王 娟

山東省夏津縣質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局，山東德州 253200

高效液相色譜法測(cè)定糕點(diǎn)中苯甲酸·山梨酸·糖精鈉含量的研究

王 娟

山東省夏津縣質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局，山東德州 253200

本文對(duì)國(guó)標(biāo)法進(jìn)行改進(jìn)，建立了用HPLC測(cè)定糕點(diǎn)中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的前處理方法。結(jié)果表明，該方法平均回收率均達(dá)到92.8%以上，符合試驗(yàn)要求。

HPLC；糕點(diǎn)；苯甲酸；山梨酸；糖精鈉；前處理

苯甲酸、山梨酸是有機(jī)化學(xué)防腐劑，可以防止食品腐敗變質(zhì)，延長(zhǎng)食品保存期，抑制食品中微生物繁殖；糖精鈉是一種人工合成甜味劑，其糖度為蔗糖的500倍，且價(jià)格低廉。上述3種添加劑在食品加工過(guò)程中被廣泛使用，但過(guò)量食用會(huì)對(duì)人體會(huì)產(chǎn)生一定影響，因此對(duì)食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的含量進(jìn)行檢測(cè)有重要意義。

目前，國(guó)標(biāo)法(GB/T 5009-2003)[1]使用高效液相色譜法檢測(cè)苯甲酸、山梨酸、糖精鈉只適用于汽水、果汁、配制酒等液體食品，但在實(shí)際工作中，經(jīng)常遇到固體食品(如糕點(diǎn))需要檢測(cè)。由于糕點(diǎn)類食品含有蛋白質(zhì)、淀粉類大分子，以及油脂，直接進(jìn)樣會(huì)堵塞、損傷色譜柱；而采用有機(jī)溶劑提取，操作過(guò)程繁瑣，對(duì)操作者健康的損害大。為此，筆者對(duì)國(guó)標(biāo)法進(jìn)行改進(jìn)，探討出針對(duì)糕點(diǎn)樣品的HPLC前處理方法，進(jìn)行糕點(diǎn)樣品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的含量測(cè)定，獲得了良好的效果。

1 試驗(yàn)原理

糖精鈉是易溶于水的鹽類，樣品中的苯甲酸、山梨酸經(jīng)氫氧化鈉溶液(1.0 mol/L)浸泡后，轉(zhuǎn)化為易溶于水的苯甲酸鈉、山梨酸鈉，經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、過(guò)濾等處理后，3種被測(cè)組分滯留于水相中與雜質(zhì)分離，經(jīng)流動(dòng)相帶進(jìn)色譜柱后進(jìn)行分離，以保留時(shí)間定性，以峰面積定量。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 儀器

1）高效液相色譜儀；2）快速掃描紫外分光檢測(cè)器；3）超聲波清洗器；4）0.45μm微孔濾膜過(guò)濾器；5）臺(tái)式低速大容量離心機(jī)；6）樣品粉碎機(jī)。

2.1.2 試劑

1）甲醇，色譜純；2）0.02 mol/L的乙酸銨溶液；3）1.0 mol/ L氫氧化鈉溶液；4）6 mol/L鹽酸溶液；5）106 g/L的亞鐵氰化鉀溶液；6）220 g/L的乙酸鋅溶液；7）50 g/L飽和硼砂溶液；8）純水，2次重蒸水。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.00 mg/ml苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、1.00 mg/ml山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、1.00 mg/ml糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2 方法

2.2.1 色譜條件的選擇

色譜柱為 SB-C184.6×250 mm，5μm不銹鋼柱；流動(dòng)相為乙酸銨∶甲醇(97∶3)；流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm，柱溫：常溫，采用20μl的定量環(huán)進(jìn)樣。

2.2.2 沉淀劑的選擇[2]

常用的蛋白質(zhì)沉淀劑有硫酸鋅、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅、硫酸銅、氫氧化鈉等，試驗(yàn)顯示，選用220 g/L的乙酸鋅溶液和106 g/ L的亞鐵氰化鉀溶液各5.0ml時(shí)，處理液產(chǎn)生明顯沉淀，上層液清晰，濾液可順利通過(guò)濾膜，能滿足前處理的需要，達(dá)到滿意效果。故選擇乙酸鋅和亞鐵氰化鉀作為沉淀劑。

2.2.3 樣品的前處理

稱取5.0 g粉碎均勻樣品于具塞比色管(50 ml)中，加純水25 ml溶解浸泡，加入氫氧化鈉溶液1.0 ml，放置過(guò)夜。再加入10.0 ml飽和硼砂溶液，搖勻后，加入5.0 ml亞鐵氰化鉀溶液、5.0 ml乙酸鋅溶液，用6 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加水定容至50 ml，振蕩使其充分混合，轉(zhuǎn)移至離心管中高速離心，取上清液，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，收集濾液于樣品瓶中備用。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作和測(cè)定

配制濃度為0.02、0.04、0.08、0.12、0.20 mg/ml的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，各進(jìn)樣20.0μl進(jìn)行測(cè)定，記錄保留時(shí)間及峰面積，各濃度均重復(fù)進(jìn)樣兩次，以不同濃度及相應(yīng)平均峰面積值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。待儀器穩(wěn)定后，在同一色譜條件下，通過(guò)20μl的定量環(huán)分別進(jìn)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)HPLC儀測(cè)定，以保留時(shí)間定性，用樣品峰面積和標(biāo)準(zhǔn)峰面積比較，外標(biāo)法定量。

3 結(jié)果與分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程

3種組分的濃度為0.02～0.20 mg/ml時(shí)，山梨酸的響應(yīng)值最大、糖精鈉的響應(yīng)值最小，但三者均呈良好線形關(guān)系，相關(guān)系數(shù)都超過(guò)0.999，符合試驗(yàn)要求。

注：檢出限按3倍信噪比計(jì)算。

3.2 精密度試驗(yàn)

取同一份樣品(含有苯甲酸、山梨酸、糖精鈉)，重復(fù)測(cè)定6次，其結(jié)果可以看出，該方法的精密度比較好，所測(cè)苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的RSD值分別為0.19%、0.15%、0.32%。

3.3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

在同一份樣品中(不含有苯甲酸、山梨酸、糖精鈉)分別加入高、中、低3種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)?？梢钥闯?，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的加標(biāo)回收率良好(均超過(guò)90%，其平均回收率分別為92.8%、95.2%、92.8%)，這保證了數(shù)據(jù)的可靠性。

4 討論

糕點(diǎn)、月餅等固體食品中，油脂和蛋白質(zhì)含量比較高，如按傳統(tǒng)的GB/T5009-2003方法進(jìn)行樣品前處理，不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且難以排除油脂對(duì)測(cè)定的影響；蛋白質(zhì)由兩性電解質(zhì)氨基酸組成，故其在水溶液中解離也為兩性反應(yīng)，溶液中的等電點(diǎn)改變則導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，使其能與金屬離子、高分子酸或某些鹽類產(chǎn)生沉淀反應(yīng)。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，選用乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液各作蛋白質(zhì)沉淀劑，沉淀效果較好，同時(shí)還能除去油脂，提高樣品的過(guò)濾速度，并可防止進(jìn)樣后色譜柱堵塞、減少其他雜質(zhì)對(duì)測(cè)定結(jié)果的干擾。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法(理化部分) [S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004：223-236.

[2]車燕妮，蘇敬武，劉新榮，等.常溫液相色譜法快速測(cè)定食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)信息，2004，10（3）：309-310.

[3]賴曉紅，謝維平.高效液相色譜法檢測(cè)固體食品中糖精鈉、苯甲酸、山梨酸的樣品前處理方法探討[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2000，10（5）：609-610.

TS213.2

A

1674-6708（2010）21-0086-02