范曉龍

（山西林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西太原030009）

南方紅豆杉炭疽病是紅豆杉的主要病害之一，由膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides（Penz）Sacc）侵染引起。該病主要為害紅豆杉的葉和嫩梢，葉片尤為嚴(yán)重。為了尋求有效的控制措施，本研究在室內(nèi)進(jìn)行了7種不同的殺菌劑對南方紅豆杉炭疽病分生孢子萌發(fā)和菌絲生長的抑制測定。

1 材料和方法

1.1 供試藥劑

共選用了7種不同的殺菌劑用于化學(xué)防治試驗(yàn)，具體情況如表1所示。

表1 供試藥劑一覽

1.2 供試菌株

菌株來自福建省明溪縣沙溪鎮(zhèn)南方紅豆杉與杉木混交林中紅豆杉炭疽病病葉，對其進(jìn)行常規(guī)組織分離，經(jīng)單孢純化后獲得菌種。在PDA培養(yǎng)基上，于（25±1）℃中培養(yǎng)備用。

1.3 測定方法

1.3.1 分生孢子萌發(fā)測定 將7種殺菌劑分別配成 500，1 000，1 500，2 000 倍液，然后將孢子懸浮液（10×10倍顯微鏡下每視野100個左右孢子）加入7種藥劑的各個濃度中，用滴管滴少許含有孢子懸浮液的藥劑于凹玻片上（在培養(yǎng)皿中保濕），置于25℃的恒溫箱中培養(yǎng)，以無菌水作對照，重復(fù)3次，48 h后檢查分生孢子的萌發(fā)情況，計算抑制率[1]，并進(jìn)行方差分析和多重比較。

1.3.2 菌落生長速度測定 采用含毒介質(zhì)培養(yǎng)法的生長速度法[2-3]。將7種殺菌劑各設(shè)6個濃度梯度，即 500，800，1 000，1 500，2 000，3 000 倍液，以清水作對照。農(nóng)藥按外比法稀釋[4]，即稀釋100倍或100倍以上的，計算稀釋量時不扣除原藥劑所占的1份。分別將各種殺菌劑，用無菌水稀釋成比供試濃度高10倍的母液，將培養(yǎng)基滅菌后，冷卻到50℃左右，在無菌工作臺上，根據(jù)不同濃度處理所需劑量，用移液管將母液移入培養(yǎng)基中，迅速搖勻后倒入培養(yǎng)皿中，制成薄厚均勻的含藥PDA平板。取直徑為6 mm，培養(yǎng)5 d的炭疽菌落的邊緣菌餅，置于PDA平板中央，于28℃的恒溫箱中培養(yǎng)3 d，用十字交叉法測量菌落直徑3次，求平均值，計算相對抑制率[4]，并進(jìn)行方差分析和多重比較。每一藥劑設(shè)3個重復(fù)，并以無菌水作對照。

1.3.3 抑制中濃度（E C50）的計算 為較精確地測定出膠孢炭疽菌對不同殺菌劑的敏感程度，用有效中濃度（即抑制50%病菌菌絲生長量所需的有效濃度）作為殺菌劑的毒力比較指標(biāo)[1]。統(tǒng)計計算時，將相對抑制率轉(zhuǎn)化為幾率值作為因變量（Y），以各處理藥劑濃度的對數(shù)值作為自變量（X），用最小二乘法進(jìn)行直線回歸求出毒力回歸方程[5-9]。由毒力回歸反應(yīng)式，令Y=5（即抑制50%的幾率值），反求X（致死中濃度EC50）。EC50值越小，即濃度越小，說明該藥劑對病原菌的抑制作用越強(qiáng)；反之，抑制作用越差[10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 分生孢子萌發(fā)抑制測定結(jié)果

從表2，3可以看出，各種藥劑對孢子的萌發(fā)均有很高的抑制率。對孢子萌發(fā)抑制最好的是甲基托布津，其次為炭克、多菌靈、退菌特、達(dá)科寧和代森錳鋅，最差的是代森鋅。DMRT方差分析結(jié)果表明，不同藥劑和不同濃度對紅豆杉炭疽菌的分生孢子萌發(fā)抑制率的影響差異顯著。

表2 不同殺菌劑對分生孢子萌發(fā)的影響

續(xù)表2

表3 不同藥劑和濃度對孢子萌發(fā)影響的方差分析

2.2 菌絲生長速度法的測定結(jié)果

生長速度法測定結(jié)果（表4）表明，7種藥劑對紅豆杉炭疽菌菌絲的生長均有抑制作用，但各藥劑間的抑制強(qiáng)度不同，從毒力回歸方程及EC50值可以看出，甲基托布津和炭克的抑制作用最強(qiáng)，EC50值分別為2.29，2.88 mg/L；其次是多菌靈和退菌特，EC50值分別為3.72，4.07 mg/L；達(dá)科寧、代森錳鋅和代森鋅的抑制作用最差，EC50值分別為6.31，8.13，15.49 mg/L。7種藥劑對紅豆杉炭疽菌的毒力大小依次為：甲基托布津＞炭克＞多菌靈＞退菌特＞達(dá)科寧＞代森錳鋅＞代森鋅。

由表5（DMRT方差分析）結(jié)果可知，不同藥劑和不同濃度對紅豆杉炭疽菌菌絲生長的影響差異顯著。

表4 不同殺菌劑對菌絲生長的影響

續(xù)表4

表5 不同藥劑和濃度對菌絲生長影響的方差分析

3 小結(jié)

室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，對孢子萌發(fā)和菌絲生長抑制最好的都是甲基托布津，其次為炭克、多菌靈和退菌特，最差的是代森鋅。根據(jù)此結(jié)果可以篩選出甲基托布津、炭克、多菌靈和退菌特4種殺菌劑用于田間藥效試驗(yàn)。

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