楊麗芬,李紹東,周亞敏,唐品超,吳志蕾,王 瓊

(中國實(shí)驗(yàn)動物云南靈長類中心,云南昆明 650216)

獼猴病毒性肝炎血清學(xué)調(diào)查*

楊麗芬,李紹東,周亞敏,唐品超,吳志蕾,王 瓊

(中國實(shí)驗(yàn)動物云南靈長類中心,云南昆明 650216)

了解相同飼養(yǎng)條件下恒河猴、食蟹猴中的病毒性肝炎抗體陽性率,為控制病毒性肝炎的傳播,提高飼養(yǎng)管理水平與實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量提供依據(jù)。用ELISA法,對525份來自兩個猴群的血清樣本進(jìn)行了病毒性肝炎(HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGV、TTV)抗體(IgG、IgM)檢測。猴群中病毒性肝炎(HBV、HCV 、HDV 、HEV 、HGV 、T TV)抗體(IgG)均為陰性,恒河猴甲型病毒性肝炎(HAV)抗體IgG、IgM 陽性率分別為81.9%、0%;食蟹猴分別為91.9%、1.6%。食蟹猴和恒河猴甲型病毒性肝炎感染率高。

獼猴;肝炎病毒;抗體檢測

人病毒性肝炎(Viral hepatitis)是由多種病毒引起的人類肝細(xì)胞腫脹,匯管區(qū)水腫和炎性細(xì)胞浸潤,導(dǎo)致肝腫大為特征的一組傳染病,是世界上流行久遠(yuǎn)、廣泛、危害極大的傳染病之一[1-2]。

實(shí)驗(yàn)獼猴是醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中非常重要的實(shí)驗(yàn)動物,獼猴可被甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)、丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)、戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)、庚型肝炎病毒(Hepatitis G virus,HGV)攻擊感染發(fā)病,可用于開展相關(guān)致病機(jī)理的研究。雖然用獼猴做乙型肝炎動物模型效果不太理想[3],但獼猴能感染甲型肝炎成為自然宿主[4]。目前國內(nèi)未見對靈長類實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行病毒性肝炎血清學(xué)較全面調(diào)查的報(bào)道,特別是尚無兩種獼猴進(jìn)行多型病毒性肝炎血清學(xué)的對比調(diào)查報(bào)道。開展對獼猴的病毒性肝炎血清學(xué)調(diào)查,有助于研究獼猴病毒性肝炎的感染、流行,有利于更好地控制傳播以及進(jìn)一步開展相關(guān)流行病學(xué)的研究。

肝炎病毒免疫球蛋白IgG抗體是機(jī)體遭受病毒感染后產(chǎn)生的總抗體,一般在感染后30 d出現(xiàn),90 d～120 d達(dá)到高峰,可持續(xù)幾年或幾十年,形成一種保護(hù)性抗體,病毒性肝炎免疫球蛋白IgG抗體的存在表明機(jī)體對肝炎病毒具有免疫力,是肝炎病毒曾經(jīng)感染的標(biāo)志。肝炎病毒免疫球蛋白IgM抗體是機(jī)體遭受病毒感染后產(chǎn)生的應(yīng)急抗體,一般在感染后20 d出現(xiàn),35 d～42 d達(dá)到高峰,隨后逐漸減少,于84 d～112 d后大部分消失,肝炎病毒免疫球蛋白IgM抗體的存在表明機(jī)體處在病毒感染的急性期,是病毒感染早期診斷的重要指標(biāo)。

本文對獼猴群甲型肝炎病毒抗體(抗-HAVIgG 、抗-HAVIgM),乙型肝炎病毒抗體(HbsAg、抗HBs、HbeAg 、抗 HBe、抗 HBe)簡稱乙肝兩對半 ,丙型肝炎病毒抗體(抗-HCVIgG),丁型肝炎病毒抗體(抗-HDVIgG),戊型肝炎病毒抗體(抗-HEVIgG),庚型肝炎病毒抗體(抗-HGVIgG),T T肝炎病毒抗體(抗-TTVIgG)進(jìn)行了檢測,旨在為控制病毒性肝炎的傳播,提高飼養(yǎng)管理水平與實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品 來源于中國實(shí)驗(yàn)動物云南靈長類中心長期人工飼養(yǎng)于大籠的獼猴525只。其中食蟹猴309只,公猴128只、母猴181只。恒河猴216只,公猴 111只、母猴 106只。后肢靜脈采血,2 500 r/min離心30 min后,分離血清,置-30 ℃保存、備用。

1.1.2 診斷試劑盒 甲肝病毒IgG抗體(HAVIgG)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒,廈門新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn);甲肝病毒IgG抗體(HAV-IgM),乙肝兩對半酶聯(lián)免疫診斷試劑盒,深圳月亮灣生物工程有限公司生產(chǎn);丙肝病毒IgG抗體(HCV-IgG),丁肝病毒IgG抗體(HDV-IgG),戊肝病毒IgG抗體(HEVIgG),庚肝病毒IgG抗體(HGV-IgG)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒,深圳博賽生物工程有限公司生產(chǎn);TT肝炎病毒IgG抗體(TTVIgG)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒,華美生物工程公司生產(chǎn)。

1.2 方法

采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。按試劑盒說明書的要求操作,依其反應(yīng)結(jié)果判定;抗體測定用酶標(biāo)儀(ELx800型)測吸光度值。

2 結(jié)果

2.1 獼猴肝炎病毒抗體檢測結(jié)果

結(jié)果見表1。在相同的人工飼養(yǎng)條件下,獼猴除甲肝以外,其他肝炎病毒抗體(IgG)均為陰性。恒河猴與食蟹猴甲肝病毒(IgG)抗體(HAVIgG)陽性率分別為 81.9%、91.9%,經(jīng)t檢驗(yàn),存在顯著性差異(P＜0.05)。表明食蟹猴感染比恒河猴多。恒河猴甲肝病毒(IgM)抗體全為陰性,而食蟹猴甲肝病毒(IgM)抗體陽性率為1.6%。

2.2 獼猴不同性別甲肝病毒IgG抗體檢測結(jié)果

恒河猴甲肝病毒(IgG)抗體公猴、母猴分別為84.5%、79.2%.食蟹猴甲肝病毒(IgG)抗體公猴、母猴分別為93.8%、90.6%。經(jīng)t檢驗(yàn),無顯著性差異(P＞0.05)表2。表明肝炎病毒感染無性別差異。

表1 獼猴肝炎病毒抗體的檢測結(jié)果Table 1 Antibody detection results of Hepatitis Virus in Rhesus monkeys

表2 獼猴不同性別甲肝病毒IgG抗體檢測結(jié)果Table 2 IgG antibody dectection results of hepatitis A virus in different sex Rhesus monkey s

3 討論

人型甲型肝炎病毒能自發(fā)地感染實(shí)驗(yàn)動物,感染后實(shí)驗(yàn)猴產(chǎn)生血清學(xué)反應(yīng)。這次檢出的甲型肝炎病毒抗體(抗-HAVIgG)陽性的食蟹猴和恒河猴均為隱性感染,感染猴未觀察到明顯的臨床癥狀。而檢出的甲肝病毒抗體(抗-HAVIgM)陽性的食蟹猴也為隱性感染,感染猴未觀察到明顯的臨床癥狀。今后需要對甲肝病毒抗體(HAVIgM)陽性的食蟹猴進(jìn)行肝功檢測,以確認(rèn)甲肝病毒對靈長類動物肝臟機(jī)能的損傷情況。

肝病毒在不同種群的陽性率不同,食蟹猴與恒河猴陽性率差異顯著,可能與食蟹猴的食性有關(guān)。食蟹猴喜食近海產(chǎn)品,而大多數(shù)毛蚶、泥蚶、蛤蜊等近海產(chǎn)品都是甲肝病毒的自然宿主。傳染源的確認(rèn)有待流行病學(xué)的研究。而獼猴公、母猴之間陽性率無顯著性差異。

孫小梅等[5]對人工大籠飼養(yǎng)條件下的49只恒河猴甲肝病毒抗體(HAV IgG)進(jìn)行檢測,陽性率85.7%。作者檢測216只大籠飼養(yǎng)的恒河猴,陽性率81.9%,雖然二者檢測的時間、地點(diǎn)、數(shù)量不同,但其結(jié)果非常接近。似已說明甲肝病毒抗體(HAV IgG)在人工大籠飼養(yǎng)條件下的感染客觀狀況。

由于甲肝病毒主要以糞—口途徑傳播,大籠飼養(yǎng)的猴群接觸被糞便污染的水源、飼料、籠具的可能性較大,陽性率較高。甲肝屬人畜共患傳染病,為保護(hù)員工的健康,相關(guān)員工進(jìn)行甲肝疫苗的注射,主動免疫防護(hù),切斷人與動物間的傳播途徑,同時防止動物到人的傳播。在今后的飼養(yǎng)管理中,應(yīng)積極創(chuàng)造條件實(shí)行食蟹猴與恒河猴的分區(qū)飼養(yǎng),建立相對隔離的飼養(yǎng)環(huán)境,實(shí)行分區(qū)專人飼養(yǎng)管理,飼養(yǎng)、清潔衛(wèi)生工具專用。實(shí)行員工每年定期體檢,體檢結(jié)果顯示不適合接觸動物的員工應(yīng)及時調(diào)離。特別是要加強(qiáng)水源的管理,及時消毒,定期檢測。杜絕因水污染而導(dǎo)致的甲肝傳播。與此同時要加強(qiáng)人和動物糞便的無害化處理,避免反復(fù)乃至交叉感染。

在相同的人工飼養(yǎng)條件下,在獼猴群中檢測不到乙肝、丙肝、丁肝、戊肝、庚肝及T T病毒的抗體。只檢測出了甲肝病毒(HAV IgG、IgM)抗體,陽性的食蟹猴和恒河猴均為隱性感染,感染猴未觀察到明顯的臨床癥狀。食蟹猴較恒河猴陽性率高,而獼猴公、母猴之間陽性率無顯著性差異。檢測結(jié)果為控制病毒性肝炎的傳播,提高飼養(yǎng)管理水平與實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量提供了依據(jù)。

[1]Kumar V,Cotran R S,Robbins R S.Robbins basic pathology[M].北京:北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社,2003:600-608.

[2]聞玉梅.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社,1999:971-989;1143-1146;1168-1179.

[3]李箐箐,陳乾生.病毒性肝炎動物模型的研究[J].實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)與管理,1995,12(3):29-31.

[4]佘銳萍,李文貴,王英華,等.病毒性肝炎-值得警惕的重要人獸互傳病[J].科技導(dǎo)報(bào),2007,25(4):44-52.

[5]孫小梅,代解杰,唐東紅,等.恒河猴群中甲型肝炎病毒(HAV)血清學(xué)調(diào)查[J].中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)雜志,2000,10(1):37-39.

Serological Investigation on Viral Hepatitis in Rhesus Monkeys

YANG Li-fen,LI Shao-dong,ZHOU Ya-min,TANG Pin-chao,WU Zhi-lei,WANG Qiong

(Yunnan National Laboratory Center of China,K unming,Yunnan,650216,China)

The preliminary investigates on the positive rate for antibodies of viral hepatitis in rhesus and Cynomolgus monkeys was conducted provide the bases for controlling the infection of viral hepatitis and improving the level of breeding management and the quality of laboratory animals.ELISA method was used to test antibodies(IgG,IgM)of the viral hepatitis(HAV,HBV,HCV,HDV,HEV,HGV,T TV)in 525 sera from 2 species monkeys.Antibodies(IgG)of viral hepatitis(HBV,HCV,HDV,HEV,T TV)were negative in monkey colonies.Positive rates of antibodies IgG and IgM of viral hepatitis type A were 81.9%and 0%respectively in Rhesus,and was 91.9%and 1.6%in Cynomolgus.The positive rates of antibodies IgG and IgM were lower in Rhesus than in Cynomolgus.Therefore,in order to control viral hepatitis infection,the houses of two species monkey colonies should be strictly separated.

Rhesus monkey;Hepatitis virus;antibody detection

S865.16

B

1007-5038(2010)08-0125-03

2009-12-18

楊麗芬(1964-),女(納西族),云南昆明人,主要從事實(shí)驗(yàn)動物學(xué)研究。