蔡開貴 胡艷 湯素琴 黃玉梅 劉鶴梁 朱錦洲 江全勝

(廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院耳鼻咽喉科 廣東廣州 510800)

鼻咽癌起病隱匿、早期癥狀不典型,且易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,能否早期診斷是決定其預(yù)后的關(guān)鍵因素,目前有關(guān)其發(fā)生和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制尚未完全闡明。MCM2在DNA復(fù)制過程及細(xì)胞周期中起著重要作用。許多研究顯示微染色體維持蛋白(minichromosome maintenance protein)表達(dá)陽性是細(xì)胞具有增殖能力的標(biāo)志,細(xì)胞已退出增殖周期則不表達(dá),意味著其已分化成熟或進(jìn)入了G0期,這對(duì)腫瘤的早期診斷和預(yù)測(cè)提供了一個(gè)新的極好的標(biāo)記物。我們采用免疫組織化學(xué)(S-P)法檢測(cè)75例鼻咽部不同病變組織標(biāo)本的MCM2蛋白表達(dá)情況,研究細(xì)胞增值與鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系,探討其在鼻咽癌早期診斷中的價(jià)值。

l 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院病理科2002～2007年活檢石蠟標(biāo)本共75例。經(jīng)病理證實(shí)為:鼻咽癌60例(均為鱗狀細(xì)胞癌)、鼻咽正常黏膜15例。60例鼻咽癌標(biāo)本均為未經(jīng)放化療的活檢標(biāo)本。男47例、女13例;年齡29～71歲,平均48.6歲。根據(jù)UICC1997年TNM分型分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期:Ⅰ期12例、Ⅱ期11例、Ⅲ期25例、Ⅳ期12例,伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移48例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12例。

1.2 試劑

濃縮型鼠抗人MCM2單克隆抗體購自美國SantaCruz公司,工作濃度為1∶150;鼠免疫組化二步法試劑盒(K IT29801)、DAB顯色試劑盒均購自福州邁新公司。

1.3 方法

石蠟塊4μm厚連續(xù)切片,按鼠免疫組化二步法試劑盒說明書進(jìn)行免疫組化操作,抗原修復(fù)采用高壓加熱法,用已知鼻咽癌陽性切片作陽性對(duì)照,陰性對(duì)照采用PBS液代替一抗,均做HE染色對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定

MCM2陽性表達(dá)是指細(xì)胞核染成棕褐色或棕黃色。并計(jì)算MCM2標(biāo)記指數(shù):選5個(gè)背景最清晰、陽性細(xì)胞最密集區(qū)域(低倍鏡下),計(jì)算每個(gè)區(qū)域100個(gè)細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)(高倍鏡下),取5個(gè)區(qū)域陽性細(xì)胞數(shù)平均值為標(biāo)記指數(shù),進(jìn)行評(píng)級(jí),0～5%為陰性、6%～25%為I級(jí)、26%～50%為Ⅱ級(jí)、51%～75%為Ⅲ級(jí)、75%～100%為Ⅳ級(jí)。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包作χ2檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α＝0.05。

2 結(jié)果

2.1 MCM2在不同鼻咽部組織中的表達(dá)特征

MCM2在正常鼻咽部黏膜中基本不表達(dá),或僅在黏膜基底層有增殖能力的少數(shù)細(xì)胞中表達(dá);在鼻咽癌中其表達(dá)分布多呈彌散性分布,失去規(guī)律。MCM2蛋白在正常鼻咽部黏膜、鼻咽癌組織中的陽性率分別為13.3%(2/15例)、81.7%(49/60例),鼻咽癌中MCM2的表達(dá)明顯高于正常鼻咽部組織(P<0.01)。

2.2 MCM2表達(dá)與鼻咽癌主要臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

MCM2在高、中、低分化鼻咽癌的表達(dá)率分別為:58.3%、80.0%、95.7%,在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期的表達(dá)率分別為:65.2%、91.9%,在有、無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)率分別為:85.4%、66.7%,其差異均有顯著性(P<0.05)。

3 討論

許多研究證實(shí)MCM2是真核細(xì)胞DNA復(fù)制起始的許可因子,是啟動(dòng)DNA復(fù)制的重要因子,DNA復(fù)制完成即從染色體脫離,這對(duì)DNA復(fù)制起始的調(diào)控十分重要,保證了染色體在每一個(gè)細(xì)胞周期只復(fù)制1次。而且只有在處于增殖活動(dòng)周期的細(xì)胞中MCM蛋白才表達(dá),這提示其可作為腫瘤細(xì)胞的特殊標(biāo)記物。我們應(yīng)用MCM2單克隆抗體檢測(cè)不同鼻咽部組織標(biāo)本,統(tǒng)計(jì)分析顯示,鼻咽癌中MCM2的表達(dá)明顯高于正常鼻咽部組織(P<0.01),低分化的鼻咽癌其表達(dá)增強(qiáng)、增多,標(biāo)記指數(shù)也高于高分化者,有顯著性差異(P<0.05),這提示低分化的鼻咽癌中MCM2量較多,DNA復(fù)制起點(diǎn)也多,細(xì)胞著色也就愈深,故細(xì)胞核中MCM2陽性表達(dá)強(qiáng)度可反映出細(xì)胞DNA復(fù)制的活躍程度[1]。這符合腫瘤增殖與分化的一般規(guī)律。根據(jù)其標(biāo)記指數(shù)及表達(dá)特點(diǎn),能較好地區(qū)分不同分化程度的腫瘤組織和正常組織,表明MCM2可作為鼻咽癌可靠的腫瘤標(biāo)記物,這對(duì)鼻咽癌的早期篩選有很大幫助。能更好指導(dǎo)臨床上鼻咽癌的早期診斷、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)等。

同時(shí),本結(jié)果還提示鼻咽癌各臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間MCM2表達(dá)強(qiáng)度亦有明顯差異性(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ期的鼻咽癌的標(biāo)記指數(shù)明顯高于Ⅰ、Ⅱ期,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)記指數(shù)也明顯增高,可見MCM2與鼻咽癌病程密切相關(guān)。隨腫瘤分化的降低與臨床分期的進(jìn)展,MCM2表達(dá)率升高且標(biāo)記指數(shù)也逐步升高。這表明MCM2標(biāo)記指數(shù)能較好地反映鼻咽癌的臨床病理特征和細(xì)胞增殖分化水平,可作為判斷鼻咽癌惡性程度的指標(biāo),并能使鼻咽癌組織學(xué)分期更客觀。

綜上所述,鼻咽癌的發(fā)病機(jī)制涉及MCM2的異常,其能較好地反映癌細(xì)胞的增殖規(guī)律,可鑒別非癌細(xì)胞和癌細(xì)胞,與鼻咽癌的發(fā)生及臨床進(jìn)展密切相關(guān)。

[1]Maiorano D,Lutzmann M,Mechali M.MCM proteins and DNA replication.Current Opinion in Cell[J].Biology,2006,18(2):130～136.