肖開提,阿曼古麗·夏依扎,卡那提白克

(1.新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,新疆 烏魯木齊 830063;2.新疆維吾爾自治區(qū)塔城地區(qū)動(dòng)物疫病控制與診斷中心,新疆 塔城 834700)

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

烏魯木齊市某娛樂(lè)場(chǎng)所先后從內(nèi)地引進(jìn)兩批共4只海豹。第一批海豹在2008年6月下旬開始出現(xiàn)游動(dòng)緩慢、食欲減退、腹瀉等為主要癥狀的疾病。第二批海豹在同年11月下旬開始出現(xiàn)以游動(dòng)緩慢、食欲減退、腹瀉帶血等為主要癥狀的疾病。娛樂(lè)場(chǎng)兩次都是拿著海豹的排泄物要求診斷治療,筆者對(duì)兩起病例都進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室診斷,通過(guò)病原菌分離、培養(yǎng)及生化鑒定,結(jié)合流行病學(xué)、臨床癥狀,確診第一批為嗜水/貂鼠氣單胞菌和大腸桿菌混合感染,第二批為熒光假單胞菌和大腸桿菌混合感染。

2 細(xì)菌學(xué)鑒定

2.1 鏡檢 在無(wú)菌環(huán)境中取病海豹的糞便作觸片固定后,進(jìn)行革蘭染色鏡檢。

2.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng) 無(wú)菌取病海豹的糞便,接種于普通肉湯培養(yǎng)基和厭氧肝湯培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)24 h觀察并進(jìn)行鏡檢,將普通肉湯培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物分別接種于普通培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)37℃培養(yǎng)24 h分離培養(yǎng),觀察培養(yǎng)特性并進(jìn)行染色鏡檢,挑取兩個(gè)菌株的兩個(gè)菌落,分別接種于普通肉湯培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)24 h培養(yǎng),進(jìn)行純培養(yǎng),并備用。

2.3 動(dòng)物試驗(yàn) 將上述兩株菌的純培養(yǎng)物鏡檢,按0.2mL/只,分別腹腔注射兩組小鼠(每組2只,體重16 g左右,由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),并設(shè)對(duì)照組進(jìn)行觀察。

2.4 生化試驗(yàn) 分別取上述兩株致病菌在普通瓊脂培養(yǎng)物進(jìn)行氧化酶試驗(yàn),結(jié)果都為陰性。將2株培養(yǎng)物分別接種于ATB EXPESSION(細(xì)菌自動(dòng)鑒定及藥敏測(cè)試儀)ID 32E和ID 32ENG試條上37℃培養(yǎng)24 h。

2.5 血清型鑒定 分別用大腸桿菌腸道致病性埃希氏菌診斷血清(中國(guó)生物技術(shù)集團(tuán)公司蘭州生物制品研究所提供,國(guó)藥準(zhǔn)字S10820097)進(jìn)行分型。

2.6 藥敏試驗(yàn) 取上述2株革蘭陰性致病菌的純培養(yǎng)物混合作藥敏試驗(yàn)(藥敏紙片由北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司提供,批號(hào)200404)。藥敏試驗(yàn)根據(jù)美國(guó)臨床標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)推薦的K-B瓊脂法進(jìn)行,試驗(yàn)所選用藥物包括下列抗生素:氨芐西林,阿莫西林/克拉維酸,頭孢噻吩,頭孢噻肟,慶大霉素,環(huán)丙沙星,青霉素,鏈霉素,利福平,復(fù)方新諾敏。藥敏結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參照NCCLS手冊(cè)(2005版)。

3 結(jié)果

3.1 鏡檢結(jié)果 在第1批樣品中可見兩端鈍圓、直形或略彎,呈單個(gè)或成雙排列,沒(méi)有芽孢和莢膜的革蘭陰性短小桿菌和兩端鈍圓、散在或成對(duì),有微莢膜的比前者較大的直桿菌,以下簡(jiǎn)稱1號(hào)菌株和2號(hào)菌株。在第2批樣品中可見兩端鈍圓、直形或略彎,呈單個(gè)或成雙排列,沒(méi)有芽孢和莢膜的革蘭陰性較小桿菌和兩端鈍圓,散在或成對(duì),有微莢膜的比前者較大的直桿菌,以下簡(jiǎn)稱3號(hào)菌株和4號(hào)菌株。

3.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)

3.2.1 在第1批樣品中經(jīng)普通培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18～20 h后,有凸起、光滑、濕潤(rùn)、乳白色、邊緣整齊的中等偏大菌落和白色至淺黃色、圓形、表面光滑、邊緣整齊半透明、微隆起的菌落。在麥康凱培養(yǎng)基上可見較大圓整或不規(guī)則、扁平或突起的深紅的濕潤(rùn)菌落和露滴狀、帽針頭大小,呈桔黃色的菌落。在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上可見灰白色、不透明、圓而隆起、邊緣整齊或不規(guī)則、大而濕潤(rùn)但不溶血的菌落和白色、小圓形、表面光滑、邊緣整齊,微隆起有β-溶血環(huán)菌落。普通肉湯培養(yǎng)基呈均勻混濁液體,對(duì)兩株菌分別進(jìn)行革蘭染色鏡檢可見同樣品鏡檢中見到的兩株菌。

3.2.2 在第2批樣品中經(jīng)普通培養(yǎng)基 37℃培養(yǎng)18～20 h后,有一株菌的培養(yǎng)特性和3.2.1前面所描述的相同;另一株細(xì)菌普通培養(yǎng)基上呈圓形、微隆起、表面光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、灰白色、半透明,菌落呈淺綠色,在紫外線照射下呈現(xiàn)熒光,鮮血培養(yǎng)基為β型溶血。

3.3 動(dòng)物試驗(yàn) 4個(gè)試驗(yàn)組8只小鼠均在12～24 h內(nèi)死亡,剖檢死亡小鼠,臟器分別涂片,經(jīng)革蘭染色鏡檢,可見與注射培養(yǎng)物相同的細(xì)菌,對(duì)照小鼠沒(méi)有死亡。

3.4 生化試驗(yàn) 對(duì)分離到的4株細(xì)菌的培養(yǎng)物分別做氧化酶測(cè)定試驗(yàn),結(jié)果2號(hào)菌株和4號(hào)菌株呈陰性,將其接種于細(xì)菌自動(dòng)鑒定ID 32E試條上,1號(hào)菌株和3號(hào)菌株呈陽(yáng)性將其接種于細(xì)菌自動(dòng)鑒定ID 32NG試條上,37℃培養(yǎng)24 h。細(xì)菌自動(dòng)鑒定儀讀出2號(hào)和4號(hào)為大腸埃希氏菌,1號(hào)為嗜水/豚鼠氣單胞菌,3號(hào)為熒光假單胞菌,它們主要的生化試驗(yàn)指標(biāo)結(jié)果如表1。

表1 生化試驗(yàn)結(jié)果

3.5 血清型鑒定 大腸桿菌用腸道致病性埃希氏菌診斷血清,2號(hào)菌株和4號(hào)菌株的血清型均為02。

3.6 藥敏試驗(yàn) 結(jié)果對(duì)第一批病料痢特靈、新霉素效果好,對(duì)第二批病料阿米卡星、新霉素、氧哌嗪青霉素、頭孢哌酮鈉(先鋒必)效果好,其他藥物效果不明顯。

4 討論

4.1 Popoff等(1981)根據(jù)有動(dòng)力氣單胞菌之間的表型和遺傳關(guān)系將本群氣單胞菌分為嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌和溫和氣單胞菌3個(gè)種,嗜水氣單胞菌是條件性致病菌,在淡水、海水及浮游生物中普遍存在,一旦環(huán)境被污染,水生動(dòng)物抵抗力降低,就會(huì)暴發(fā)本病,稱為有動(dòng)力氣單胞菌敗血癥。熒光假單胞菌是草魚等魚類的假單胞菌敗血癥或出血性敗血癥的病原菌,在我國(guó)流行較廣,在放養(yǎng)、扦捕或凍傷后易感染此菌。大腸桿菌系人和溫血?jiǎng)游锬c道后段正常菌群的主要成員之一。是條件性致病菌,并從糞便散播至周圍環(huán)境。兩批病料雖感染不同的水生動(dòng)物傳染性疾病,但同時(shí)都感染大腸桿菌。這可能是給海豹飼喂了被這些細(xì)菌污染的食物,加之飼養(yǎng)管理跟不上,水源造成污染,使海豹感染上述細(xì)菌。另一個(gè)可能是海水的配制有問(wèn)題,水的酸堿度(pH)及鹽度沒(méi)有達(dá)到要求,使海豹的免疫抵抗力下降,而感染疾病。

4.2 由于治療嗜水氣單胞菌病和熒光假單胞菌病的主要治療藥物為呋喃唑酮,而大腸桿菌對(duì)多數(shù)藥物有較強(qiáng)的耐藥性,本實(shí)驗(yàn)室的藥敏結(jié)果是上述菌株對(duì)痢特靈、新霉素、阿米卡星、氧哌嗪青霉素、頭孢哌酮鈉(先鋒必)效果好,其他藥物效果不明顯,娛樂(lè)場(chǎng)飼養(yǎng)人員只是盲目的根據(jù)海豹提供主的要求用慶大霉素進(jìn)行治療,使得海豹的病情加劇。因此,最好根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用敏感的抗菌藥物進(jìn)行治療,避免同一藥物連續(xù)使用,方可避免一些不必要的損失。

[1]楊本升,劉玉斌,茍仕金,等.動(dòng)物微生物學(xué)[M].長(zhǎng)春:吉林科學(xué)技術(shù)出版社,1995:5.

[2]王世若.獸醫(yī)微生物學(xué)及免疫學(xué)[M].長(zhǎng)春:吉林科學(xué)技術(shù)出版社,1990:8.

[3]白文彬,于康震.動(dòng)物傳染病診斷學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2002:12.

[4]費(fèi)恩閣.動(dòng)物傳染病學(xué)[M].長(zhǎng)春:吉林科學(xué)技術(shù)出版社,1995:8.