肖若媚 趙偉國 李運(yùn)景

RP-HPLC法測(cè)定痛經(jīng)康口服液中延胡索乙素的含量

肖若媚 趙偉國 李運(yùn)景

目的建立痛經(jīng)康口服液中延胡索乙素的含量測(cè)定方法。方法采用反相高效液相色譜法。色譜柱:C18柱(250×4.6，5 μm)，甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH值至6.0)(60∶40);流速為0.8 ml/min;檢測(cè)波長280 nm;柱溫為室溫29℃;結(jié)果 延胡索乙素進(jìn)樣量在0.026～1.040 mg內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9998，平均回收率為99.18%，RSD=1.08%(n=9)。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于痛經(jīng)康口服液的質(zhì)量控制。

痛經(jīng)康口服液、延胡索乙素、高效液相色譜法

痛經(jīng)康口服液由元胡、當(dāng)歸、川芎、香附等13味中藥組成的純中藥復(fù)方制劑，來源于臨床經(jīng)驗(yàn)方，是人民醫(yī)院制劑室開發(fā)的新的中藥復(fù)方制劑，具有理氣活血、通絡(luò)止痛的功效，主要用于治療各種原因引起的痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)等病癥。本制劑中元胡，具有活血、理氣、止痛的功用為主要藥物，而元胡中延胡索乙素為該藥的主要藥效成分，具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用。本研究擬應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)痛經(jīng)康口服液中延胡索乙素含量進(jìn)行測(cè)定，并以此作為痛經(jīng)康口服液的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

1 儀器與材料

1.1 儀器 安捷倫1200高效液相色譜儀(包括G1311A在線真空脫氣裝置，G1322四元泵，G1314B二極管陣列檢測(cè)器，G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器，安捷倫化學(xué)色譜工作站)(美國安捷倫科技有限公司)，電子分析天平(日本島津AUW220D)。

1.2 供試品與試劑 延胡索乙素對(duì)照品(中國生物制品鑒定所批號(hào):110726-200610)，痛經(jīng)康口服液(中山市人民醫(yī)院制劑科自制)，色譜甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司批號(hào):20090310)，水為蒸餾水，氯仿等其他試劑分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(250×4.6×5 μm);流動(dòng)相:甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH值至 6.0)(60∶40);流速為0.8 ml/min;檢測(cè)波長280 nm［1］;柱溫為室溫29℃;理論板數(shù)3000，分離度大于1.5。

2.2 對(duì)照溶液制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥過夜至恒重的延胡索乙素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含52 ug的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取本品10 ml，加氨試液調(diào)pH值至10置分液漏斗中，用氯仿萃取三次(20 ml，20 ml，15 ml)，合并氯仿液，用水20 ml洗滌1次，氯仿液揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?0 ml量瓶中，作為供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取缺延胡索藥材的陰性制劑10.0 ml，同“2.3”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.5 專屬性試驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果供試品溶液在與延胡索乙素對(duì)照品相同保留時(shí)間處出現(xiàn)色譜峰，而陰性對(duì)照液在與延胡索乙素相同保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照無干擾。HPLC圖譜見圖1。

圖1

2.6 線性關(guān)系考察 分別吸取上述對(duì)照品溶液0.5，1.0，2.5，5.0，10.0，20.0 ul，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y=1455X-8.0574(R2=0.9998，n=6)。表明延胡索乙素進(jìn)樣量在0.026 mg～1.040 mg之間與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為20100625的樣品6份，分別按含量測(cè)定方法平行操作、測(cè)定，平均含量為0.031 mg/ml，RSD=0.6%，表明方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h各進(jìn)樣1次，測(cè)定延胡索乙素的峰面積。結(jié)果RSD=1.8%，表明延胡索乙素在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 加樣回收試驗(yàn) 精密吸取1 ml已知含量(0.031 mg/ml)的同一供試品溶液(批號(hào):20100625)9份，分成3組，每組各分別精密加入延胡索乙素對(duì)照品溶液0.6，0.8，1.0 ml，按供試品方法提取、測(cè)定含量，計(jì)算加入量的回收率，結(jié)果見表1。

表1

2.10 樣品含量的測(cè)定 取本品3批(批號(hào):20100625、20100628、20100629)，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。在上述色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算延胡索乙素的含量，結(jié)果3批含量分別為，0.031 mg/ml，0.030 mg/ml，0.0294 mg/ml。

3 討論

3.1 提取方法的選擇 本研究供試品為口服溶液，并且延胡索乙素為叔胺類生物堿，極易溶于氯仿與乙醚［2］，因此擬選擇先用氨試液堿化溶液，延胡索乙素游離，然后用氯仿進(jìn)行萃取的方法。經(jīng)薄層色譜檢驗(yàn)證實(shí)，氯仿萃取后的溶液，延胡索乙素呈陰性，表明方法可行。

3.2 色譜條件選擇 本研究參考2010版藥典色譜條件選擇流動(dòng)相，并根據(jù)實(shí)際情況予以確定，流動(dòng)相:甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH值至6.0)(60:40)(藥典為55:45［1］，但與相關(guān)研究相同［2，3］);流速為 0.8 ml/min;檢測(cè)波長 280 nm;柱溫為室溫29℃。結(jié)果測(cè)得分離度高，峰型良好，保留時(shí)間適中。

［1］中華人民共和國藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典.2010版第一部.中國醫(yī)藥科技出版社，2010，130.

［2］潘云雪，諸葛隴，張芳芳.RP-HPLC測(cè)定骨健口服液中延胡索乙素的含量.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2009，26(5):400-402.

［3］張明輝，藺寧利，邵忙收.HPLC法測(cè)定胃安寧片中延胡索乙素含量研究.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，33(1):61-62.

Determination of Tetrahydropalmatine in Tongjingkang Oral Liquid by RP-HPLC

XIAO Ruo-mei，ZHAO Wei-guo，LI Yun-jing.Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangdong 528400，China

Objective To determine tetrahydropalmatine content in Tongjingkang Oral Liquid by RPHPLC.MethodsThe chromatographic column of Agilent technologies C18(250 mm ×4.6 mm，5μm)was used with the mobile phase consisted of the mobile phase consisted of 0.1%H3PO4(pH adjusted to 6.0 by triethylamine)-nethanol(40∶60)，the flow rate was 0.8 ml/min，the detective wavelength was set at 280nm and column temperature was 29℃.ResultsThe linear relation of tetrahydropalmatine was excellent within the range of 0.026 ～1.040 mg(r=0.9998，n=6)，and the mean recovery was 99.18%with RSD=1.08%(n=9).ConclusionThe method is simple，accurate，fast，stable and reliable，which can be used to determine quality conerol in Tongjingkang Oral Liquid.

Tongjingkang Oral Liquid;Tetrahydropalmatine;RP-HPLC

528400中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院

李運(yùn)景 zspylyj@163.com