陳學(xué)年，郭玉娟

（肇慶學(xué)院 水產(chǎn)科學(xué)研究所，廣東 肇慶 526061）

0 引言

南美白對(duì)蝦是當(dāng)今世界公認(rèn)的優(yōu)良養(yǎng)殖品種之一，已成為我國重要的水產(chǎn)出口創(chuàng)匯品種.目前，我國內(nèi)陸南美白對(duì)蝦大多采用密閉式養(yǎng)殖.由于養(yǎng)殖池是一個(gè)高密度放養(yǎng)的生態(tài)系統(tǒng)，自身調(diào)節(jié)能力弱，穩(wěn)定性差，隨著養(yǎng)殖時(shí)間的延長，對(duì)蝦殘剩飼料、排泄物以及死亡動(dòng)植物殘?bào)w等有機(jī)物的積累，導(dǎo)致池水氨氮、亞硝酸鹽等有毒物質(zhì)含量常超過安全范圍，直接危害蝦的健康生長和存活[1－2].采用物理方法（如增氧、換水）或化學(xué)方法（如潑灑生石灰等）處理措施，雖然可在一定程度上緩解氨和亞硝酸鹽對(duì)蝦的毒害，但作用不夠持久，無法從根本上消除蝦池累積的有害物質(zhì).

芽胞桿菌是一種益生菌，在水產(chǎn)方面被廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖動(dòng)物的疾病預(yù)防和水質(zhì)調(diào)控，具有優(yōu)化池塘生態(tài)環(huán)境、預(yù)防疾病和促進(jìn)生長等作用，這方面的研究報(bào)道已有不少[3－4].在南美白對(duì)蝦大田養(yǎng)殖的基礎(chǔ)上，筆者研究探討了芽胞桿菌制劑在對(duì)蝦養(yǎng)殖中的實(shí)際應(yīng)用效果，為芽胞桿菌在集約化對(duì)蝦養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供了實(shí)際的參考依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)在廣東省肇慶高要市進(jìn)行.選取條件相似、面積為0.37～0.4 hm2的6個(gè)池塘作為試驗(yàn)基地，每2個(gè)相鄰池塘為一組，共設(shè)3個(gè)試驗(yàn)組，每組設(shè)1個(gè)試驗(yàn)池和1個(gè)對(duì)照池.池深2.0～2.5 m，均為沙壤土底質(zhì)，各養(yǎng)殖池每公頃配備1.5 kW增氧機(jī)5臺(tái).

蝦池放水前14 d清除池底過多淤泥，保留池底淤泥15～25 cm，蝦池灌水20～30 cm，按每公頃使用1 500 kg生石灰的量徹底清塘.蝦苗放養(yǎng)前7 d，加水至1 m，用人工海水鹽調(diào)配池水鹽度至0.1%～0.2%，同時(shí)按每次1.2 g/m3的劑量全池潑灑芽胞桿菌制劑.蝦苗放養(yǎng)后，每間隔7 d按0.8 g/m3的劑量投放芽胞桿菌制劑.試驗(yàn)期間不換水，只補(bǔ)充新水，保持水位在2～2.5 m，其他管理與對(duì)照池相同.試驗(yàn)期間，水溫為23～32℃.

1.2 試驗(yàn)制劑及養(yǎng)殖管理

試驗(yàn)所用芽胞桿菌為粉狀制劑，內(nèi)含芽孢桿菌菌體細(xì)胞1×109CFU/g；試驗(yàn)所用南美白對(duì)蝦苗的體長為0.6±0.1 cm，先將其在水泥池淡化處理7～10 d，其體長達(dá)0.8（±0.2）cm后再放入蝦塘養(yǎng)殖，密度為120萬尾/hm2.放養(yǎng)前隨機(jī)取蝦苗150尾，用套式PCR方法對(duì)白斑病毒（WSSV）進(jìn)行檢測（WSSV分子探針引物由中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供），檢測結(jié)果均為陰性.

試驗(yàn)期間投喂海鳥牌對(duì)蝦顆粒飼料，日投餌2次（投餌時(shí)間為9:00和17:00），每次投喂量約為蝦體重的4%～5%(以1 h吃完為宜).養(yǎng)殖100～120 d，對(duì)蝦規(guī)格達(dá)90～120尾/kg，干塘結(jié)束生產(chǎn).

1.3 水質(zhì)監(jiān)測

蝦苗放養(yǎng)后，每天觀測水溫、水色及水的透明度，并取水樣檢測DO值和pH值；間隔7 d測定NH3－N與NO2－N；間隔15 d測定CODCr和BOD5.其中：NH3－N的質(zhì)量濃度采用納氏試劑比色法測定；NO2－N的質(zhì)量濃度采用N－（1－奈基）－乙二胺光度法；DO采用碘量法測定；pH值采用便攜式pH值測定儀測定；CODCr采用重鉻酸鉀法測定；BOD5采用國標(biāo)GB7488—87稀釋與接種法測定.

2 結(jié)果與分析

2.1 芽胞桿菌對(duì)水質(zhì)因子的影響

2.1.1 NH3－N和NO2－N

在整個(gè)養(yǎng)殖周期，NH3－N與NO2－N共測定16次，測定結(jié)果如圖1所示.從圖1可見，在養(yǎng)殖前期(1～45 d),由于試驗(yàn)組在蝦放養(yǎng)前7 d開始使用芽胞桿菌制劑，芽胞桿菌在水體中已大量繁殖形成優(yōu)勢菌群，由此有效地控制了水體中的NH3－N和NO2－N；在養(yǎng)殖中、后期(45～105 d),隨著池中代謝物及殘剩飼料等有機(jī)物的積累，試驗(yàn)池中NH3－N和NO2－N的質(zhì)量濃度都有所升高,但與對(duì)照池比較，還一直維持在較低的水平趨勢；養(yǎng)殖生產(chǎn)結(jié)束時(shí)，試驗(yàn)池中NH3－N的平均質(zhì)量濃度為0.254 0 mg/L，NO2－N的平均質(zhì)量濃度為0.031 6 mg/L.相對(duì)于對(duì)照組，試驗(yàn)組NH3－N的去除率達(dá)86.85%，NO2－N的去除率達(dá)63.89%.

圖1 蝦池水體中NH3－N與NO2－N質(zhì)量濃度的變化情況

2.1.2 CODCr和BOD5

在整個(gè)養(yǎng)殖周期，CODCr與BOD5共測定8次，測定結(jié)果如圖2所示.從圖2可見，在養(yǎng)殖前期(1～45 d)，各試驗(yàn)池的CODCr和BOD5值都較對(duì)照池的低，但差異并不顯著，這主要是養(yǎng)殖前期池體有機(jī)代謝物累積尚少，池水能夠發(fā)揮其自凈能力的緣故.其后，隨著對(duì)蝦個(gè)體長大，蝦池中殘餌和生物排泄量往往超過池塘的自然凈化能力，CODCr和BOD5逐步增高并維持在較高的濃度水平.試驗(yàn)池中CODCr和BOD5緩和窄輻波動(dòng)，CODCr的平均質(zhì)量濃度為7.50 mg/L，BOD5的平均質(zhì)量濃度為9.89 mg/L，分別比對(duì)照池中的CODCr與BOD5低31.2%和23.2%，對(duì)照池中CODCr的質(zhì)量濃度在9.20～12.06 mg/L之間波動(dòng)，BOD5的質(zhì)量濃度在11.26～14.02 mg/L之間緩慢增高并維持較高的濃度水平.

圖2 蝦池水體中CODCr與BOD5值的變化情況

2.1.3 DO值和pH值

池水中的DO與氣溫、池中代謝廢物和殘余餌料增加等因素有關(guān)，隨它們的變化而發(fā)生變化.在養(yǎng)殖期內(nèi)，結(jié)合天氣變化，各養(yǎng)殖池每天都定時(shí)開放增氧機(jī)，因此DO值一直比較穩(wěn)定，其中對(duì)照池的DO值維持在5.10～5.26 mg/L，試驗(yàn)池的DO值維持在5.51～6.65 mg/L.

pH值的變化與天氣密切相關(guān)，低溫陰雨天時(shí)光照條件差，各養(yǎng)殖池水的pH值較低，其值處于6.70～7.92；陽光條件較好時(shí)，pH值升高，其值處于7.20～9.80.在所選監(jiān)測時(shí)間范圍內(nèi)，3個(gè)試驗(yàn)池pH值的變化幅度都比對(duì)照池小，均處于7.95～8.85之間；對(duì)照池pH值的變化幅度較大，其值范圍為7.20～9.80.該結(jié)果顯示芽胞桿菌有穩(wěn)定池水pH值的作用.

2.2 芽胞桿菌的防病效果

養(yǎng)殖期間，除定期潑灑生石灰水外，未使用任何抗生素類藥品或其他微生態(tài)制劑，各養(yǎng)殖池都未爆發(fā)白斑病等病毒性疾??；但在養(yǎng)殖后期，對(duì)照池1和對(duì)照池2有個(gè)別對(duì)蝦發(fā)生細(xì)菌性黑鰓，對(duì)照池3由于水質(zhì)惡化，對(duì)蝦黑鰓病嚴(yán)重，黑鰓感染率高達(dá)82%，雖未出現(xiàn)大量死亡，但影響了商品價(jià)值.試驗(yàn)池對(duì)蝦體色正常，水質(zhì)較好，無任何大規(guī)模蝦病發(fā)生，對(duì)蝦生長良好.

2.3 芽胞桿菌對(duì)產(chǎn)量及成活率的影響

將6個(gè)池塘分為3組，分別于2007年4月28日和5月12日放苗（見表1）.經(jīng)100～120 d飼養(yǎng),對(duì)蝦規(guī)格達(dá)90～122尾/kg，分3批起捕出售.結(jié)果如下:試驗(yàn)組平均單產(chǎn)為6 126 kg/hm2,平均規(guī)格為115尾/kg,養(yǎng)殖成活率達(dá)58.6%,飼料系數(shù)為1.3；對(duì)照組平均單產(chǎn)為5 440 kg/hm2,平均規(guī)格為105尾/kg,養(yǎng)殖成活率達(dá)47.8%,飼料系數(shù)為1.4.由此可見，試驗(yàn)組產(chǎn)量比對(duì)照組增加12.61%,成活率提高10.8%.

表1 南美白對(duì)蝦放養(yǎng)與收獲情況

3 結(jié)果分析

氨氮和亞硝酸鹽是對(duì)蝦高密度養(yǎng)殖生產(chǎn)中最難控制的有害物質(zhì)，對(duì)蝦處于高濃度的氨氮和亞硝酸鹽水體中，蛻皮次數(shù)增加，生長減緩，非特異免疫水平下降，可能感染各種疾病，最終造成對(duì)蝦的減產(chǎn)減收[5－7].芽孢桿菌是一種好氧生長的革蘭氏陽性菌，在養(yǎng)殖水體中芽孢桿菌通過分泌多種消化酶可促進(jìn)有機(jī)物的分解，減少淤泥和有毒物質(zhì)的產(chǎn)生，優(yōu)化養(yǎng)殖對(duì)象的生存環(huán)境；同時(shí)，芽孢桿菌在生長中與有害病原菌形成生存空間和營養(yǎng)的競爭性抑制，以實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的生物控制[8].芽孢桿菌兼有改良水質(zhì)和預(yù)防疾病的雙重功效，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中得到了很好的應(yīng)用.本次養(yǎng)殖試驗(yàn)表明，在對(duì)蝦放養(yǎng)前期將芽胞桿菌直接投放于水體，其孢子出芽繁殖可在水體中快速形成優(yōu)勢菌群并發(fā)揮對(duì)氨氮和亞硝酸鹽的去除作用.尤其在養(yǎng)殖中后期，通過定期反復(fù)地將芽胞桿菌投入水體，保證了水體中有足夠的菌體并形成持久穩(wěn)定的優(yōu)勢種群，能夠高效降解氨氮和亞硝酸鹽等有害物質(zhì)；同時(shí)，芽胞桿菌與病原菌形成競爭優(yōu)勢，維持了養(yǎng)殖池的水體質(zhì)量和良好的生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)了對(duì)蝦的健康生長，提高了對(duì)蝦的成活率.

CODCr和BOD5是對(duì)蝦健康生長的2個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)，CODCr或BOD5任何一個(gè)超量都可引發(fā)水質(zhì)惡化，加劇對(duì)蝦應(yīng)激反應(yīng)，從而導(dǎo)致對(duì)蝦死亡.本次養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)果表明，芽胞桿菌對(duì)南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖水體中的CODCr和BOD5都有特定的調(diào)控作用，這一結(jié)果與甘居利等[9]研究芽胞桿菌在斑節(jié)對(duì)蝦養(yǎng)殖期中對(duì)CODCr和BOD5的調(diào)控結(jié)果類似.這說明在對(duì)蝦規(guī)模生產(chǎn)中，通過定期向水體投放芽胞桿菌以維持水體中的菌群數(shù)量，能夠有效控制養(yǎng)殖中由于對(duì)蝦個(gè)體大、密度高、有機(jī)廢物多等因素引起的水質(zhì)惡化現(xiàn)象，從而提高對(duì)蝦的生存率.由于芽胞桿菌兼有改良水質(zhì)和預(yù)防疾病的雙重功效，故已在海水貝類、蝦類養(yǎng)殖中得到了很好的應(yīng)用[10－11]，但它在淡水水體大型養(yǎng)殖中的實(shí)際應(yīng)用還比較少.本次試驗(yàn)表明芽胞桿菌在低鹽度的淡水規(guī)模養(yǎng)殖中應(yīng)用效果良好，證明芽胞桿菌對(duì)鹽度變化具有很強(qiáng)的適應(yīng)性，這對(duì)于今后芽胞桿菌在淡水中的進(jìn)一步推廣應(yīng)用有重要指導(dǎo)意義.

[1] 聶月美,邵慶均.氨氮對(duì)蝦的免疫影響及其預(yù)防措施[J].中國飼料,2006,10:28-30.

[2] 吳中華.中國對(duì)蝦慢性亞硝酸鹽和氨中毒的組織病理學(xué)研究[J].華中師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,1999,33(1):119-122.

[3] 王彥波,查龍應(yīng),許梓榮.微生態(tài)制劑改善對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘底質(zhì)的效果[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2006,17(9):1 765-1 767.

[4] 李健,孫修濤,王群,等.微生態(tài)制劑在甲殼動(dòng)物養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].海洋水產(chǎn)研究,2001,22(2):27-31.

[5] 姜令緒,潘魯青,肖國強(qiáng).氨氮對(duì)凡納對(duì)蝦免疫指標(biāo)的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2004,11(6):537-541.

[6] CHEN J C,KOU Y Z.Effects of ammonia on growth and molting of Penaeus japonicus juveniles[J].Aquculture,1992,104: 249-260.

[7] 孫艦軍,丁美麗.氨氮對(duì)中國對(duì)蝦抵抗力的影響[J].海洋與湖沼,1999,30(3):267-272.

[8] 吳希陽，KEVIN H，CHRIS L，等.芽胞桿菌益生菌在水產(chǎn)業(yè)的應(yīng)用[J].漁業(yè)現(xiàn)代化,2007，34（4）：40-43.

[9] 甘居利,林欽,楊美蘭,等.斑節(jié)對(duì)蝦Penaeus monodon養(yǎng)成期間池水CODMn和BOD5的變化及其相互關(guān)系[J].海洋環(huán)境科學(xué),2005,24(4):9-11.

[10] 李永祺.海水養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境的保護(hù)與改善[M].濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社,1999:71.

[11] 熊偉,梁運(yùn)祥,戴經(jīng)元,等.枯草芽胞桿菌對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦飼養(yǎng)池凈化作用的初步研究[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,22(3): 247-250.