高 玲，劉 閣

（赤峰學(xué)院 化學(xué)系，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

色譜分析法在蒙藏藥研究中的應(yīng)用進(jìn)展

高 玲，劉 閣

（赤峰學(xué)院 化學(xué)系，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

綜述了蒙藏藥的概況及色譜分析法在蒙藏研究中的應(yīng)用，并通過(guò)色譜分析法在蒙藏藥鑒別中的應(yīng)用現(xiàn)狀，高效液相色譜法在蒙藏藥定量分析中和薄層色譜法在蒙藏藥定性分析中及氣相色譜法和聯(lián)用技術(shù)在蒙藏藥研究的應(yīng)用現(xiàn)狀，指出色譜分析法和聯(lián)用技術(shù)在蒙藏藥研究中的不足和改進(jìn)方法.

色譜分析法;蒙藏藥;應(yīng)用進(jìn)展

在蒙藏藥的研究中，色譜法以其分離效能高，分析速度快和適用范圍廣，靈敏度高等特點(diǎn)，使其迅速成為藥物定性定量分析中必不可少的手段，尤其對(duì)多組分中蒙藏藥定性定量分析更具有它獨(dú)到之處.為了更好的研究蒙藏藥，使其在臨床治療上發(fā)揮更大的作用，色譜分析法在其鑒別﹑定性﹑定量分析中已經(jīng)取得了很大的成果.其中最重要的液相色譜法，其次是氣相法和薄層法及色譜聯(lián)用技術(shù)，它們都對(duì)蒙藏藥的研究做出了巨大的貢獻(xiàn)，在將來(lái)的研究中將起到更大的作用.

1 色譜分析法的原理及分類(lèi)

色譜分析法：基于混合物各組分在體系中兩相的物理化學(xué)性能差異（如吸附、分配差異等）而進(jìn)行分離和分析的方法.國(guó)際公認(rèn)俄國(guó)M.C.茨維特為色譜法的創(chuàng)始人.色譜法體系中的兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，通常其中一個(gè)相是固定不動(dòng)的，稱(chēng)為固定相；另一相是移動(dòng)的，稱(chēng)為流動(dòng)相.在色譜分析過(guò)程中，物質(zhì)的遷移速度取決于它們與固定相和流動(dòng)相的相對(duì)作用力.溶質(zhì)和兩相的吸引力是分子間的作用力，包括色散力、誘導(dǎo)效應(yīng)、場(chǎng)間效應(yīng)、氫鍵力和路易斯酸堿相互作用.對(duì)于離子，還有離子間的靜電吸引力.被較強(qiáng)吸引在固定相上的溶質(zhì)相對(duì)滯后于較弱地吸引在流動(dòng)相中的溶質(zhì)，隨著移動(dòng)的反復(fù)進(jìn)行與多次分配，使混合物中的各組分得到分離.

色譜分析法根據(jù)流動(dòng)相和固定相的不同分為氣相色譜法和液相色譜法；按吸附劑及其使用形式可分為柱色譜、紙色譜和薄層色譜；按吸附力可分為吸附色譜、離子交換色譜、分配色譜和凝膠滲透色譜；按色譜操作終止的方法可分為展開(kāi)色譜和洗脫色譜；按進(jìn)樣方法可分為區(qū)帶色譜、迎頭色譜和頂替色譜.

2 蒙藏藥的研究概況及特點(diǎn)

2.1 蒙藥的研究概況及特點(diǎn)

蒙醫(yī)學(xué)是蒙古民族豐富的文化遺產(chǎn)之一，具有2000千多年的歷史.據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)，目前較為常用的1342種蒙藥中，常用品種約450種.其中植物藥占313種，動(dòng)物藥占66種，礦物藥48種，其他23種.這些藥物中有些是動(dòng)植物的全體，如方海、扁蕾、香青蘭；有些只是動(dòng)植物體的一部分，如狐肺、草烏葉；也有些是動(dòng)植物分泌或滲出的物質(zhì)，如牛乳、珊瑚、黑云香；有些是經(jīng)過(guò)加工制得的物質(zhì)，如灰鹽(草木灰水浸汁經(jīng)過(guò)濾蒸發(fā)所得結(jié)晶物)，馬奶酒(鮮馬奶經(jīng)過(guò)發(fā)酵而釀成)；礦物藥中有些是天然礦石，如禹糧土(一種含鐵粘土)、青金石等軸晶系或如紅銅炭之類(lèi)的加工品，有的則是諸如龍骨、石燕等動(dòng)物骨化石.

在眾多的蒙藥中有不少種藥材是蒙藥專(zhuān)用品種(即只有蒙醫(yī)習(xí)慣使用的藥物)，在常用蒙藥中約有140種.如：廣棗，蒙醫(yī)用于心悸、心絞痛心臟病.沙棘，蒙醫(yī)用來(lái)止咳去痰，活血化瘀.藍(lán)盆花，蒙醫(yī)用于清肺熱和治療肝熱病.文冠木，蒙醫(yī)用于清熱燥濕，治療風(fēng)濕、痹癥.現(xiàn)代有關(guān)科學(xué)研究都證實(shí)了它們的藥效確切，療效可靠.這此藥物中醫(yī)從來(lái)就不用.還有許多藥材蒙醫(yī)用，中醫(yī)也用，這類(lèi)藥材習(xí)稱(chēng)中蒙藥交叉品種.在常用蒙藥中約有180種.這些藥材雖然中醫(yī)和蒙藥都用，但是由于各自理論體系不同，實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)有別，因此，對(duì)這些藥物的認(rèn)識(shí)和應(yīng)用也就必然有所差異.以訶子為例：訶子，蒙醫(yī)視為眾藥之王，廣泛應(yīng)用.認(rèn)為“訶子具咸外五味”(清·伊希巴拉珠爾《認(rèn)藥白晶藥鑒》)“為治諸病之上品”(清·羅布桑卻配勒《蒙醫(yī)藥選編》)，主治“三邪”諸癥，血癥，黃水癥以及解毒，調(diào)中，補(bǔ)益.因此，臨床各科配方常不可少之.如清?吉格木德丹金扎木蘇的《蒙醫(yī)傳統(tǒng)驗(yàn)方》316方中，含有訶子的藥方占一半多，足見(jiàn)訶子是蒙藥中的最常用品種.而中醫(yī)則一般以其澀腸止瀉，斂肺和咽，在其他方面用得很少.有些蒙藥與中藥雖然來(lái)源于同種植物，但是取用部位不盡相同.如：達(dá)烏里龍膽，蒙藥用其花(小秦艽花)，中藥則用其根作秦艽用，石榴，蒙藥用其果實(shí)或種子，中藥則用果皮.上邊談到的廣棗，蒙藥用它的果實(shí)，中醫(yī)偶有用其樹(shù)皮治燙傷.草烏，中藥僅用它的塊根，蒙藥不但用其塊根，還分別用草烏芽、草烏花.蒙藥品種從總體上有著上述特點(diǎn)外，還具有一定的地域特點(diǎn)，與地理、資源條件相適應(yīng).如廣棗、三七、木香、山柰、姜黃、馬錢(qián)子、胡椒、益智仁、肉桂、沉香等蒙藥材生長(zhǎng)在長(zhǎng)江以南地域，具有熱帶、暖溫帶特點(diǎn)的藥材在蒙藥中占一定的比例，蒙醫(yī)習(xí)稱(chēng)其為南藥，在常用蒙藥中約有110種.人參、北沙參、苦參、甘草、草烏、百合、沙棘、文冠木、多葉棘豆、狼毒、肉蓯蓉等蒙藥材生長(zhǎng)在長(zhǎng)江以北，蒙醫(yī)習(xí)稱(chēng)其為北藥，在常用蒙藥中約有220余種.地理環(huán)境上，如船形烏頭、唐古特烏頭、金腰草、烏奴龍膽、胡黃連、白花龍膽、囊距翠雀花、喜馬拉雅紫茉莉、烈香杜鵑等生長(zhǎng)在青藏高原，且為藏醫(yī)習(xí)用藥材，從《月王藥診》中有其記載，沿用一千余年不衰.隨著《四部醫(yī)典》傳入蒙古地區(qū)，藏藥對(duì)蒙藥的發(fā)展起了一定的促進(jìn)作用，同時(shí)部分藏藥亦被蒙醫(yī)收用，因此，還有許多藥物蒙醫(yī)和藏醫(yī)同樣用，這類(lèi)藥物習(xí)稱(chēng)蒙藏交叉品種.在常用蒙藥中，這類(lèi)藥材約有35種.此外如沙棘、多葉棘豆、硬毛棘豆、香青蘭、蒙古山蘿卜花、黃花黃芩、冷蒿等有著蒙古高原特點(diǎn)的地產(chǎn)藥材以蒙藥的主體.其中甘草、蒙古黃芪、麻黃、肉蓯蓉等又是內(nèi)蒙古的特產(chǎn)，并聞名國(guó)內(nèi)外.這些傳統(tǒng)蒙藥被沿用至今，療效確切而可靠，久用而不衰.[1]

2.2 藏藥的研究概況及特點(diǎn)

藏藥是在廣泛吸收、融合了中醫(yī)藥學(xué)，印度醫(yī)藥學(xué)和大食醫(yī)藥學(xué)等理論的基礎(chǔ)上，通過(guò)長(zhǎng)期實(shí)踐所形成的獨(dú)特的醫(yī)藥體系，迄今已有上千年的歷史，是我國(guó)較為完整、較有影響的民族藥之一.《月王藥診》是較早的一部藏藥史籍，收載的藥物包括植物類(lèi)440種、動(dòng)物類(lèi)260種、礦物類(lèi)80種，其中300多種藥物為青藏高原特產(chǎn)，多數(shù)藥物沿用至今，如螃蟹甲、傘?；⒍荨⒍?、囊距翠雀、船形烏頭、喜馬拉雅紫茉莉、纖毛婆婆納、水柏枝、翼首草、毛瓣綠絨蒿、藍(lán)石草、烏奴龍膽、山莨菪、樟牙菜、青稞、熊膽、牦牛酥油和糌粑等.《晶珠本草》是收載藏藥最多的一部大典，涉獵廣泛，有著濃郁的藏民族特色，被譽(yù)為藏族的《本草綱目》，該書(shū)收載的藥物種類(lèi)有75%為現(xiàn)今所用，其中30%屬藏醫(yī)專(zhuān)用，據(jù)統(tǒng)計(jì)，涉及1200個(gè)基原動(dòng)、植物種.

現(xiàn)代藏藥應(yīng)用的地域，除西藏自治區(qū)以外，還包括青海、四川、云南和甘肅等省所屬的一些藏族自治州和自治縣.青藏高原是藏藥的主要產(chǎn)地，據(jù)有關(guān)單位的調(diào)查，藏藥資源有2436種，其中植物類(lèi)2172種、動(dòng)物類(lèi)214種、礦物類(lèi)50種.青海占據(jù)著青藏高原的北部和東部地區(qū)的廣大地區(qū)，據(jù)調(diào)查，省內(nèi)有藥用資源1294種，其中植物類(lèi)1087種、動(dòng)物類(lèi)150種、礦物類(lèi)57種.全省常用的幾百種藏藥中有70%采自青藏高原，據(jù)四川阿壩藏族自治州調(diào)查，全州有藏藥資源1000多種；甘孜州1127種中藥資源中有23%為藏醫(yī)所用.常用藏藥中，含生物堿的種類(lèi)約占50%，這些活性較強(qiáng)的成分多見(jiàn)于烏頭屬、翠雀屬、唐松草屬、莨菪屬、槐屬、龍膽屬和小檗屬等藥用植物.例如，大黃是一味重要的藏藥，青藏高原分布大黃屬植物28種，其中藏藥應(yīng)用的有21種，藏藥用大黃分為上、中、下三品：上品（君母札）的種除掌葉大黃、唐古特大黃之外，尚有藏邊大黃、喜馬拉雅大黃、塔黃，西藏大黃等，青海、甘肅等地還用波葉大黃；中品（曲什札）有穗花大黃、歧穗大黃、長(zhǎng)穗大黃、網(wǎng)脈大黃、心葉大黃、紅脈大黃、卵葉大黃；下品（曲瑪札）有小大黃.[2]

3 色譜分析法在蒙藏研究中的應(yīng)用

3.1 高效液相色譜法（HPLC）在蒙藏藥研究中的應(yīng)用

同其他色譜過(guò)程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過(guò)程.它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離.當(dāng)不同組分在色譜柱中運(yùn)動(dòng)時(shí)，譜帶隨柱長(zhǎng)展寬，分離情況與兩相之間的擴(kuò)散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動(dòng)相的流速等有關(guān).所以分離最終效果則是熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)兩方面的綜合效益.

HPLC可以對(duì)樣品的采集時(shí)間、產(chǎn)地、加工方法、工藝流程等多方面等通過(guò)化學(xué)成分的差異來(lái)反映藥材的種屬差異、真?zhèn)舞b別、批次差異等等，從而達(dá)到控制蒙藏藥質(zhì)量的目的.隨著人們的不斷研究和探索，HPLC法已被廣泛應(yīng)用于蒙藏藥及其制劑中黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)、酚類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、苷類(lèi)、酯類(lèi)等有效成分的分離與定量測(cè)定中，并在指紋圖譜的研究中也得到廣泛的應(yīng)用.羅米娜[3]等在藏藥獨(dú)一味中槲皮素、木犀草素和芹菜素的HPLC測(cè)定中，其色譜柱采用C18柱，流動(dòng)相：甲醇-水(含1mmol·L十六烷基三甲基溴化銨)（61：39），用磷酸pH3.5；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)370nm；進(jìn)樣量:20μL.槲皮素、木犀草素和芹菜素分別在0.244～62.5mg/L，0.244～1.00*10-3mg/L，0.976～250mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，精密度（RSD）分別為0.70%、2.7%、4.2%.許良[4]等采用RP-HPLC測(cè)定蒙藥哈日嘎布日-1O丸中胡椒堿的含量，其色譜條件為Nova-pakC18(4μm，39mm*150mm)柱，流動(dòng)相：甲醇-水(74:26)；流速：0.8mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：343nm；柱溫25℃.在該色譜條件下，胡椒堿與相鄰雜質(zhì)峰的分離度大.在0.24—1.2μg/l范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，精密度和準(zhǔn)確度良好.吉守祥[5]等在TLC與RP—HPLC法測(cè)定金訶降脂膠囊中大黃酚含量中其色譜條件為 WatersCl8(4.69*150mm)色譜柱；甲醇-0.1%磷酸(85:15)為流動(dòng)相；流速為lmL／min；進(jìn)樣量為10μL;檢測(cè)波長(zhǎng)為430nm.在上述條件下理論塔板數(shù)按大黃酚峰計(jì)算不低于1800，大黃酚在0.01～0.1lmg之間線性關(guān)系良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠.陳璐[6]等在RP-HPLC測(cè)定藏藥柳茶中阿魏酸和異阿魏酸的含量中其色譜條件為色譜柱為島津ODS柱；流動(dòng)相為0.1%磷酸水溶液-甲醇(71:29)；流速1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)322nm；柱溫30℃.通過(guò)線性回歸方程得阿魏酸在2.31～36.96μg·ml-1,異阿魏酸在8.09～129.44μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.而在精密度試驗(yàn)中阿魏酸峰面積的RSD=0.93%，異阿魏酸峰面積的RSD=0.73%，表明精密度良好.孫菁[7]等在HPLC法測(cè)定野生與栽培藏藥麻花艽中4種環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分的含量中采用：C8色譜柱柱；流動(dòng)相：A為95%乙腈水溶液，B為5%乙腈(含10mmol/L的甲酸)水溶液，A在0～20min內(nèi)，比例由0%到100%進(jìn)行線性洗脫.流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)240nm，進(jìn)樣10μL，柱溫30℃.4種苷類(lèi)成分線性關(guān)系如下：龍膽苦苷為0.60-19.20μg;落干酸為0.26-7.68μg；獐牙菜苦苷為0.38-12.02μg；獐牙菜苷為0.06-1.66μg.測(cè)得龍膽苦苷、落干酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷精密度（RSD）分別為1.0%，1.6%，1.9%，2.2%.李景清等[8]在RP-HPLC法測(cè)定蒙藥吉祥安坤丸中木香烴內(nèi)酯的含量中其色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)為色譜柱：Hyper-silCl8柱 (250mm*4.6mm，粒度5μm)；流動(dòng)相：甲醇一乙腈一水(55:5:40)，流速:1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)225nm，所有組分在55min內(nèi)出完，柱溫為室溫，進(jìn)樣量10μL，理論板數(shù)按木香烴內(nèi)酯峰計(jì)算不低于12000.木香烴內(nèi)酯在0.09～1.33μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系.重復(fù)進(jìn)樣5次峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD)為0.8%，結(jié)果表明，本法精密度良好.高詠莉[9]等在藏藥螃蟹甲HPLC指紋圖譜研究中其色譜條件為色譜柱：Hypersil ODS (150*4.6mm，5μm)；柱溫:25℃；檢測(cè)波長(zhǎng):240nm；流速: 1mL／min；流動(dòng)相：乙腈-水，梯度洗脫.通過(guò)與對(duì)照品色譜比較，對(duì)指紋圖譜中部分色譜峰進(jìn)行了指認(rèn)，在共有峰確定取螃蟹甲藥材 (共10個(gè)批次)分別按以上色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖得到具有14個(gè)共有峰的指紋圖譜.

3.2 氣相色譜法（GC）在蒙藏藥研究中的應(yīng)用

氣相色譜法（GC）是以氣體作為流動(dòng)相的色譜法，屬于柱色譜的一種.氣相色譜法的分離原理是利用要分離的諸組分在流動(dòng)相（載氣）和固定相兩相間的分配有差異（即有不同的分配系數(shù)），當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，這些組分在兩相間的分配反復(fù)進(jìn)行，從幾千次到數(shù)百萬(wàn)次，即使組分的分配系數(shù)只有微小的差異，隨著流動(dòng)相的移動(dòng)可以有明顯的差距，最后使這些組分得到分離.

氣相色譜多用高沸點(diǎn)的有機(jī)化合物涂漬在惰性載體上作為固定相，一般只要在450℃以下有1.5KPa-10KPa的蒸汽壓且熱穩(wěn)定性好的有機(jī)及無(wú)機(jī)化合物都可用氣相色譜分離.氣相色譜法根據(jù)所使用的色譜柱粗細(xì)不同，可分為一般填充柱和毛細(xì)管柱兩類(lèi).一般填充柱是將固定相裝在一根玻璃或金屬的管中，管內(nèi)徑為2～6mm.毛細(xì)管柱則又可分為空心毛細(xì)管柱和填充毛細(xì)管柱兩種.空心毛細(xì)管柱是將固定液直接涂在內(nèi)徑只有0.1～0.5mm的玻璃或金屬毛細(xì)管的內(nèi)壁上，填充毛細(xì)管柱是近幾年才發(fā)展起來(lái)的，它是將某些多孔性固體顆粒裝入厚壁玻璃管中，然后加熱拉制成毛細(xì)管，一般內(nèi)徑為0.25～0.5mm.

氣相色譜法在蒙藏藥中主要成分的定量測(cè)定中是一種不可缺少的方法.如王哲民[10]等在用氣相色譜法測(cè)定藏藥?kù)o心膠囊中丁香酚的含量中，以正己烷為溶媒，桂皮醛為內(nèi)標(biāo)，測(cè)定同批樣品，結(jié)果該法取較為完全且分離效果好.在線性關(guān)系的考察中得到，丁香酚在0.1289～0.6443μg之間線性關(guān)系良好;在精密度試驗(yàn)中以對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)峰面積積分值之比計(jì)算RSD=0.8194%，結(jié)果表明該方法的精密度良好；在重復(fù)性試驗(yàn)中分別精密稱(chēng)取同一批號(hào)樣品，按含量測(cè)定方法平行操作5份，測(cè)得丁香酚RSD=1.0406%.結(jié)果表明，方法的重現(xiàn)性良好.張志蘭[11]等在氣相色譜法測(cè)定蒙藥白豆落中按油精的含量中以聚乙二醇 (PEG)一20M和硅酮(OV-17)為固定相，涂布濃度分別為10%和1.5%；涂布后的載體以7:3的比例(重量比)裝人同一柱內(nèi)(PEG進(jìn)樣口端);柱溫100℃，理論板數(shù)按油精計(jì)算，應(yīng)不低于2500.結(jié)果中表明在1.02μg-6.13μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好；在精密度試驗(yàn)中，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積值的RSD值為1.18%，具有良好的精密度；在重復(fù)性試驗(yàn)中測(cè)得按油精峰面積的RSD為1.11%，說(shuō)明供試品溶液在12小時(shí)內(nèi)是穩(wěn)定的.李維衛(wèi)[12]等在藏藥牛尾蒿油滴丸含量測(cè)定中用該方法測(cè)定主要有效成分β一蒎烯的含量中色譜條件為：色譜柱為填充柱(3m*3mm)，以二乙二醇丁酸酯為固定相,涂布濃度為8%，柱溫為120℃;樣口溫度:180℃，檢測(cè)器溫度:150℃，載氣流速: 10mL/min，進(jìn)樣量1μL.在線性關(guān)系考察中β一蒎烯濃度在0.2163—3.460mg/mL之間線性良好；在精密度試驗(yàn)中以外標(biāo)法分別計(jì)算5份樣品的含量，結(jié)果β一蒎烯含量的RSD為0.86%，表明精密度良好；在樣品含量測(cè)定中測(cè)定10批樣品中β一蒎烯的含量，每批平行測(cè)定2次，結(jié)果10批樣品中β一蒎烯含量在35.7～39.7mg之間.

3.3 薄層色譜法在蒙藏藥研究中的應(yīng)用

薄層色譜法(TLC)又稱(chēng)薄層層析，屬于固－液吸附色譜.是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種微量、快速而簡(jiǎn)單的色譜法，以涂布在玻璃板上的硅膠或氧化鋁等極性物質(zhì)為固定相，極性較小的一種或多種有機(jī)溶劑的混合溶液為流動(dòng)相（展開(kāi)劑），通過(guò)被分析物質(zhì)在兩相間吸附能力的不同而實(shí)現(xiàn)分離的一種分離分析方法.薄層色譜的快速、簡(jiǎn)便與實(shí)效性，廣泛應(yīng)用于藥物定性鑒別和成分定量分析等方面.特別是薄層掃面儀的使用，使薄層色譜法的靈敏度和準(zhǔn)確度大大提高，在蒙藏藥的定量分析研究中發(fā)揮了更大的作用.

3.3.1 薄層色譜法在蒙藏藥定量分析中的應(yīng)用

王順利[13]等在薄層掃描法測(cè)定蒙藥克感額日敦片中土木香內(nèi)酯的含量中采用硅膠G板，展開(kāi)劑為石油醚一苯(15: 3),顯色劑為10%硫酸-乙醇溶液；掃描條件為雙波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描，測(cè)定波長(zhǎng)580nm，參比波長(zhǎng)410nm，在標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和精密度試驗(yàn)均得到良好的結(jié)果.陳玉花[14]等采用薄層掃描法測(cè)定了蒙藥特木仁一5中梔子苷的含量，供試品溶液的制備中采用微波萃取梔子苷方法簡(jiǎn)便、快速、提取完全，含有梔子的蒙成藥很多，而且不同產(chǎn)地及不同品種的梔子中所含的梔子苷含量也不同，該方法能夠很好的進(jìn)行質(zhì)量控制.歐陽(yáng)飆[15]等采用雙波長(zhǎng)薄層掃描法測(cè)定了藏藥小檗皮及晶珠糖尿腎康膠囊中鹽酸小檗堿的含量，藥材經(jīng)提取濃縮后.層析條件:硅膠G高效薄層板，展開(kāi)劑：正丁醇-冰醋酸-水(7：1：2)，展距約10cm，紫外燈365nm下觀察，在Rf=0.40處，樣品、藥材小檗皮在對(duì)照品鹽酸小檗堿相應(yīng)位置上，有一亮黃色熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)此斑點(diǎn).雙波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)區(qū)的三批藥材含量差別也不大且具有良好的精密度和線性關(guān)系.

3.3.2 薄層色譜法在蒙藏藥定性分析中的應(yīng)用

銀金蘭[16]等在蒙藥參竹精片中何首烏(制)的定性鑒別中采用薄層法，主要選擇蒽醌類(lèi)成分為鑒別依據(jù)，結(jié)果以氯仿-丙酮(10:1)和環(huán)己烷-醋酸乙酯(5:3)作為展開(kāi)系統(tǒng)均可見(jiàn)兩個(gè)橙黃色熒光斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾，取得良好的結(jié)果.而在廣棗的定性薄層鑒別中，采用硅膠G薄層板，以甲苯-丙酮-甲酸(7：3：0.5)為展開(kāi)劑，在紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中在與對(duì)照品藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)，而陰性樣品在相應(yīng)位置上無(wú)干擾.畢力格[17]等在蒙藥三臣丸中牛黃的薄層鑒別中采用硅膠G薄層板，以異辛烷-乙酸乙酯-乙酸(15：7：5)為展開(kāi)劑展開(kāi)，噴10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘約5min，置紫外燈(365nm)下檢視，在同一Rf值處膽酸對(duì)照液﹑供試品溶液和陽(yáng)性對(duì)照液均有一藍(lán)紫色熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照液無(wú)熒光斑點(diǎn).結(jié)果表明各薄層斑點(diǎn)不受樣品其它成分的干擾，專(zhuān)屬性強(qiáng)，斑點(diǎn)重現(xiàn)性好，結(jié)果穩(wěn)定可靠.

3.4 聯(lián)用技術(shù)在蒙藏藥研究中的應(yīng)用

色譜分離模式多種多樣，適用范圍廣，是解決復(fù)雜體系中混合物分離分析的高效手段.但色譜對(duì)化合物的定性常常借助于標(biāo)志物的對(duì)照才能進(jìn)行保留值的定性和定量，因此色譜和各種光譜手段的聯(lián)用技術(shù)一直是當(dāng)代分析工作者所追求的目標(biāo).色譜聯(lián)用技術(shù)綜合了成分分析的色譜和結(jié)構(gòu)鑒定的光譜手段的優(yōu)點(diǎn)，使得對(duì)化學(xué)成分混合物的研究能力大為增強(qiáng)，對(duì)于不純化合物的鑒定可以很容易利用高效色譜分離后進(jìn)行定性，提高鑒定的可靠性.而對(duì)于混合物體系則可以充分利用色譜高效分離能力和光譜手段的定性能力進(jìn)行混合物定性及定量研究，完成以前所不能解決的問(wèn)題.現(xiàn)代化的色譜聯(lián)用技術(shù)有色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、色譜-紅外光譜聯(lián)用、色譜-原子光譜聯(lián)用、色譜-色譜聯(lián)用等技術(shù)，配備有豐富的譜圖庫(kù)和微處理機(jī).色譜柱流出的組分直接送入質(zhì)譜和光譜儀進(jìn)行定性鑒定和數(shù)據(jù)的定量處理.如吳海峰[18]等在3種綠絨蒿揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析，經(jīng)GC-MS技術(shù)結(jié)合計(jì)算機(jī)檢索對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分離和鑒定，用色譜峰面積歸一化法計(jì)算各組峰的相對(duì)含量.結(jié)果從全緣葉綠絨蒿、五脈綠絨蒿和多刺綠絨蒿的揮發(fā)油中分別鑒定了25，42和53個(gè)化合物，占其各自總量的80.76%， 73.34%和76.10%.實(shí)現(xiàn)了對(duì)不同成分定性定量同時(shí)分析.杜然[19]等在藏藥沙棘超臨界CO2萃取揮發(fā)性組分的GC—MS分析中采用超臨界CO2萃取法從沙棘中提取揮發(fā)油，氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分析，并用歸一化法確定各化學(xué)成分的相對(duì)百分含量.李維衛(wèi)[20]等在藏藥胡蘆巴種籽油脂類(lèi)成分的GC—MS分析中采用GC-MS法對(duì)青海產(chǎn)的葫蘆巴油脂類(lèi)化學(xué)成分進(jìn)行了分析，并以面積歸一法測(cè)其質(zhì)量分?jǐn)?shù).共鑒定出41種化學(xué)成分，其中34種為該植物種籽中首次得到.

4 小結(jié)與討論

4.1 色譜分析法

在蒙藏藥的研究中，色譜法以其分離效能高，分析速度快和適用范圍廣，靈敏度高等特點(diǎn)，使其迅速成為藥物定性定量分析中必不可少的手段，尤其對(duì)多組分中蒙藏藥定性定量分析更具有它獨(dú)到之處.目前高效液相色譜已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物堿、皂苷、黃酮、蒽醌、香豆素等各種有效成分的測(cè)定.近年來(lái)對(duì)高效液相色譜法的研究不斷向著縮短分析時(shí)間、提高分離效率和進(jìn)一步向自動(dòng)化、智能化及聯(lián)用技術(shù)方向上發(fā)展，使這項(xiàng)技術(shù)日臻完善.薄層色譜因其設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、適用性廣，可以快速給出可靠、準(zhǔn)確的結(jié)果等特點(diǎn)，一直被很多分析工作者所關(guān)注，并被用于許多領(lǐng)域.隨著新的固定相和高速發(fā)展的儀器技術(shù)的引入，薄層色譜已成為一種靈敏、高效的分離與分析方法.今后，薄層色譜法仍將是可供選擇的經(jīng)濟(jì)、可靠、快速的重要分析方法之一，并會(huì)有更加廣闊的應(yīng)用前景.氣相色譜法是以氣體為流動(dòng)相柱的色譜法，由于氣體的粘度小，組分?jǐn)U散快速率高，傳質(zhì)快，可供選擇的固定液種類(lèi)比較多，使得氣相色譜法具有選擇性好、柱效高、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn).但在氣相色譜法定量分析，當(dāng)采用手工進(jìn)樣時(shí)，由于留針時(shí)間和室溫等對(duì)進(jìn)樣量的影響，使進(jìn)樣量不易精確控制，故最好采用內(nèi)標(biāo)法定量；而采用自動(dòng)進(jìn)樣器時(shí)，由于進(jìn)樣重復(fù)性的提高，在保證進(jìn)樣誤差的前提下，也可采用外標(biāo)法定量.當(dāng)采用頂空進(jìn)樣技術(shù)時(shí)，由于供試品和對(duì)照品處于不完全相同的基質(zhì)中，故可采用標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法以消除基質(zhì)效應(yīng)的影響；當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法與其他定量方法結(jié)果不一致時(shí)，應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果為準(zhǔn).色質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，是高分離度的色譜技術(shù)和高靈敏度及專(zhuān)一性的質(zhì)譜的有機(jī)結(jié)合.色譜優(yōu)越的分離能力，可以將復(fù)雜體系中的物質(zhì)進(jìn)行分離，使得色譜分離出的組分不需要收集，濃縮，就可以直接分析，大大縮短了分析的時(shí)間.GC-MS，LC-MS/MS在藥物研究，代謝產(chǎn)物的分析，藥代動(dòng)力學(xué)研究，天然產(chǎn)物分析，疾病診斷，代謝學(xué)研究，食品、環(huán)境中有害物質(zhì)分析中都可發(fā)揮巨大作用.

4.2 色譜法在蒙藏藥研究中應(yīng)用的前景與展望

隨著蒙藏藥的廣泛應(yīng)用，人們對(duì)它的研究也越來(lái)越重視，越來(lái)越多的人用不同的方法對(duì)其研究，其中色譜分析法是十分有效的一種.蒙藏藥研究的大趨勢(shì)是全成分分析，通過(guò)對(duì)從單味藥到復(fù)方的不同配伍、煎煮時(shí)間等的研究,，才能發(fā)現(xiàn)蒙藏藥中化學(xué)成分的變化規(guī)律，找到中藥機(jī)理之間的有機(jī)聯(lián)系.蒙藏藥成分繁多，且各種成分的性質(zhì)遍布所有極性段、酸堿范圍.實(shí)現(xiàn)多成分分析的最簡(jiǎn)單途徑即在一根足夠長(zhǎng)的色譜柱上，采用溫和的流動(dòng)相，在足夠久的時(shí)間內(nèi)洗脫.但這與現(xiàn)代分析要求的簡(jiǎn)便快速相違.通過(guò)大量的應(yīng)用研究表明,高效毛細(xì)管電泳在分析中藥成分，尤其在分析高極性化學(xué)成分方面有較大優(yōu)勢(shì)，在分析大量的復(fù)方制劑方面顯示了較高的能力.由于毛細(xì)管幾乎不會(huì)出現(xiàn)高效液相色譜分析中常出現(xiàn)的柱床污染現(xiàn)象，而且用過(guò)的毛細(xì)管柱只需很短的時(shí)間進(jìn)行沖洗后，即可以進(jìn)行第二個(gè)樣品的分析，快速高效且分辨率很高.新興的毛細(xì)管電色譜是集高效液相色譜和毛細(xì)管電泳優(yōu)勢(shì)于一身的一種新型電分離微柱液相色譜技術(shù)，它是將高效液相色譜的多種填料微粒移到毛細(xì)管中，以樣品與固定相間的相互作用作為分離機(jī)制，以電滲流為流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)力的色譜過(guò)程.再通過(guò)與質(zhì)譜聯(lián)用、梯度洗脫、柱切換技術(shù)、配合先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)，以及與分子生物學(xué)、現(xiàn)代分子藥理學(xué)相結(jié)合，必將在蒙藏藥分析中發(fā)揮重大作用.

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R29

A

1673-260X（2010）09-0158-05

內(nèi)蒙古自治區(qū)高等學(xué)校自然科學(xué)研究項(xiàng)目基金(No.NJ10239)資助