李曉紅，王菲菲，遲 濤

（1.黑龍江農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)職業(yè)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157041；2.黑龍江省乳品工業(yè)技術(shù)開(kāi)發(fā)中心，哈爾濱 150086）

乳中抗生素殘留及其檢測(cè)方法

李曉紅1，王菲菲1，遲 濤2

（1.黑龍江農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)職業(yè)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157041；2.黑龍江省乳品工業(yè)技術(shù)開(kāi)發(fā)中心，哈爾濱 150086）

介紹了乳中抗生素殘留及其一系列檢測(cè)方法，包括微生物檢測(cè)法、理化檢測(cè)法和免疫檢測(cè)法。其中色譜法、聯(lián)用技術(shù)和免疫法在殘留分析方面的研究與應(yīng)用取得了長(zhǎng)足進(jìn)展。

抗生素；殘留；檢測(cè)方法

0 引 言

抗生素在乳中的殘留會(huì)給人體帶來(lái)許多不良后果，會(huì)使正常人被動(dòng)接受、積累抗生素，造成人體生理紊亂，若一次攝入殘留物的量過(guò)大，則會(huì)出現(xiàn)急性毒性反應(yīng)[1]。

乳制品現(xiàn)今已是人們的重要營(yíng)養(yǎng)食品，人均占有量已達(dá)到21.7 kg[2]。從全國(guó)不同城市近幾年的調(diào)查情況來(lái)看，不管是市售生鮮奶還是巴氏消毒奶，抗生素殘留情況都較為嚴(yán)重[3]。含有抗生素殘留的乳及其乳制品不僅會(huì)影響乳的品質(zhì)，對(duì)乳制品的發(fā)酵和后期風(fēng)味的形成產(chǎn)生不利影響，還會(huì)損害飲用者的身體健康，因此牛奶中抗生素殘留問(wèn)題日趨受到各國(guó)政府和食品安全機(jī)構(gòu)的廣泛重視[4，5]。乳中常見(jiàn)的抗生素主要有β-內(nèi)酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、氯霉素類(lèi)、磺胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)等[6-8]。

1 乳中抗生素殘留途徑及危害

1.1 乳中抗生素殘留途徑

抗生素殘留與奶牛這種大型經(jīng)濟(jì)家畜的病例生理特點(diǎn)、產(chǎn)品特性有關(guān)。我國(guó)的奶牛飼養(yǎng)主要以散戶、自營(yíng)牛場(chǎng)模式為主，農(nóng)戶飼養(yǎng)奶牛管理意識(shí)低下以及經(jīng)濟(jì)條件所限，造成奶源地奶源質(zhì)量低、污染物殘留量高的情況，同時(shí)牛場(chǎng)飼養(yǎng)的行為規(guī)范做得不夠，獸藥管理不嚴(yán)格，使得奶牛乳房炎和其它感染性疾病都顯著高于發(fā)達(dá)國(guó)家，因此我國(guó)的乳及乳制品的抗生素殘留問(wèn)題就格外嚴(yán)重。

乳中抗生素的來(lái)源主要包括以下幾個(gè)方面[9-11]：（1）治療藥物 抗生素是治療牛乳房炎的主要手段，資料表明，用抗生素治療后的奶牛，其擠出的牛奶5天內(nèi)都有抗生素殘留。并且獸醫(yī)臨床用藥時(shí)，還常將不同種類(lèi)的抗生素聯(lián)合使用，更容易造成抗生素類(lèi)藥物在動(dòng)物體內(nèi)殘留。（2）飼料添加藥物 飼料添加劑或動(dòng)物保健品在使用時(shí)，經(jīng)常以長(zhǎng)期小劑量的方式添加抗生素，如土霉素添加劑、金霉素添加劑等。此類(lèi)抗生素在動(dòng)物體內(nèi)需要一段時(shí)間才能完全排除體外，極易在動(dòng)物體內(nèi)蓄積，因此造成抗生素殘留。（3）人為添加 在高溫季節(jié)，一些不法商販為防止牛奶酸敗，人為向牛奶中摻雜各種抗生素。

1.2 乳中抗生素殘留的危害

牛奶是老少皆宜的營(yíng)養(yǎng)品，對(duì)于長(zhǎng)期飲用含有抗生素殘留的牛奶，無(wú)疑是等于長(zhǎng)期小劑量的攝入抗生素，一些抗菌藥物如青霉素類(lèi)、磺胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)及某些氨基糖苷類(lèi)抗生素的殘留能使部分人群發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)[12]。對(duì)于正常飲用者，抗生素作用于病原菌的同時(shí)難免會(huì)影響到人體內(nèi)有益菌的生長(zhǎng)。長(zhǎng)期、大量使用抗生素會(huì)造成人體內(nèi)菌群失調(diào)，微生態(tài)平衡被破壞，使?jié)摲趧?dòng)物體內(nèi)的有害菌大量繁殖，引起內(nèi)源性感染。另外，抗生素也會(huì)殺滅動(dòng)物體內(nèi)某些敏感菌，使人體內(nèi)形成了大量的空位點(diǎn)，為外界耐藥菌乘虛而入提供機(jī)會(huì)，從而造成外源性感染[13-15]。此外，長(zhǎng)期飲用者在體內(nèi)的某些條件性致病菌易產(chǎn)生耐藥性，一旦患者再使用同種抗生素治療將很難奏效[16]。由于長(zhǎng)期使用抗感染藥物還會(huì)引發(fā)二重感染即重復(fù)感染或菌群交替癥，是指在一種感染末愈又發(fā)生另一種微生物感染。抗生素殘留液會(huì)對(duì)臨床用藥帶來(lái)影響，獸藥殘留給機(jī)體帶來(lái)毒性，并使細(xì)菌耐藥性增加，影響臨床用藥，甚至引起病人的生命危險(xiǎn)。另外，發(fā)酵乳制品（酸奶和干酪）的生產(chǎn)依賴(lài)于乳酸菌的生長(zhǎng)，而乳酸菌的生長(zhǎng)受抗菌素的強(qiáng)烈抑制，常導(dǎo)致發(fā)酵失敗。因此市場(chǎng)不允許出售抗生素殘留過(guò)量的牛奶，這樣也造成牛奶生產(chǎn)者的經(jīng)濟(jì)損失。

2 抗生素殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展

隨著抗生素殘留問(wèn)題的日益嚴(yán)重，抗生素殘留檢測(cè)技術(shù)也迅速發(fā)展，以尋求簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、敏感性高的檢測(cè)方法，滿足日趨嚴(yán)格的殘留限量為要求，保障人們飲用牛奶的衛(wèi)生和安全。抗生素檢測(cè)技術(shù)種類(lèi)較多，以技術(shù)原理可以歸類(lèi)為：微生物檢測(cè)方法，理化測(cè)定法，免疫學(xué)檢測(cè)方法。

2.1 微生物檢測(cè)方法

微生物檢測(cè)法，又稱(chēng)微生物抑制試驗(yàn)（MIT），據(jù)抗生素對(duì)特異微生物的生理機(jī)能、繁殖代謝的抑制作用來(lái)定性或定量確定樣品中抗微生物藥物殘留量，是檢測(cè)乳中抗生素較經(jīng)典且應(yīng)用較廣泛的方法，如TTC法，紙片法等[17.18]。

2.1.1 紙片法

紙片法即PD法（Paper Disc）。常用的紙片法有枯草桿菌紙片法和嗜熱脂肪桿菌紙片檢測(cè)法。這兩種方法主要用來(lái)檢測(cè)牛奶中的β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素，其操作過(guò)程基本相同，選用的菌種不同?？莶輻U菌紙片法檢測(cè)是將一吸滿受檢乳樣的濾紙圓片放入一接種枯草桿菌的瓊脂平皿上，并放入一含有標(biāo)準(zhǔn)抗生素的陽(yáng)性對(duì)照?qǐng)A片。將陪替氏培養(yǎng)皿在32℃下培養(yǎng)17～24 h，然后觀察有無(wú)抑菌圈，若要判定結(jié)果是否為真陽(yáng)性，則需將乳樣在82℃下加熱2～3 min冷卻，再重復(fù)試驗(yàn)?？莶輻U菌紙片法檢測(cè)的結(jié)果易出現(xiàn)假陽(yáng)性，該方法對(duì)奶樣中青霉素殘留的檢測(cè)限可達(dá)0.01 IU/mL。而嗜熱脂肪桿菌紙片檢測(cè)法不僅用于檢測(cè)奶樣中β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素，并能暗示是否還存在其它抑菌物質(zhì)，檢測(cè)限可達(dá)0.008 IU/mL以下。該法一般在4 h內(nèi)即可獲得結(jié)果。因此，在實(shí)踐中嗜熱脂肪桿菌紙片法比枯草桿菌紙片法應(yīng)用更為廣泛[19]。1982年由FDA認(rèn)可1982年1月1日生效為法定方法。

2.1.2 TTC法

TTC，即氯化三苯基四氮唑（Triphenyl Tetrazolium Chloride），這是目前我國(guó)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的檢查牛乳中抗生素殘留的檢測(cè)方法 （GB/T 4789.27-2003）[20]。該法簡(jiǎn)便、無(wú)需特殊設(shè)備，很適合牧場(chǎng)、乳品廠及食品衛(wèi)生檢測(cè)部門(mén)采用。如果牛乳中有抗生素存在，當(dāng)乳中加入菌種（嗜熱鏈球菌）經(jīng)培養(yǎng)后，菌種不增殖，此時(shí)加入的TTC指示劑不發(fā)生還原反應(yīng)，所以仍呈無(wú)色狀態(tài)；如果沒(méi)有抗生素存在，則加入菌種即行增殖，TTC還原變成紅色，使樣品染成紅色。

TTC法最早由Neel和Calbert二人在1955年提出。1958年Dragon建議TTC法加做乳糖發(fā)酵產(chǎn)氣及酵母培養(yǎng)試驗(yàn)可以證明抑菌的效果究竟由抗生素還是消毒劑引起的。日本20世紀(jì)50年代TTC法是檢測(cè)牛乳中青霉素殘留的法定方法。該方法1955年4月1日起在我國(guó)生效為法定方法。1991年，李權(quán)超[21]用TTC法檢測(cè)長(zhǎng)春市鮮牛奶中抗生素殘留情況，結(jié)果陽(yáng)性率3.3%，可疑率18.3%。

大量的快速檢測(cè)篩選方法的應(yīng)用彌補(bǔ)了傳統(tǒng)方法耗時(shí)、繁瑣的不足，使檢測(cè)更為靈敏、快速。如美國(guó)和加拿大，使用拭子法和牛的抗生素和磺胺實(shí)驗(yàn)法（CAST）。 荷蘭Gist-brocades公司開(kāi)發(fā)的Delvotest檢測(cè)系列，均不受所檢測(cè)的抗生素種類(lèi)限制。盡管這些快速微生物檢測(cè)法有時(shí)會(huì)產(chǎn)生一些假陽(yáng)性，但在某種程度上是允許的；如產(chǎn)生這類(lèi)情況，可進(jìn)一步做確證實(shí)驗(yàn)。

2.1.3 管碟法

由Foster和Wood Ruff于1944年創(chuàng)建管碟法（cylinder plate method），是用含有敏感菌的瓊脂做成平皿，上面放小管（牛津杯），管中放已知抗生素標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)溶液，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，抗生素標(biāo)準(zhǔn)溶液周?chē)婚L(zhǎng)細(xì)菌，即為抑菌圈，如待測(cè)溶液也出現(xiàn)抑菌圈表示含有抗生素。1958年，美國(guó)FDA將藤黃八迭球菌（Sarcinalntea）管碟法作為法定的方法，檢測(cè)青霉素的敏感度為0.01 U/mL[22]。

2.2 理化檢測(cè)法

20世紀(jì)90年代以后，絕大多數(shù)測(cè)定食品中β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留的理化檢測(cè)法主要依靠液相色譜技術(shù)進(jìn)行分離，它是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來(lái)測(cè)定其含量，如高效液相色譜法、氣相色譜法、比色法、熒光分光光度法等等，能進(jìn)行定性、定量和藥物鑒定，敏感性較高，但有的檢測(cè)程序較復(fù)雜，有的檢測(cè)費(fèi)用較高[23，24]。在牛奶中抗生素殘留檢測(cè)方面，最常用的理化檢測(cè)室高效液相色譜和聯(lián)用技術(shù)。

2.2.1 高效液相色譜法

高效液相色譜（HPLC）是目前廣泛應(yīng)用的一種理化檢測(cè)方法，它引入了氣相色譜理論，在技術(shù)上采用了高壓泵，高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了分離速度快、效率高和操作自動(dòng)化。高效液相色譜法測(cè)定牛奶中的藥物殘留要經(jīng)歷樣品處理（包括樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等），殘留藥物的分離和殘留藥物的檢測(cè)等步驟。該檢測(cè)法敏感性較高，但有些樣品前處理繁瑣，檢測(cè)程序較復(fù)雜，費(fèi)用較高[25.26]。

（1）樣品的提取。

通常，樣品用水或者酸性有機(jī)溶劑提取，兩者可以同時(shí)達(dá)到脫蛋白和萃取殘留的目的。Bioson J O等[27]將青霉素萃取水相中，在硫酸和鎢酸鈉的存在下，可減少部分非極性化合物的污染，得到比較干凈的水提取液。

但是經(jīng)過(guò)水或者酸性有機(jī)溶劑提取后，目標(biāo)分析物濃度都很低，還含有許多共萃物，如果這些物質(zhì)在最終的溶液中存在，不僅會(huì)損害色譜儀器，也會(huì)增加檢測(cè)的噪音，無(wú)法測(cè)定痕量的目標(biāo)分析物。為了降低背景化合物的干擾，通常需要對(duì)目標(biāo)分析物進(jìn)行凈化與濃縮，常用的凈化和濃縮方法有離子交換法（IE）、固相萃取法（SPE）和免疫親和色譜法（IAC）。秦燕等人[28]報(bào)道了牛奶中四環(huán)素族抗生素殘留的高效液相色譜法。樣品經(jīng)EDTA-Mcllvain緩沖液提取，離心后取上清液于預(yù)平衡的Sep-Pak WatersTM Sep-Pak C18固相萃取柱凈化，用濃度為10 mmol/L的草酸甲醇溶液洗脫，并于40℃用N2濃縮儀吹干，流動(dòng)相0.5 mL溶解殘?jiān)M(jìn)行HPLC分析。

（2）殘留藥物的檢測(cè)。

HPLC在殘留分析中使用的主要的檢測(cè)方式為為濃度型紫外檢測(cè)器（UVD）、熒光檢測(cè)器（FLD）和二極管陣列檢測(cè)器（DAD）。UVD是應(yīng)用最早和最廣泛的HPLC檢測(cè)器，其特點(diǎn)是價(jià)格低，選擇性好，能滿足殘留分析的一般要求。由于奶樣中藥物殘留量少，背景干擾往往很?chē)?yán)重，因此一般都通過(guò)柱前衍生反應(yīng)來(lái)提高紫外檢測(cè)器檢測(cè)殘留的靈敏度。蔡玉娥等利用UVD，通過(guò)優(yōu)化條件來(lái)測(cè)定牛奶中多種頭孢類(lèi)抗生素的殘留，條件為波長(zhǎng)270nm、C16色譜柱，結(jié)果能滿足一般食品樣品中頭孢類(lèi)藥物殘留量的分析要求。彭莉[29]等報(bào)道了用HPLC檢測(cè)牛奶中氯霉素的殘留量，采用乙酸乙酯提取牛奶中殘留的氯霉素，以乙腈—0.005 mol/L磷酸氫二銨（18+82，V/V）作為流動(dòng)相，用紫外檢測(cè)器在278 nm檢測(cè)。平均加收率94.8%，變異系數(shù)＜12.0%。此方法樣品前處理簡(jiǎn)單、回收率高、實(shí)用性強(qiáng)、檢疫靈敏度高、重現(xiàn)性好、檢測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，可作為牛奶中氯霉素殘留檢測(cè)的確證方法。

熒光檢測(cè)法，由于其固有的高靈敏度，在多數(shù)LC分析中藥優(yōu)于紫外檢測(cè)法。羅道栩等人[30]報(bào)道了用三氯乙酸溶液沉淀牛奶蛋白并提取氨芐青霉素殘留，在酸性條件下，提取液中的氨芐青霉素與甲醛加熱生成氨芐青霉素?zé)晒庋苌?，用熒光檢測(cè)器在激發(fā)波長(zhǎng)（Ex）346nm、發(fā)射波長(zhǎng)（Em）420 nm條件下測(cè)定該衍生物。本方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高，最低檢測(cè)限為1μg/L。此外還報(bào)道衍生劑有dansylaziridine[31]、9—芴基甲基氯甲酸酯[32]和4—溴甲基—7甲氧香豆素[33]。但由于受到多種因素限制，應(yīng)用并不多。

此外，光二極管陣列檢測(cè)器（DAD）是近十年來(lái)HPLC最重要的突破。DAD可以同時(shí)接收整個(gè)光譜區(qū)的信息，在色譜峰流出同時(shí)進(jìn)行每個(gè)瞬間的動(dòng)態(tài)光譜掃描并快速采集信號(hào)，經(jīng)處理后得到色譜-光譜的三維圖譜，信息量大大增加。一次晉陽(yáng)可得到每個(gè)組分峰的定量、定性和純度信息，靈敏度亦明顯提高。張春燕等人采用直接提取法進(jìn)行樣品提取、凈化，以C18反相柱作為分離柱，采用DAD檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定，紫外可見(jiàn)光譜圖輔助定性，外標(biāo)法定量的方法，測(cè)定牛奶及奶粉中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素殘留，并且可通過(guò)DAD檢測(cè)器的參比功能和實(shí)時(shí)光譜功能，對(duì)樣品進(jìn)行光譜分析。該方法彌補(bǔ)了單靠保留時(shí)間定性的局限，保證了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。盡管測(cè)定原理不同，但樣品的前處理步驟并沒(méi)有多大區(qū)別，都要經(jīng)歷樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟，而所選用色譜柱均為反相柱，流動(dòng)相為有機(jī)溶劑和磷酸鹽緩沖液。總之，液相色譜法測(cè)定牛奶中藥物殘留的方法正逐漸成熟起來(lái)。

2.2.2 聯(lián)用技術(shù)

各種分析技術(shù)聯(lián)用是現(xiàn)代獸藥殘留分析乃至整個(gè)分析化學(xué)方法上的發(fā)展特點(diǎn)。計(jì)算機(jī)的應(yīng)用加速了這一趨勢(shì)。常見(jiàn)的聯(lián)用技術(shù)有：薄層色譜-質(zhì)譜（TLCMS）、氣相色譜-質(zhì)譜 （GC-MS）、液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）、毛細(xì)管區(qū)域電泳-質(zhì)譜（CZE-MS）、液相色譜-核磁共振（LC-NMR）、超臨界流體色譜-質(zhì)譜（SFC-MS）等。聯(lián)用技術(shù)課揚(yáng)長(zhǎng)避短，一般集分離、定量和定性（分子結(jié)構(gòu)信息）于一體，因而特別適用于確證性分析。TLC-MS是最簡(jiǎn)單的離線聯(lián)用技術(shù)。GCMS已相當(dāng)成熟，應(yīng)用相對(duì)較多。但這些聯(lián)用儀器價(jià)格昂貴，遠(yuǎn)不如HPLC或GC那樣普及。

LC-MS是除GC-MS之外的一種集高效分離和多組分定性、定量于一體的系統(tǒng)。LC-MS可用微電腦控制層析條件、程序和數(shù)據(jù)處理，其特異性、靈敏度和重復(fù)性均好，并可一次同時(shí)完成同一樣本中多種藥物及其代謝物檢測(cè)。林維宣等報(bào)道了用LC-MS/MS檢測(cè)方法同時(shí)測(cè)定多粘菌素B、粘桿菌素、桿菌肽和維吉尼霉素等4種多肽類(lèi)抗生素的殘留，樣品平均回收率維92.1%～98.2%，變異系數(shù)在2.5%～6.5%之間，方法檢測(cè)限為20～250μg/kg。Straub等[34]使用LC/ES/MS測(cè)定了牛奶中的幾種青霉素殘留。青霉素，鄰氯青霉素與芐青霉素的最低測(cè)定限為3～5 μg/kg，氨芐青霉素與羥氨青霉素的最低測(cè)定限為20～30μg/mL。此外，張素霞等[35]報(bào)道了用MSPD-HPLC-UV分析法檢測(cè)牛奶中四環(huán)素類(lèi)藥物殘留。樣品平均回收率為78.7%～90.2%，變異系數(shù)在2.4%～18.8%之間，方法檢測(cè)限為0.02～0.05μg/mL。Kihak等[36]以NCI方式的LC/PB/MS技術(shù)成功對(duì)牛奶中OTC、TC與CTC殘留進(jìn)行確證。Fenneell等[37]使用反相HPLC/PDA測(cè)定了牛奶中及肉制品中的慶大霉素組分，檢測(cè)限為0.5 μg/mL。

2.2.3 其他理化方法

牛奶中抗生素殘留檢測(cè)方法還有高效薄層色譜（HPTLC）、氣相色譜法 （GC）、超臨界流體色譜（SFC）、毛細(xì)管區(qū)域電泳法 （CZE）和近紅外 （FTNIR）光譜、中紅外（FT-MIR）光譜等。這些方法盡管在殘留檢測(cè)中不常用，但因其各自特有的性能，能彌補(bǔ)常用方法中不足之處。如SFC可彌補(bǔ)GC和HPLC的不足，方便的鏈接各種靈敏檢測(cè)器；CZE兼有高壓電泳的高速、高分辨和HPLC靈活、高效的優(yōu)點(diǎn)，柱效高達(dá)105塔板/m；FT-MIR光譜法優(yōu)于FT-NIR光譜法，檢測(cè)范圍為4～2000 μg/kg，可以快速檢測(cè)牛奶中殘留的四環(huán)素類(lèi)抗生素。

此外，隨著接口技術(shù)的顯著改進(jìn)，質(zhì)譜作為一種質(zhì)量流速型檢測(cè)器，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于抗生素殘留分析檢測(cè)中。電化學(xué)檢測(cè)器也已用于檢測(cè)鄰氯青霉素、頭孢菌素和青霉素。

2.3 免疫分析法

免疫學(xué)分析法是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析方法。目前應(yīng)用的殘留免疫分析技術(shù)可分為2個(gè)基本類(lèi)型。

（1）相對(duì)獨(dú)立的分析方法，即免疫測(cè)定法（IAS），包括放射免疫測(cè)定法 （RIA）、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）、固相免疫傳感器等。競(jìng)爭(zhēng)ELISA法應(yīng)用于牛奶中抗生素的檢測(cè)比較廣泛。Schnappinger等[38]建立了牛奶中鏈霉素和雙氫鏈霉素的直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA，樣品經(jīng)離心脫脂（4 000 g，20 min）和PBS稀釋后直接測(cè)定，檢測(cè)限分別為0.6 ng/mL和0.4 ng/mL。Haasnoot等報(bào)道了牛奶中鏈霉素、雙氫鏈霉素、慶大霉素和新霉素直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)定法，檢測(cè)限達(dá)10～15 ng/mL。

（2）免疫凈化法，將免疫分析技術(shù)與常規(guī)理化分析技術(shù)聯(lián)用，其中最常用的是免疫親和色譜法（IAC）。Van de Water C等[39]報(bào)道了牛奶中氯霉素的IAC凈化法，樣品經(jīng)過(guò)離心、過(guò)濾和稀釋后用IAC柱凈化，HPLC和紫外檢測(cè)器檢測(cè)，回收率70%～99%，最低檢測(cè)限20 ng/L。Zhi Z L等[41]采用流動(dòng)免疫分析系統(tǒng)的自動(dòng)化和綜合化來(lái)快速檢測(cè)生鮮奶中的頭孢菌素，檢測(cè)限為1 μg/L，定量檢測(cè)限為3 μg/L.通過(guò)加入質(zhì)量濃度為3～30 μg/L的頭孢菌素測(cè)定其回收率為97%。

免疫學(xué)分析法快速、靈敏、特異，與常規(guī)的理化分析技術(shù)相比，其分析成本低且取樣量少，儀器化程度低。但免疫測(cè)定法也有其局限性，即前期準(zhǔn)備工作難度大，對(duì)于可疑假陽(yáng)性或假陰性樣品還需要色譜法進(jìn)行再確定，并且單樣檢測(cè)費(fèi)用較高。因此，免疫法現(xiàn)還不能取代色譜常規(guī)分析方法，但可以作為其重要補(bǔ)充。

3 結(jié)束語(yǔ)

牛奶中抗生素殘留是涉及人類(lèi)健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題。為了保障人們的身體健康，增強(qiáng)我國(guó)乳制品的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力，這就要求我們不但要重視和加強(qiáng)檢測(cè)工作，建立簡(jiǎn)便、快速、敏感、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，而且要大力開(kāi)發(fā)非抗生素類(lèi)添加劑，行業(yè)內(nèi)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)收購(gòu)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售牛奶及奶制品，杜絕不符合標(biāo)準(zhǔn)的奶流入市場(chǎng)，提高我國(guó)奶品的質(zhì)量，符合WTO的質(zhì)量技術(shù)要求，提高奶品企業(yè)自身產(chǎn)品的競(jìng)爭(zhēng)力，促進(jìn)我國(guó)奶業(yè)向國(guó)際化方向發(fā)展。

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Study of technology for antibiotic residues in milk and the detection method

LI Xiao-hong1，WANG Fei-fei1，CHI Tao2
（1.Heilongjiang Agricultural Economy Vocational College,Mudanjiang157041，China;2.Heilongjiang Research Center of Industry Technology;Harbin 150086;China）

This article describes the antibiotic residues in milk and its range of detection methods，including microbial detection method，physical and chemical detection and immune detection.Thereinto stratography，multiple techniques and immunization in residue analysis of research and application have made considerable progress.

antibiotics；residue；detection method

TS252.7

B

1001-2230（2010）11-0036-05

2010-08-09

李曉紅（1981-），女，碩士，研究方向?yàn)樾螽a(chǎn)品加工。