王 勇，劉建華，田穎剛，朱 勝，謝明勇*

泰和烏骨雞活性肽補血作用研究

王 勇，劉建華，田穎剛，朱 勝，謝明勇*

(南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室，江西 南昌 330047)

目的：探討泰和烏骨雞活性肽體內(nèi)補血作用。方法：利用失血法和骨髓抑制藥物氟尿嘧啶注射法聯(lián)合建立小鼠血虛模型，并測定紅細(xì)胞(RBC)和血紅蛋白(HGB)水平，觀察烏骨雞活性肽及其一種分離活性肽(簡稱組分A)對血虛小鼠的補血作用。結(jié)果：活性肽組RBC水平在第12天時與血虛組相比差異顯著(P＜0.05)；活性肽組在第6至12天期間升高RBC和HGB作用水平與阿膠組相比明顯加快，具有顯著性差異(P＜0.05)。第18天時活性肽組HGB水平已超過各組水平，且與正常組相比具有顯著性差異(P＜0.05)。活性肽組分A組的RBC水平在各個時間點均高于血虛組，但均無顯著性差異(P＞0.05)，活性肽組分A組在第20天時HGB水平已與正常組無顯著性差異(P＞0.05)，而血虛組和阿膠組仍與正常組有極顯著差異(P＜0.01)。結(jié)論：泰和烏骨雞活性肽及活性肽組分A能夠在一定程度上提高氟尿嘧啶血虛模型小鼠的紅細(xì)胞和血紅蛋白水平，具有一定的補血作用。

泰和烏骨雞；活性肽；血虛模型；補血

泰和烏骨雞又名中國泰和雞、武山雞，原產(chǎn)江西泰和縣，它具有烏皮、烏骨、烏肉等十大特征，集觀賞、肉用、藥用于一身，是我國傳統(tǒng)意義上公認(rèn)的天然藥用雞種[1-4]。目前，泰和烏骨雞營養(yǎng)和活性成分及功效已得到了較為系統(tǒng)的研究，已發(fā)現(xiàn)泰和烏骨雞具有高肌肽[5]、高磷脂[6]、低脂肪，在其脂肪酸組成中多不飽和脂肪酸、必需脂肪酸和花生四烯酸比例較高等特點[7-8]，且其總脂質(zhì)具有明確的補血作用[9]?！侗静荼?/p>

讀》中稱烏骨雞為“補肝家血液之虧，理產(chǎn)治勞，甘平無毒，治肺腎虛羸之疾……故肝肺腎三臟血液不足者最宜”[10]。以烏骨雞為主藥的烏雞白鳳丸具有補養(yǎng)氣血、調(diào)經(jīng)止帶的主要功效[11]。烏骨雞活性肽即為烏骨雞肌肉蛋白通過一定優(yōu)化工藝酶促水解后而獲得的具有一定分子質(zhì)量范圍的多肽產(chǎn)物[12]。目前對于烏骨雞的確切藥理作用還不明確，關(guān)于烏骨雞活性肽補血作用的研究尚未見報道。本實驗利用失血法和骨髓抑制藥物氟尿嘧啶注射法聯(lián)合建立小鼠血虛模型，對實驗室制備的烏骨雞活性肽，及對其分離所得一種活性肽的補血作用進行研究，以期為烏骨雞的綜合利用和進一步開發(fā)烏骨雞活性肽資源提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

昆明種小鼠，雄性，體質(zhì)量18～22g，由南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號：醫(yī)動字第021-9602號；泰和烏骨雞由深圳生物谷集團江西泰和烏雞原種雞場提供。

氟尿嘧啶注射液(5-FU，國藥準(zhǔn)字H31020593，批號090810) 上海旭東海普藥業(yè)有限公司；阿膠補血口服液(國藥準(zhǔn)字Z10920057，批號090901) 山東福膠集團有限公司。

TEK-3600全自動三分群血細(xì)胞分析儀 江西特康科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 活性肽及活性肽組分A的制備

泰和烏骨雞活性肽是由新鮮泰和烏骨雞，經(jīng)脫毛、去內(nèi)臟、絞成肉泥，然后采用木瓜蛋白酶酶解制得(加酶量為0.3%)；活性肽組分A是由泰和烏骨雞活性肽經(jīng)制備型高效液相色譜制備獲得。

色譜條件：儀器：Waters 4000制備型高效液相色譜儀；流動相：0.01mol/L pH6.8磷酸鹽溶液；色譜柱：Bondapak C18(30mm×300mm，15μm)；活性總肽質(zhì)量濃度：50mg/mL；流動相流速：18mL/min；進樣量：1000μL；柱溫：27℃；檢測器：PAD 2996；檢測波長：214nm。

1.2.2 烏骨雞活性肽血虛模型的建立及實驗設(shè)計

經(jīng)前期實驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)烏骨雞活性肽劑量為5g/kg bw時具有相對較好的補血效果，故在本模型建立時采用此劑量。建立血虛動物模型通常是使動物外周血紅細(xì)胞或白細(xì)胞數(shù)量下降，或是使動物骨髓抑制，減少外周血細(xì)胞的生成[13]。本實驗中，血虛模型的制備參考吳宏忠等[14]的方法，并作一定修改。取雄性昆明小鼠48只，體質(zhì)量30～35g，編號隨機均分為4組，每組分別灌胃：烏骨雞活性肽(5g/kg bw)、阿膠補血口服液(13mL/kg bw)和同體積生理鹽水(正常組和血虛模型組)。建立血虛模型方法如下：第1天，除正常組外，其他各組小鼠尾靜脈注射氟尿嘧啶150mg/kg bw[15]，2h后全體小鼠即開始灌胃各試劑，連續(xù)給藥18d；第2天用內(nèi)徑為1mm的毛細(xì)管給每只小鼠一次性眼眶放血0.7mL。于第6、12和18天眼眶取血0.2mL，EDTA二鉀抗凝，用全自動血細(xì)胞分析儀測定小鼠紅細(xì)胞(RBC)和血紅蛋白(HGB)值。

1.2.3 烏骨雞活性肽組分A血虛模型的建立及實驗設(shè)計

取雄性昆明小鼠48只，體質(zhì)量30～35g，編號，隨機均分為4組，每組分別灌胃：烏骨雞活性肽組分A (500mg/kg bw)、阿膠補血口服液(13mL/kg bw)和同體積生理鹽水(正常組和血虛模型組)建立血虛模型方法如下：第1天，除正常組外，其他各組小鼠尾靜脈注射氟尿嘧啶150mg/kg bw，2h后全體小鼠即開始灌胃各試劑，連續(xù)給藥20d；第2天用內(nèi)徑為1mm的毛細(xì)管給每只小鼠一次性眼眶放血0.7mL。于第5、10、15和20天眼眶取血0.2mL，EDTA二鉀抗凝，用自動血細(xì)胞分析儀測定小鼠RBC、HGB值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 13.0數(shù)據(jù)處理軟件，各組數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，各組數(shù)據(jù)采用O n e-W a y ANOVA進行單因素方差分析，并進行LSD兩兩比較，P＜0.05為差異具有顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 泰和烏骨雞活性肽對小鼠RBC、HGB值的影響

表1 泰和烏骨雞活性肽對血虛小鼠RBC的影響(x±s,n=12)Table 1 Effect of bioactive peptides from TBSF on RBC of blood deficiency mice (±s,n=12)

表1 泰和烏骨雞活性肽對血虛小鼠RBC的影響(x±s,n=12)Table 1 Effect of bioactive peptides from TBSF on RBC of blood deficiency mice (±s,n=12)

注：a.與血虛組相比，有顯著性差異(P＜0.05)；b.與血虛組相比，有極顯著性差異(P＜0.01)；c.與正常組相比，有顯著性差異(P＜0.05)；d.與正常組相比，有極顯著性差異(P＜0.01)；e.與活性肽組相比，有顯著性差異(P＜0.05)；f.與阿膠組相比，有顯著性差異(P＜0.05）。下同。

組別RBC /(1012個/L)第6天第12天第18天正常組7.28±0.88b6.71±0.60b6.92±0.58血虛組4.84±0.30d5.72±0.56d6.95±0.37活性肽組5.08±0.29d6.21±0.40acf7.13±0.41阿膠組5.20±0.60de5.67±0.74de7.08±0.49

由表1可見，造模后活性肽組的紅細(xì)胞水平在各個時間點均高于血虛組。與血虛組相比，活性肽組RBC水平分別增長了5.0%、8.6%、2.6%。第12天時二者相比RBC值差異顯著(P＜0.05)。與正常組相比，在第18天時活性肽組及血虛組RBC水平與正常組已無顯著性

差異(P＞0.05)，但超過正常組3.0%，而阿膠組RBC水平雖也與正常組無顯著性差異(P＞0.05)，但超過幅度僅為正常組2.3%，不及活性肽組。與活性肽組相比，阿膠組升高RBC的作用更快，第6天時其RBC水平與活性肽組相比具有顯著性差異(P＜0.05)，但在第12天時活性肽組RBC水平即超過阿膠組達9.5%，且與阿膠組相比具有顯著性差異(P＜0.05)，說明活性肽在第6至12天期間升高RBC水平的作用與阿膠相比明顯加快。在第18天時活性肽組RBC水平已超過各組水平。提示活性肽能促進血虛小鼠紅細(xì)胞的增殖，具有一定的補血作用。由表2可見，第6、12、18天活性肽組的HGB水平均比血虛組高，分別增長了6.4%、9.6%、4.4%，但無顯著性差異(P＞0.05)。與活性肽組相比，阿膠組升高HGB的作用更快，且具有顯著性差異(P＜0.05)，但在第12天時活性肽組即超過阿膠組HGB水平達11.5%，且與阿膠組相比具有顯著性差異(P＜0.05)，說明活性肽在第6至12天期間升高HGB水平的作用與阿膠相比明顯加快。在第12天時，活性肽組HGB水平已與正常組無顯著性差異(P＞0.05)，而血虛組和阿膠組仍與正常組有極顯著差異(P＜0.01)；第18天時活性肽組已超過其他各組HGB水平。提示活性肽能夠促進血虛小鼠血紅蛋白水平的提高，具有一定程度的補血作用。

表2 泰和烏骨雞活性肽對血虛小鼠HGB的影響(x±s,n=12)Table 2 Effect of bioactive peptides from TBSF on HGB of blood deficiency mice (±s,n=12)

表2 泰和烏骨雞活性肽對血虛小鼠HGB的影響(x±s,n=12)Table 2 Effect of bioactive peptides from TBSF on HGB of blood deficiency mice (±s,n=12)

組別HGB含量 /(g/L)第6天第12天第18天正常組130.31±14.24b119.23±10.65b125.15±12.53血虛組78.00±6.97d104.55±14.88d130.64±15.47活性肽組83.09±5.38c114.36±9.36f136.36±10.06c阿膠組85.00±8.90de102.55±14.21d131.82±10.18

2.2 泰和烏骨雞活性肽組分A對小鼠RBC、HGB值的影響

表3 泰和烏骨雞活性肽組分A對血虛小鼠RBC的影響(x±s,n=12)Table 3 Effect of bioactive peptide fraction A from TBSF on RBC of blood deficiency mice (x±s,n=12)

由表3可見，造模后活性肽組分A組和阿膠組的紅細(xì)胞恢復(fù)水平在各個時間點均高于血虛組。在連續(xù)給予小鼠活性肽A組分5d后，活性肽組分A組RBC水平就已開始大于血虛組小鼠。與血虛組相比，活性肽組分A組RBC值分別比血虛組高5.8%、7.0%、2.4%、3.2%，但均無顯著性差異(P＞0.05)。與阿膠組相比，兩組之間亦無顯著性差異(P＞0.05)。提示活性肽組分A有可以促進血虛小鼠紅細(xì)胞增殖的趨勢，具有一定程度的補血作用。

表4 泰和烏骨雞活性肽組分A對血虛小鼠HGB的影響(x±s,n=12)Table 4 Effect of bioactive peptide fraction A from TBSF on HGB of blood deficiency mice (x±s,n=12)

由表4可見，與血虛組相比，活性肽組分A組在第5、10、15、20天的HGB值分別高出了7.7%、9.2%、6.2%、3.8%，但無顯著性差異(P＞0.05)；阿膠組與血虛組相比，HGB水平在前三個時間點均略高于血虛組，但同樣無顯著性差異(P＞0.05)，而且在第20天時反而略低于血虛組2.7%。與阿膠組相比，活性肽組分A升高HGB水平的作用更快，且在各個時間段分別比阿膠組的HGB水平高出0.2%、3.6%、3.5%、7.0%。與正常組相比，血虛組和阿膠組在各個時間點都與正常組有極顯著差異(P＜0.01)，而活性肽組分A組在第20天時已與正常組無顯著性差異(P＞0.05)，而血虛組和阿膠組仍與正常組有極顯著差異(P＜0.01)，說明第20天時活性肽組分A組已先于其他組恢復(fù)到正常水平。提示活性肽組分A具有促進血虛小鼠血紅蛋白水平的提高，具有一定程度的補血作用。

3 討 論

烏骨雞是我國民間常用的滋補佳品，具有益氣血、補肝腎等功效。田穎剛等[9]發(fā)現(xiàn)烏骨雞正己烷提取物能夠升高血虛小鼠紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅蛋白等水平，具有補血作用，但是關(guān)于烏骨雞肌肉蛋白酶促水解物即烏骨雞活性肽的補血功能的研究目前尚未見報道。

本研究利用失血法和氟尿嘧啶(癌癥化療藥物，具有骨髓抑制作用)注射法聯(lián)合建立了小鼠血虛模型，測定了小鼠紅細(xì)胞和血紅蛋白水平，以觀察烏骨雞活性肽及其一種分離活性肽對血虛小鼠的補血作用。結(jié)果顯示，在小鼠血虛模型中，烏骨雞活性肽及其分離所得的活性肽組分A均能夠在一定程度上提高血虛小鼠的紅

細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白含量。有研究表明，阿膠具有抵抗化療造成的骨髓抑制的功能[16-18]，但到目前為止，未見阿膠對氟尿嘧啶和眼眶放血聯(lián)合致血虛小鼠具有補血作用的報道。本研究以阿膠為陽性對照，結(jié)果表明，阿膠在此模型中未發(fā)揮顯著的補血作用(P＞0.05)。在本實驗的結(jié)果中，烏骨雞活性肽能夠在一定程度上升高RBC和HGB水平，說明其具有抵抗放血和氟尿嘧啶聯(lián)合造成的小鼠血虛的作用。

烏骨雞活性肽和活性肽A二者的補血作用效果相比，在升高RBC水平方面，活性肽A在第5天時提升RBC的百分率比活性肽高，且比活性肽提升速度快，在以后幾天二者差別不大，但活性肽比活性肽A總體作用稍好，這可能與活性肽A的劑量較低有關(guān)；在提升HGB水平方面，活性肽A提升血虛組HGB的百分率高于活性肽組，且提升速度快于活性肽。以上說明活性肽A能較早地開始恢復(fù)RBC水平，而恢復(fù)速度比活性肽稍慢，但是活性肽A在提升HGB水平方面作用優(yōu)于活性肽，提示活性肽A能在紅細(xì)胞數(shù)量增加不多的情況下，增加紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白的含量。另外，本實驗中烏骨雞活性肽(5g/kg bw)灌胃量大于活性肽A(500mg/kg bw)。由此可以預(yù)測，當(dāng)加大活性肽A灌胃量時，其補血效果可能會更好。

綜上所述，泰和烏骨雞活性肽及其一種分離活性肽A能夠在一定程度上提高血虛小鼠的紅細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白含量，具有一定的補血作用，為進一步研究開發(fā)烏骨雞補血物質(zhì)以及闡述其補血機理提供實驗依據(jù)。另外，烏骨雞是江西省特有藥用資源，對烏骨雞活性肽進行深入的研究，對闡明烏骨雞在療效中所起的作用和開發(fā)烏骨雞系列功能產(chǎn)品均具有重要的意義。

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Hematopoiesis Activity of Bioactive Peptides from Taihe Black-bone Silky Fowls

WANG Yong，LIU Jian-hua，TIAN Ying-gang，ZHU Sheng，XIE Ming-yong*
(State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

Objective: To investigate the hematopoiesis activity of bioactive peptides from Taihe Black-bone Silky Fowls (TBSF). Methods: Blood loss combined with myelosuppression drug (Fluorouracil, 5-FU) was used to establish a blood deficiency mouse model. Red blood cells (RBC) and hemoglobin (HGB) levels were measured to evaluate the hematopoiesis effects of bioactive peptides from TBSF and isolated bioactive peptide fraction A. Results: Compared with the blood deficiency group, the RBC level of bioactive peptides group has a significant difference on the 12th day administration (P＜ 0.05); During the period of 6 to 12 days, RBC and HGB levels of bioactive peptides group exhibited a significant faster than the Ejiao group (P＜0.05). On the 18th day, HGB level of bioactive peptides group was higher than other groups, and also significantly higher than the normal control group (P ＜ 0.05). The RBC level in bioactive peptide fraction A group was higher than the blood deficiency group at each time point although no significant difference was observed (P＞ 0.05), while the blood deficiency group and the Ejiao group exhibited a significant difference (P＜ 0.01), compared with the normal control group. On the 20th day, there was no significant difference in HGB level (P＞ 0.05) between the bioactive peptide fraction A group and the normal control group, while the blood deficiency group and the Ejiao group revealed a significant difference from the normal control group (P＜ 0.01). Conclusion: Bioactive peptides from TBSF exhibit hematopoiesis activity by elevating RBC and HGB levels to some extent.

Taihe black-bone silky fowl；bioactive peptide；blood deficiency model；hematopoiesis

R285.5

A

1002-6630(2010)21-0340-04

2010-06-28

國家自然科學(xué)基金項目(20862012)

王勇(1986—)，男，碩士研究生，研究方向為營養(yǎng)保健與功能食品。E-mail：wangyong1518@126.com

*通信作者：謝明勇(1957—)，男，教授，博士，研究方向為天然產(chǎn)物。E-mail：myxie@ncu.edu.cn