羅藝萍，趙興堂，趙靜峰，羊曉東#，李良

（1.云南大學(xué)教育部自然資源藥物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明市 650091；2.思茅師范高等專(zhuān)科學(xué)校生命科學(xué)系，普洱市 665000）

細(xì)穗兔兒風(fēng)（Ainsliaea spicata）系菊科兔兒風(fēng)屬植物，又名腎炎草、卵葉寬穗兔兒風(fēng)、馬蹄草等，主要分布于云南、廣西、貴州等地，印度和不丹也有分布[1]。該植物在滇南地區(qū)民間以全草入藥，具有清熱、利濕、止咳和解毒的功效，主治急、慢性腎炎，腎孟腎炎，膀胱炎，支氣管炎及痢疾和刀槍傷[2]。報(bào)道兔兒風(fēng)屬植物中的化學(xué)成分主要有倍半萜內(nèi)酯、倍半萜苷、三萜、甾體及黃酮類(lèi)化合物。細(xì)穗兔兒風(fēng)的化學(xué)成分的研究未見(jiàn)報(bào)道。筆者從細(xì)穗兔兒風(fēng)的干燥全草的乙醇提取物中分離得到了10個(gè)化合物，分別為木栓酮（1）、表木栓醇（2）、蒲公英賽醇（3）、蒲公英賽醇乙酯（4）、還陽(yáng)參屬苷E（5）、4，4′-二丁氧基聯(lián)二苯（6）、棕櫚酸（7）、正二十烷醇（8）、β-谷甾醇（9）、胡蘿卜苷（10）。以上化合物均為首次從該植物中分離得到，其中3、4、5、6 為首次從該屬中分離得到。

1 材料

1.1 儀器

XT-4型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（北京泰克儀器有限公司）；1100型LC/MSD TOF聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司）；AM-300型超導(dǎo)核磁共振（NMR）儀（瑞士Bruker公司）；GF254薄層色譜板（青島海洋化工廠）。

1.2 試藥

β-谷甾醇對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110851-200504）；胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品（順勃生物工程技術(shù)有限公司，純度：98%，批號(hào)：09081-199805）；200～300目和300～400目柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；樣品于2008年9月采自云南省普洱市，由思茅師范高等專(zhuān)科學(xué)校生命科學(xué)系李秀副教授鑒定為細(xì)穗兔兒風(fēng)A.spicata，標(biāo)本存放在云南大學(xué)教育部自然資源藥物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取分離

細(xì)穗兔兒風(fēng)干燥的全草5.0 kg，用95%乙醇室溫冷浸5次。合并提取液，減壓蒸餾得粗提物。將其懸浮于水中，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚部分94 g、乙酸乙酯部分30 g、正丁醇部分48 g。取石油醚部分進(jìn)行硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯溶劑體系（1∶0～0∶1）梯度洗脫，得到4個(gè)組分。組分3用石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮等溶劑體系進(jìn)行洗脫，最終分離得到到化合物1（100 mg）、5（400 mg）、6（8 mg）、9（100 mg）、10（30 mg）。乙酸乙酯部分經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇溶劑體系梯度洗脫，得到5個(gè)組分。組分3經(jīng)反復(fù)的柱層析，用石油醚-氯仿、石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮等溶劑體系進(jìn)行洗脫，最終分離得到化合物2（200 mg）、3（150 mg）、4（70 mg）、7（20 mg）、8（100 mg）。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1 化合物1：無(wú)色針狀結(jié)晶（氯仿），C30H50O；mp 267～268℃；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：0.88（3H，d，J＝6.0Hz，H-23），0.73（3H，s，H-24），0.87（3H，s，H-25），1.01（3H，s，H-26），1.05（3H，s，H-27），1.18（3H，s，H-28），0.95（3H，s，H-29），1.00（3H，s，H-30）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：21.8（C-1），41.7（C-2），212.6（C-3），57.8（C-4），41.7（C-5），41.1（C-6），18.2（C-7），52.7（C-8），37.8（C-9），59.4（C-10），35.6（C-11），30.5（C-12），39.7（C-13），38.3（C-14），32.4（C-15），37.0（C-16），30.0（C-17），42.4（C-18），35.2（C-19），27.7（C-20），32.3（C-21），39.2（C-22），6.3（C-23），14.2（C-24），17.5（C-25），20.2（C-26），18.2（C-27），31.3（C-28），34.9（C-29），31.6（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1為木栓酮（Friedelin）。

2.2.2 化合物2：無(wú)色塊狀結(jié)晶（乙酸乙酯-石油醚），C30H52O；mp 283～284 ℃；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：3.73（1H，br s，H-3），0.93（3H，d，J＝6.0 Hz，H-23），0.95（3H，s，H-24），0.86（3H，s，H-25），0.99（3H，s，H-26），1.01（3H，s，H-27），1.17（3H，s，H-28），1.01（3H，s，H-29），0.96（3H，s，H-30）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：15.3（C-1），32.4（C-2），72.3（C-3），48.7（C-4），37.4（C-5），41.3（C-6），17.7（C-7），52.7（C-8），37.9（C-9），60.9（C-10），35.1（C-11），30.2（C-12），37.9（C-13），38.8（C-14），32.4（C-15），36.6（C-16），30.2（C-17），42.4（C-18），35.1（C-19），27.8（C-20），35.6（C-21），39.2（C-22），11.1（C-23），15.9（C-24），17.8（C-25），18.2（C-26），19.6（C-27），31.6（C-28），31.3（C-29），34.5（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物2為表木栓醇（Epifriedelanol）。

2.2.3 化合物3：無(wú)色塊狀晶體（氯仿），C30H50O；mp 222～223 ℃；飛行時(shí)間質(zhì)譜（TOF-MS）m/z：425[M-1]+；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：5.52（1H，dd，J＝3.0，8.0 Hz，H-15），3.18（1H，dd，J＝5.0，15.2 Hz，H-3），2.03（1H，br d，J＝12.6 Hz，H-16b），1.91（1H，br d，J＝12.2Hz，H-16a），1.07（3H，s，H-26），0.96（3H，s，H-23），0.93（3H，s，H-28），0.91（3H，s，H-25），0.89（3H，s，H-27），0.89（3H，s，H-30），0.83（3H，s，H-28），0.80（3H，s，H-24）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：37.5（C-1），27.5（C-2），78.6（C-3），38.3（C-4），55.1（C-5），18.3（C-6），40.9（C-7），38.5（C-8），48.3（C-9），37.1（C-10），17.3（C-11），33.3（C-12），37.5（C-13），157.6（C-14），116.4（C-15），37.2（C-16），35.4（C-17），48.8（C-18），36.3（C-19），28.9（C-20），33.2（C-21），35.3（C-22），28.3（C-23），15.2（C-24），15.3（C-25），25.4（C-26），20.8（C-27），29.5（C-28），32.9（C-29），29.4（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物3為蒲公英賽醇（Taraxerol）。

2.2.4 化合物4：白色片狀晶體（丙酮），C32H52O2；mp 268～270℃；TOF-MS m/z：467[M-1]+；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：5.53（1H，dd，J＝3.7，8.0 Hz，H-15），2.04（3H，s，Ac-CH3），2.02（1H，dt，J＝3.0，13.5 Hz，H-19），1.90（1H，dd，J＝4.8，12.5 Hz，H-18），1.09（3H，s，H-26），0.95（3H，s，H-25），0.95（3H，s，H-29），0.91（3H，s，H-24），0.91（3H，s，H-27），0.88（3H，s，H-30），0.86（3H，s，H-23），0.82（3H，s，H-28）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：37.1（C-1），23.0（C-2），80.5（C-3），37.3（C-4），55.2（C-5），18.3（C-6），33.2（C-7），38.6（C-8），48.8（C-9），37.3（C-10），17.1（C-11），36.9（C-12），37.6（C-13），157.5（C-14），116.5（C-15），33.3（C-16），36.2（C-17），48.4（C-18），40.9（C-19），29.2（C-20），35.3（C-21），37.3（C-22），28.3（C-23），16.5（C-24），15.4（C-25），25.5（C-26），29.5（C-27），29.4（C-28），32.9（C-29），20.8（C-30），170.4（C-31），20.8（C-32）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6，7]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為蒲公英賽醇乙酯（Taraxeryl acetate）。

2.2.5 化合物5：棕色針狀結(jié)晶（甲醇），C21H28O9；TOF-MS m/z：243[M-1]+；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：6.28（2H，m，H-13a，13b），5.66（1H，br s，H-15a），5.42（1H，br s，H-15b），5.08（1H，s，H-14a），4.93（1H，s，H-14b），4.63（1H，br t，J＝5.8 Hz，H-3），4.46（1H，d，J＝6.8 Hz，H-1 ′），4.33（1H，d，J＝3.0 Hz，H-6），3.89（1H，m，H-8），3.87（1H，d，H-6 a′），3.67（1H，dd，J＝12.0，3.4 Hz，H-6b′），3.22-3.41（4H，m，H-2′，3′，4′，5′），3.05（1H，br q，J＝8.4 Hz，H-1），2.60-2.78（3H，m，H-5，7，9a），2.36（H，m，H-2a），2.25（1H，dd，J＝15.0，2.5 Hz，H-9b），1.95（1H，m，H-2b）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：46.4（C-1），38.8（C-2），81.5（C-3），150.9（C-4），52.1（C-5），79.8（C-6），50.6（C-7），71.7（C-8），43.0（C-9），145.4（C-10），137.7（C-11），172.3（C-12），122.6（C-13），117.1（C-14），113.4（C-15），103.4（C-1′），75.3（C-2′），78.1（C-3′），67.0（C-4′），77.9（C-5′），62.9（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8，9]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為還陽(yáng)參屬苷E（Crepiside E）。

2.2.6 化合物6：黃色晶體（氯仿），C20H26O2；mp 147～148℃；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：0.90（6H，t，J＝7.5 Hz，2 ×OCH2CH2CH2CH3），4.05（4H，t，J＝6.5 Hz，2 × OCH2CH2CH2CH3），1.72（4H，m，2×OCH2CH2CH2CH3），1.45（4H，m，2×OCH2CH2CH2CH3），7.23（4H，q，aromatic），7.70（4H，q，aromatic）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10，11]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物6為4，4′-二丁氧基聯(lián)二苯（4，4′-dibutanoxy biphenyl）。

2.2.7 化合物7：白色固體（氯仿-甲醇），C16H32O2；mp 49～50℃；用堿化的溴甲酚綠顯色反應(yīng)陽(yáng)性，顯土黃色，顯示化合物為有機(jī)酸。1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：2.33（2H，t，H-2），1.63（2H，t，H-3），1.26～1.30（24H，m，H-4～15），0.88（3H，t，H-16）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：175.8（C-1），34.1（C-2），31.9（C-3），29.1～30.1（C-4～13），24.7（C-14），22.7（C-15），14.1（C-16）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物7為棕櫚酸。

2.2.8 化合物8：白色粉末，C20H42O；mp 64～66℃；溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：2.01（1H，s，OH），3.51（2H，t，H-20），1.43（2H，t，H-19），1.25（32H，s，H-3～18），1.35（2H，m，H-2），0.89（3H，t，H-1）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：14.2（C-2），22.9（C-3），32.0（C-3），29.6（C-4），29.7（C-5～17），25.6（C-18），32.2（C-19），62.8（C-20）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物8為正二十烷醇。

2.2.9 化合物9：無(wú)色針狀晶體（乙酸乙酯），與β-谷甾醇對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照，混合熔點(diǎn)不下降；在多種溶劑系統(tǒng)中進(jìn)行薄層層析檢測(cè)，Rf值一致，且顯色相同，故確定為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

2.2.10 化合物10：白色粉末，與胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照，混合熔點(diǎn)不下降；在多種溶劑系統(tǒng)中進(jìn)行薄層層析檢測(cè)，Rf值一致，且顯色相同，故確定為胡蘿卜苷（Daucosterol）。

3 討論

兔兒風(fēng)屬植物作為一種常用的民間草藥，在我國(guó)南方許多地區(qū)均有藥用?，F(xiàn)代藥理及臨床應(yīng)用表明，本屬植物有很好的抗炎、抗病毒作用。從已有的化學(xué)成分方面的研究看出，兔兒風(fēng)屬植物多含有三萜和倍半萜內(nèi)酯類(lèi)成分，而倍半萜內(nèi)酯有很好的抗腫瘤活性，因此針對(duì)本屬植物在這一方面的研究有待進(jìn)一步深入。

本研究采用硅膠柱色譜及重結(jié)晶的方法對(duì)細(xì)穗兔兒風(fēng)干燥全草的乙醇提取物進(jìn)行分離純化，通過(guò)理化常數(shù)測(cè)定以及波譜分析分離鑒定了10個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，分別為4個(gè)三萜、1個(gè)倍半萜內(nèi)酯、2個(gè)甾體、2個(gè)脂肪烷/酸和1個(gè)聯(lián)苯類(lèi)化合物?；衔?～10均為首次從兔兒風(fēng)屬植物中分離得到，其中化合物3、4、5、6為首次從該屬中分離得到。本研究可對(duì)開(kāi)發(fā)利用兔兒風(fēng)屬植物資源在創(chuàng)制中成藥新品種及綜合利用等方面提供科學(xué)依據(jù)。

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