朱玉平， 張?zhí)鞂殻?萬旭英*， 馬璽里， 張 川， 張衛(wèi)東， 朱江波

(1.第二軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部衛(wèi)生毒理學(xué)教研室，上海200433;2.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院天然藥化教研室，上海200433)

黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根。黃芪性溫味甘，具有補氣升陽、固表止汗、托瘡生肌、利水消腫等療效。黃芪的有效成分復(fù)雜，主要有皂苷類、黃酮類似物、多糖等?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，黃芪不同提取物具有抗氧化、抗炎、擴血管、改善心腦缺血性疾病的作用，具有廣泛的臨床應(yīng)用［1］。黃芪甲苷(又稱黃芪皂苷IV，Astragaloside IV)為中藥黃芪中的主要有效成分之一，有降壓消炎，鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛，影響血清和肝臟蛋白質(zhì)合成，影響血漿cAMP及再生肝DNA合成，促進NK細(xì)胞(自然殺傷細(xì)胞)活性及抗肝損傷等作用，是黃芪的重要生理活性成分，因此黃芪甲苷常作為黃芪藥材的定性定量指標(biāo)［2］。為提高臨床用藥的安全性，了解黃芪甲苷是否可通過胎盤具有胚胎毒性、胎兒毒性和致畸性。本研究按《生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的設(shè)計要求，對其進行了致畸敏感期毒性試驗，為該藥的臨床前毒性評價資料。

1 材料與方法

1.1 受試物 黃芪甲苷(原料藥)由第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)教研室提供。批號011025，劑型:淡黃色液體。溶劑為丙二醇－乙醇－生理鹽水(1∶1∶8)。

1.2 實驗動物 本實驗采用為性成熟未交配過的成年健康SD大鼠，購自上海市計劃生育研究所西普爾一必凱實驗動物有限公司，動物許可證號:SCXK(滬)2003－0002，在本實驗室適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后使用。試驗時♂:♀鼠1∶1合籠，查見陰栓之日為妊娠第0天(GD 0)。

1.3 劑量選擇 本試驗設(shè)0.25，0.5和1.0 mg/kg體重3個劑量組(相當(dāng)于大鼠靜脈注射急性毒性試驗MTD(15.0 mg/mL)的1/60～1/15)。溶劑對照組 (0.85%生理鹽水1/4稀釋的1∶1丙二醇－乙醇)，每組至少20只孕鼠，于 GD6－GD15(查見陰栓之日為妊娠第0天，gestation day:GD)按10 mL/kg體重連續(xù)尾靜脈注射給藥。

1.4 試驗方法 大鼠標(biāo)準(zhǔn)致畸試驗［3－4］

1.5 觀察指標(biāo) 分娩前一天剖殺動物(GD20)，觀察母體孕期體重變化，黃體數(shù)、活胎率、死胎率、吸收胎率，胎兒身長、體重和胎盤重，胎兒外觀和內(nèi)臟畸形、以及骨骼的發(fā)育情況。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件，均數(shù)的比較用方差分析，率的比較用卡方檢驗。

2 結(jié)果

2.1 黃芪甲苷對母體的影響 觀察了孕期母體增重情況(GD20體重與GD0體重的差值)，發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷在1.0 mg/kg劑量時孕鼠增重(GD20與GD0體重的差值)與對照組比較明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(結(jié)果見表1)。這說明在此劑量下黃芪甲苷對SD大鼠有一定的母體毒性。

2.2 黃芪甲苷的胚胎毒性 觀察了活胎率、死胎率和吸收胎率的情況，發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷在1.0 mg/kg劑量時SD大鼠的活胎率和死胎率與對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，表現(xiàn)為活胎率降低和死胎率升高，表明在1.0 mg/kg劑量時對SD大鼠有一定胚胎毒性(結(jié)果見表1)。

2.3 黃芪甲苷的胎兒毒性 觀察了胎兒身長、體重和胎盤重，發(fā)現(xiàn)胎鼠身長在受試劑量下與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義;在0.25 mg/kg和0.5 mg/kg劑量組胎鼠體重和胎盤重略低于對照組，但無明顯劑量－反應(yīng)趨勢(結(jié)果見表2)，表明黃芪甲苷在受試劑量下對胎鼠無胎兒毒性。

表1 黃芪甲苷對孕鼠和胎鼠的影響

表2 黃芪甲苷對胎鼠生長發(fā)育的影響(±s)

表2 黃芪甲苷對胎鼠生長發(fā)育的影響(±s)

與對照組比較，*P＜0.05。

觀察指標(biāo) 溶劑對照組 黃芪甲苷/(mg/kg)0.25 0.5 1.0平均活胎體重/g 3.70±0.50 3.55±0.43* 3.50±0.49*3.64±0.62平均胎盤重/g 0.63±0.13 0.59±0.09* 0.59±0.09* 0.61±0.09平均活胎身長/cm 3.42±0.16 3.41±0.18 3.37±0.18 3.39±0.19

2.4 黃芪甲苷對胎兒骨骼發(fā)育的影響 觀察了胎兒的尾椎數(shù)、骶椎數(shù)/薦椎數(shù)、胸骨節(jié)數(shù)、掌骨數(shù)、近端指骨數(shù)、遠(yuǎn)端指骨數(shù)、跖骨數(shù)、近端趾骨數(shù)、遠(yuǎn)端趾骨數(shù)、胸骨骨化不全和胸骨缺失的情況。發(fā)現(xiàn)在受試劑量下，胎鼠和胎尾椎數(shù)、骶椎數(shù)、胸骨節(jié)數(shù)、掌骨數(shù)、近端指骨數(shù)、遠(yuǎn)端指骨數(shù)、跖骨數(shù)、近端趾骨數(shù)、遠(yuǎn)端趾骨數(shù)、胸骨骨化不全和胸骨缺失與對照組比較差異無顯著性，表明黃芪甲苷在各受試劑量下對胎鼠的發(fā)育無明顯影響。(結(jié)果見表3)

2.5 黃芪甲苷的致畸性 胎鼠在受試各劑量組均未觀察到明顯的骨骼、外觀和內(nèi)臟畸形。在2.0 mg/kg劑量下見一只胎鼠左右心室肥大，但畸形發(fā)生率與對照組比較差異無顯著性。表明黃芪甲苷對大鼠無致畸作用。

表3 黃芪甲苷對胎鼠骨骼發(fā)育的影響(±s)

表3 黃芪甲苷對胎鼠骨骼發(fā)育的影響(±s)

劑量 受檢胎 尾椎數(shù) 骶椎數(shù) 胸骨節(jié) 掌骨數(shù) 近端指骨 遠(yuǎn)端指骨 跖骨數(shù) 近端趾 遠(yuǎn)端趾/(mg/kg)鼠數(shù)/個/個 數(shù)/個/個 數(shù)/個 數(shù)/個/個 骨數(shù)/個 骨數(shù)/個0 112 2.83±0.49 4.69±0.48 4.91±0.89 7.07±1.05 0.21±0.89 2.11±0.20 8.03±0.26 0.12±0.92 7.79±1.03 0.25 130 2.44±0.57 5.05±0.36 4.88±0.95 6.76±0.99 0 6.29±3.61 7.97±0.35 0 6.55±3.70 0.50 119 2.53±0.56 5.04±0.36 4.94±0.85 6.73±0.97 0 6.31±3.56 7.93±0.35 0.02±0.18 6.81±3.53 1.00 110 2.61±0.66 5.09±0.42 5.03±0.97 6.58±1.22 0.18±0.84 6.87±3.51 7.94±0.44 0 7.14±3.50

3 討論

黃芪是傳統(tǒng)中藥，不但對正常和心功能受抑制的心臟有正性肌力作用，而且對收縮和舒張功能均有改善作用［5，6］。黃芪甲苷是從黃芪中提取的有效成分，有正性肌力作用。有研究表明該藥具有加強心肌收縮力，改善心室收縮和舒張功能，卻又不增加心肌耗氧量［7］?；谝陨咸匦?，黃芪甲苷很有可能是一種較好的強心和改善心功能的藥物。妊娠高血壓綜合征(PrH)是孕產(chǎn)婦常見并發(fā)癥，也是重要的死亡因素。黃芪甲苷作為一種傳統(tǒng)中藥，具有補氣升陽、固表止汗、托瘡生肌、利水消腫等療效，很可能在孕期用于妊娠高血壓的治療。但國內(nèi)外關(guān)于黃芪甲苷致畸性的報道卻未見，這給該藥臨床用藥安全問題帶來一定的風(fēng)險。

著床后的胚胎期是器官發(fā)生和形成期，此期細(xì)胞分裂、分化旺盛，發(fā)育基因和調(diào)控基因表達頻繁，因而對外源性因素最敏感，易于影響發(fā)育調(diào)控基因及細(xì)胞功能，因此此期對致畸作用敏感，長期以來被稱為致畸敏感期、危險期、關(guān)鍵期等［8］。標(biāo)準(zhǔn)致畸試驗是采用在動物的器官敏感期進行染毒，該試驗不但能檢測受試物的致畸性，還可以觀察受試物致胚胎、胎兒死亡和生長遲緩等資料。是目前檢測外源性化學(xué)物致畸性最經(jīng)典也是最可靠的的方法［9］。

本研究采用標(biāo)準(zhǔn)致畸試驗，選用SD大鼠檢測了黃芪甲苷的致畸性。研究結(jié)果表明，黃芪甲苷在1.0 mg/kg以上劑量時對SD大鼠具有一定的母體毒性。在胚胎毒性方面，SD大鼠在1.0 mg/kg以上劑量時出現(xiàn)活胎率降低死胎率增高現(xiàn)象。對受試動物的胎兒發(fā)育無明顯影響，胎兒體重、身長、胎盤重、骨骼發(fā)育情況與對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異。在致畸性方面對SD大鼠無明顯的致畸作用。以上結(jié)果表明黃芪甲苷主要影響胚胎的早期發(fā)育。黃芪甲苷具有一定的胚胎毒性，孕期婦女應(yīng)忌用此藥。

［1］段亞麗，謝梅冬.黃芪化學(xué)成分及其有效成分黃芪甲苷含量測定的研究現(xiàn)狀［J］.中國獸藥雜志，2005，39(3):35－38.

［2］屠鵬飛，郭洪祝，果德安.中藥與天然藥物活性成分研究及新藥的發(fā)現(xiàn)［J］.北京大學(xué)學(xué)報，2002，34(5):513－518.

［3］中華人民共和國藥政局.新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編(藥學(xué)，藥理，毒理學(xué))［S］.1993.

［4］印木泉，陳耀富，蔡東聯(lián)，等.胎鼠骨骼的快速染色法［J］.中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志，1985，3(1):130－132.

［5］周吉燕，樊 懿，孔建龍.黃芪中不同提取成分對在體大鼠心肌缺血一再灌注損傷的心功能影響［J］.中國中藥雜志，2000，25(5):300－302.

［6］陳治奎，胡申江.黃芪對心血管疾病作用的實驗研究進展［J］.心血管病學(xué)進展，2003，24(2):113－116.

［7］鄭培黎，戴建亞，陳 紅，等.黃芪甲苷對急性心衰犬心臟舒縮功能的影響［J］.中國藥理學(xué)通報，2005，21(12):1534－1535.

［8］Hjelde T，Mehl A，Schanke TM，F(xiàn)onnum F.Teratogenic effects of trichlorfon(Metrifonate)on the guinea－pig brain.Determination of the effective dose and the sensitive period［J］.Neurochem Int，1998，32(5－6):469－477.

［9］Osano O，Oladimeji AA，Kraak MH，Admiraal W.Teratogenic effects of amitraz，2，4－dimethylaniline，and paraquat on developing frog(Xenopus)embryos［J］.Arch Environ Contam Toxicol，2002，43(1):42－49.