張安啟 王瑞松 房啟祥 陳春平 何在啟 陳日林 劉發(fā)余

（①山東省莒縣畜牧獸醫(yī)局 276500 ②山東省莒縣蠶藥廠）

為篩選出防治家蠶細(xì)菌病的理想藥物，依據(jù)正在使用、相對(duì)較新、殺菌廣普、適用于口服、價(jià)格相對(duì)低廉、與傳統(tǒng)防治藥物有一定的衍生關(guān)系等原則，從人用藥和獸用藥品種中定性選擇出了鹽酸環(huán)丙沙星、諾氟沙星、紅霉素、氟苯尼考等藥物。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行了目的藥物的篩選試驗(yàn)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供試蠶種 9202×魯七，青州蠶種場(chǎng)生產(chǎn)。

1.1.2 供試病原 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)蠶病室繼代培養(yǎng)，主要種類是黑胸?cái)⊙挽`桿敗血菌。

1.1.3 供試藥物 鹽酸環(huán)丙水洗星、諾氟沙星、恩諾沙星、紅霉素均為市售原粉。

1.1.4 培養(yǎng)基成分 牛肉膏3g、蛋白凍10g、NaCI5g、瓊脂15g、定容1L、pH=7.5。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 濃度設(shè)置 藥敏試驗(yàn)藥劑濃度為3%的原液，藥效試驗(yàn)藥劑濃度均為180mg/L。

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)區(qū) 每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)均為20頭蠶。

1.2.3 體外抑菌試驗(yàn)方法（1）細(xì)菌準(zhǔn)備：將培養(yǎng)好的細(xì)菌每管倒入20ml無(wú)菌水，將菌膜充分刮起后倒入三角瓶中，然后充分?jǐn)嚢琛＃?）培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：將制好的培養(yǎng)基放入沸水中溶化，備用。（3）接種：在無(wú)菌條件下，吸取菌液分別放入已消毒的培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿放入2ml菌液，然后將冷卻后的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，用量以蓋過(guò)培養(yǎng)皿底為佳，適當(dāng)搖勻后，將直徑6mm濾紙片放入已配好的藥液中，濾紙片被藥液浸透后，再放入相應(yīng)濃度編號(hào)的培養(yǎng)皿中間，30℃下培養(yǎng)48h，觀察抑菌圈大小。

1.2.4 藥效試驗(yàn)方法（1）病菌接種：在無(wú)菌條件下用接種環(huán)刮取細(xì)菌，用昆蟲針蘸取，從節(jié)間膜處穿刺，將病原接種于蠶體。（2）藥物添食法：從4齡起蠶開(kāi)始各處理每天添食1次相應(yīng)的藥物，到5齡第3天蠶兒接種細(xì)菌，后繼續(xù)進(jìn)行藥物添食，直到毒對(duì)照蠶兒發(fā)病止，調(diào)查發(fā)病率。（3）發(fā)病調(diào)查方法：待毒對(duì)照蠶兒明顯表現(xiàn)出病癥時(shí)，用肉眼觀察法調(diào)查各區(qū)蠶的發(fā)病情況。

2 藥物的初選結(jié)果與分析

2.1 體外藥敏試驗(yàn)（結(jié)果見(jiàn)表1）

從表1中可以看出，試驗(yàn)藥劑對(duì)黑胸?cái)⊙獥U菌，靈桿菌均有抑制作用。在所有的藥劑中氟苯尼考對(duì)黑胸桿菌和靈桿敗血菌的抑制作用最好，抑菌圈直徑分別是48.5mm、32.6mm。其抑菌效果明顯好于其它藥物，特別是對(duì)靈桿菌效果更明顯。其次是鹽酸環(huán)丙沙星，抑菌圈直徑分別是42.7mm、7.6mm。

表1 治療細(xì)菌藥物篩選體外藥敏試驗(yàn)(抑菌圈直徑) (mm)

2.2 不同藥劑藥效對(duì)比試驗(yàn)（結(jié)果見(jiàn)表2）

從表2可以看出，3種藥劑對(duì)黑胸?cái)⊙≈委熜Ч^好，但氟苯尼考效果最佳，發(fā)病率為0。比鹽酸環(huán)丙沙星低12%，比氯霉素低9%。3種藥劑對(duì)靈桿菌敗血病治療效果差別較大，氟苯尼考效果最佳，發(fā)病率為26%，而鹽酸環(huán)丙沙星、氯霉素的治療效果均較差、發(fā)病率分別為88%和64%，比氟苯尼考分別高62%和38%。

表2 治療細(xì)菌病藥物篩選藥效試驗(yàn)(發(fā)病率) (%)

2.3 小結(jié)

經(jīng)體外藥敏試驗(yàn)和藥效對(duì)比試驗(yàn)，氟苯尼考對(duì)黑胸?cái)⊙『挽`菌敗血病的治療效果均比鹽酸環(huán)丙沙星和氯霉素好，尤其對(duì)靈菌敗血病的治療效果最突出。

3 討論

（1）長(zhǎng)期以來(lái)，家蠶細(xì)菌病一直是影響蠶業(yè)生產(chǎn)的一重要因素。傳統(tǒng)的做法是通過(guò)消毒和使用普通藥物氯霉素。而消毒具有局限性，傳統(tǒng)藥物由于長(zhǎng)期使用已產(chǎn)生抗藥性，選擇有效的抗菌藥物已是蠶業(yè)生產(chǎn)的重要任務(wù)。

（2）最近幾年，人用藥和獸用藥的發(fā)展速度很快，從人用藥和獸用藥中選擇有效的抗菌藥物，而且使之與傳統(tǒng)防治藥物有一定的衍生關(guān)系，這是治療家蠶細(xì)菌性疾病行之有效的辦法。

（3）科學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果表明，氟苯尼考是治療家蠶黑胸桿菌和靈桿敗血菌病的有效藥物。同時(shí)更加經(jīng)濟(jì)、更加安全地使用新的抗菌藥物，也是今后研究的方向。