袁紹莉　張金煉

摘要：目的：建立以高效液相色譜法測(cè)定食消飲顆粒中橙皮苷含量的方法。方法：色譜柱：Hedra ODS-2(Size:250mm×4.6mm，Media:10nm 5um),流動(dòng)相：乙腈-水-36%的冰乙酸溶液（19：81：0.8），流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm 。結(jié)果:橙皮苷在2.0～25.0μg/ml之間，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9998），平均回收率達(dá)98.87%。結(jié)論：所建方法可行，專屬性、重復(fù)性好，可用于食消飲的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：食消飲顆粒；含量測(cè)定；橙皮苷；高效液相色譜法

食消飲顆粒處方來源于徐州地區(qū)民間驗(yàn)方。由山楂、麥芽、六神曲、陳皮、瓜蔞、萊菔子 、香櫞 、檳榔 、紫蘇葉、薄荷油等組成，屬治療傷食類非處方藥，具有消食導(dǎo)滯，除積消脹，調(diào)理腸胃。用于脘腹脹滿，積食不化，噯腐納差。質(zhì)量穩(wěn)定、療效確切，在病患中較有影響，深受歡迎。本品原標(biāo)準(zhǔn)[3]較單一、片面，為全面客觀地控制產(chǎn)品質(zhì)量，我們開展了食消飲顆粒的質(zhì)量控制研究。

原標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單，沒有含量測(cè)定項(xiàng)，為了建立系統(tǒng)全面的控制指標(biāo)，對(duì)本品中陳皮和香櫞共同的有效成分-橙皮苷的含量進(jìn)行測(cè)定，經(jīng)過方法學(xué)研究，建立橙皮苷HPLC含量測(cè)定方法。方法簡(jiǎn)便，可靠，準(zhǔn)確，可以用于食消飲的質(zhì)量控制。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀：Waters510,檢測(cè)器：Waters2487。

2F-I 型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；電子天平型號(hào)：FA2004N（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；超聲儀 型號(hào)：HB3120U（漢邦科技）；101-1A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 HJ0107型托盤天平（河南商城一中儀器廠）；橙皮苷對(duì)照品，購(gòu)買自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110721-200613；甲醇、乙腈為色譜純，36%冰乙酸及其它試劑為分析純，水為重蒸餾水；食消飲顆粒：由江蘇頤海藥業(yè)有限公司自制，批號(hào)為：080401、080402、080403、080404、080405、080406。

2方法與結(jié)果

2.1含量指標(biāo)的確定[６、７]

本品由山楂、陳皮、香櫞、麥芽等十味藥組成，其主要功效有消食導(dǎo)滯、除積消脹、調(diào)理腸胃。陳皮和香櫞在方中起到理氣健脾、燥濕化痰，舒肝寬中的功效， 是主要的藥效成分之一。橙皮苷類成分是陳皮和香櫞的共有指標(biāo)性成分。所以選擇橙皮苷作為指標(biāo)成分，同步測(cè)定陳皮、香櫞兩味藥材的含量。

2.2計(jì)算含量測(cè)定方法

橙皮苷含量測(cè)定采用高效液相色譜法，紫外檢測(cè)器檢測(cè)。試驗(yàn)分析表明：橙皮苷對(duì)照品峰面積與濃度呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)高于0.999，符合色譜法含量測(cè)定的限度要求。因此采用外標(biāo)法計(jì)算橙皮苷的含量。

2.3色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

參考相關(guān)文獻(xiàn)資料[8]和中國(guó)藥典2005版（一）部陳皮藥材項(xiàng)下橙皮苷含量測(cè)定方法：

2.3.1使用C18-ODS反向柱，填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠。

2.3.2檢測(cè)波長(zhǎng)

取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含 0.1mg的對(duì)照品溶液，在波長(zhǎng)200-400nm范圍內(nèi)掃描，橙皮苷在283nm波長(zhǎng)處有最大吸收。所以選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm。

2.3.3流動(dòng)相的選擇

（1）甲醇-水（40：60），樣品未完全分離，且拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重。

（2）甲醇-冰乙酸-水（37：0.5：63），樣品未完全分離且拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重。

（3）乙腈-水（16：84），對(duì)照拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重，但樣品已經(jīng)基本分離。

（4）乙腈-水-36%的冰乙酸溶液（19：81：0.8），峰分離符合規(guī)定，無拖尾，保留時(shí)間適中，理論板數(shù)達(dá)2500以上，符合定量要求。

以上結(jié)果表明，流動(dòng)相（4）可作為本試驗(yàn)流動(dòng)相。

2.3.4流速的確定

流速在0.8-1.2ml/min，橙皮苷與雜質(zhì)成分分離較好，峰形符合規(guī)定，柱效達(dá)到2500以上，符合定量要求。

2.4對(duì)照品溶液的制備

精密稱取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.010mg的溶液，即得。

2.5供試品溶液的制備

取本品約4g，精密稱定，置碘量瓶中，加甲醇50ml，精密稱定重量，冷浸1小時(shí)，超聲處理25分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減輕的重量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.6空白試驗(yàn)

分別精密吸取陰性對(duì)照溶液、樣品溶液、橙皮苷對(duì)照品溶液各20μl，注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定。在同樣的色譜參數(shù)條件下對(duì)比觀察，則在供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的保留時(shí)間處，有相同的色譜峰，而在陰性對(duì)照色譜中無相應(yīng)的色譜峰?？梢耘卸ū酒吩诖瞬ㄩL(zhǎng)處進(jìn)行含量測(cè)定，不受其它雜質(zhì)成分干擾。色譜圖見圖1（A、B、C）：

2.7標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍[2]

精密稱定橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml約含25μg的溶液，分別精密吸取0.4ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置于5ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，超聲溶解，分別注入色譜儀，按上述色譜條件分別測(cè)定，測(cè)得峰面積。結(jié)果見表1

對(duì)照品濃度與峰面積做線性回歸，得線性方程為：

Y=36580X-1042.5 r=0.9998

表明橙皮苷濃度在2.0～25.0μg/ml之間，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取本品（080401）適量，按供試品溶液制備方法制得供試品溶液，精密吸取供試品溶液20μl注入液相色譜儀。間隔一定時(shí)間測(cè)定一次，記錄色譜圖。結(jié)果表明,供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)是穩(wěn)定的.

2.9精密度試驗(yàn)

精密稱定橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml約含10μg的溶液，精密吸取20μl。依法進(jìn)樣測(cè)定，重復(fù)測(cè)定6次，測(cè)得峰面積。結(jié)果表明，在連續(xù)6次進(jìn)樣，測(cè)得峰面積RSD值符合不大于2%的規(guī)定，表明系統(tǒng)精密度良好，利用此系統(tǒng)測(cè)定，結(jié)果穩(wěn)定，可靠。

2.10重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同批號(hào)樣品（080401）共6份，分別按供試品溶液制備方法制備成供試液。按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，根據(jù)測(cè)得的峰面積計(jì)算每一份樣品的含量，并計(jì)算平均含量、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果表明：測(cè)得的6份供試品含量，其平均含量為0.115 mg/g，RSD值達(dá)到0.53%，重現(xiàn)較好，方法可靠。

2.11加樣回收率試驗(yàn)

取含量已知的同批樣品（080401）6份，精密稱定，分別精密加入橙皮苷對(duì)照品溶液（濃度為0.2796mg/ml）2ml，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。以下式計(jì)算橙皮苷含量：

本次試驗(yàn)的平均回收率達(dá)98.87%，RSD值達(dá)到1.19%，符合定量標(biāo)準(zhǔn)的要求，可用于橙皮苷定量。

2.12含量測(cè)定[4、5]

依上述建立的含量測(cè)定方法，測(cè)定了六個(gè)批次食消飲顆粒含量，結(jié)果見表3

根據(jù)六批樣品含量測(cè)定，最低含量2.03mg/袋，最高為2.41mg/袋，由于原藥材的質(zhì)量、制備工藝、生產(chǎn)條件和設(shè)備等因素相對(duì)固定，各批樣品含量相差不大，比較穩(wěn)定。所以確定本品含陳皮、香櫞以橙皮苷計(jì)為不低于2.00mg/袋。

4討論

4.1方法學(xué)考察結(jié)果表明：HPLC-UV法測(cè)定橙皮苷含量重現(xiàn)性好,RSD值為0.53%；加樣回收試驗(yàn)回收率達(dá)99.87%，RSD值為1.19%。方法準(zhǔn)確，穩(wěn)定可靠。可作為橙皮苷的定量方法。

4.2通過六個(gè)批次食消飲顆粒橙皮苷的含量測(cè)定，得到足夠數(shù)據(jù)表明各批樣品橙皮苷含量均處于2.00mg/袋以上，且各批樣品含量均比較接近這一數(shù)據(jù)，據(jù)此確定本品含陳皮和香櫞以橙皮苷計(jì)不少于2.00mg/袋。

4.3中藥制劑中采用超聲振蕩提取方法。由于中藥制劑組分復(fù)雜，分析時(shí)應(yīng)在分析柱前加預(yù)柱。流動(dòng)相含有酸性成分，故分析完畢后一般用醇水先洗，再用甲醇將色譜柱沖洗干凈。

4.4所測(cè)定的成分橙皮苷為二氫黃銅類化合物，具有一定的酸性，故在用C18柱進(jìn)行分離時(shí)，流動(dòng)相中加入適量的冰醋酸以改善峰的形狀，抑制拖尾，并控制流動(dòng)相的流速。通過不斷的實(shí)驗(yàn)確定了以上的實(shí)驗(yàn)，該色譜條件下能夠使橙皮苷的色譜峰達(dá)基線分離。

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