小、固定的時間及固定溫度相當(dāng)重要的。Mallory曾經(jīng)說過：“若是你能取到新鮮的組織能切片不超過2～3 mm的切塊和記得固定液是10倍于組織塊的總體積，你的診斷的正確性已得到了80%的保證?！惫潭ǖ淖饔每梢娨话摺?/p>

2 脫水

脫水要徹底。脫水常用乙醇，要由低濃度逐級至高濃度，逐步置換組織內(nèi)水分。一般組織內(nèi)含有大量水分，所以在石蠟包埋前，必須脫去組織內(nèi)的所有水分。脫水劑的選擇，經(jīng)與水在任何比例下能混為一體，使組織內(nèi)的水分逐步減少，脫水必須干凈、徹底，組織脫水是關(guān)鍵，脫水不盡，影響以后的透明和浸蠟。如脫水不盡的蠟塊，切片后組織一經(jīng)與空氣接觸，即干燥收縮，蠟塊切面出現(xiàn)凹陷，甚至裂縫，切片時雖勉強(qiáng)切片，而染色時切片容易脫落。保留的蠟塊，遇到下次再切片時就會相當(dāng)困難。所以，無水乙醇中應(yīng)保持絕對無水，無水乙醇要定期和適時更換。

3 透明、浸蠟和包埋

透明宜充分，浸蠟需足夠，包埋應(yīng)恰當(dāng)。乙醇不是石蠟的溶劑，所以組織塊在浸蠟前要經(jīng)過一種既溶于乙醇又溶于石蠟的媒劑，這種媒劑就是二甲苯，它是檢驗脫水是否干凈的一種手段，脫水不好透明則不能達(dá)標(biāo)，透明用的二甲苯要定時更換。浸蠟多用純凈而熔點(diǎn)稍低的石蠟，軟硬適中（選蠟要依季節(jié)和地域的溫差而酌情考慮），浸蠟不充分或蠟溫不當(dāng)均影響染色質(zhì)量。包埋的蠟溫，一般以超過石蠟熔點(diǎn)2℃為宜，筆者認(rèn)為，包埋的蠟溫要略高于浸蠟的溫度為好。否則包埋冷凝后組織與包埋蠟塊分離，導(dǎo)致組織與石蠟融合不好而影響切片。我們常用的切片石蠟，由于其中含有雜質(zhì)，這樣的石蠟既浸蠟不好又易傷刀，因此，有條件的可用楓蠟。也可將普通石蠟高溫煮沸3次，這樣可以增加石蠟的密度，又可將石蠟提純，有利于組織塊的浸蠟、包埋和切片。

4 切片刀

制成一張優(yōu)質(zhì)切片，切片刀一定要鋒利，隨著科技的不斷發(fā)展，使用一次性刀片已經(jīng)逐步取代以前的切片刀，由于諸多因素，一些規(guī)模較小的醫(yī)院還沒有普及應(yīng)用。以前在工作中一直認(rèn)為磨刀時間越長越好。筆者認(rèn)為，手工磨刀和自動磨刀機(jī)磨刀時間應(yīng)在0.5～1.0 h，切片刀是否鋒利，常以拇指輕摸刀刃，如有細(xì)密針刺的感覺，說明刀口已經(jīng)鋒利或以顯微鏡鏡下觀察，鋒利刀口呈現(xiàn)一排極為細(xì)密而又均勻鋸齒狀即所謂的鋒芒。磨刀后在用木塊鑲皮條制成的皮革磚來褙刀，效果會更好。

5 切片

切片要薄，貼片、烤片有講究。常規(guī)切片的水溫，一般以低于蠟溫的10～12℃為宜。水溫低，細(xì)小的皺褶無法撐開，水溫高會引起組織細(xì)胞散開，如浸蠟中的二甲苯混入蠟塊展片會出現(xiàn)蠟溶解現(xiàn)象。因此，可先在95%乙醇中飄浮，再轉(zhuǎn)入溫水，以增加其表面張力，更好地保持切片的平整無痕，烤片的溫度也很重要，常規(guī)在溫箱中60℃，30 min，烤片時間過長，會引起組織收縮；時間過短，容易脫片。不同的組織對烤片的時間的要求又不完全相同，這就要求病理技術(shù)工作者在實踐中不斷地總結(jié)和研究。

6 染色

一組良好的染色試劑決定著染色效果，但是，固定、脫水、浸蠟等諸多因素也是非常關(guān)鍵的。切片脫蠟需干凈，未完全脫蠟的組織切片，染色后組織和細(xì)胞模糊不清，形成地圖形，脫蠟時間寧可長些，不應(yīng)過短。蘇木精染液要配好，蘇木精液配制的好壞，決定染色的優(yōu)劣。鹽酸乙醇的分化要適度，這是一個重要環(huán)節(jié)，若切片不分化或分化不足，組織著色過深使核漿的境界不清楚；若分化過度，胞核過淡不清晰。伊紅染色要適宜，伊紅作為對比染色，染色時不應(yīng)染的太紅。染色的標(biāo)準(zhǔn)是顏色鮮艷，核漿紅藍(lán)對比鮮明，也就是我們通常所說的紅是紅，藍(lán)是藍(lán)。一張優(yōu)質(zhì)的切片對染色步驟的時間掌握相當(dāng)重要，如果說染色的前幾步，如：固定是否完全、脫水是否徹底、切片刀是否鋒利，可以說并不一定完全能人為控制和掌握，而染色步驟的時間就需要自己在工作中積累經(jīng)驗。染色試劑也因季節(jié)溫度、使用時間的長短、染色劑的濃度而酌情增減染色時間，所以時間要靈活掌握，有機(jī)結(jié)合。

綜上所述，優(yōu)質(zhì)蠟塊、優(yōu)質(zhì)切片、優(yōu)質(zhì)染色三大步驟我們嚴(yán)格按操作規(guī)程去做，任何一個環(huán)節(jié)的操作不當(dāng)都會導(dǎo)致功敗垂成。制作一張優(yōu)質(zhì)的HE切片從接收到組織標(biāo)本開始，就是一個由諸多因素和環(huán)節(jié)組成的處理過程，無論是儀器本身所固有的局限，還是人為水平的差距都會影響切片的質(zhì)量。除了認(rèn)真、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度和一絲不茍的責(zé)任心，更要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，虛心向前輩學(xué)習(xí)，互相交流，結(jié)合自己的工作環(huán)境和實際工作條件，善于總結(jié)摸索，形成自己的一套好經(jīng)驗、好方法，避免人為因素導(dǎo)致制作不了優(yōu)質(zhì)切片。

（收稿日期：2008-09-16）