亓昭鵬，卓定洪，周 青

(黃山學院化學系，安徽黃山245041)

松樹皮中原花青素的提取

亓昭鵬，卓定洪，周 青

(黃山學院化學系，安徽黃山245041)

通過參考有關原花青素的提取工藝，對松樹皮中原花青素的提取工藝進行了研究，在單因素實驗和正交實驗的基礎上，得出了最佳提取條件是提取溫度為65℃,乙醇濃度為60%，料液比1:40，提取時間為50min。

松樹皮；原花青素；正交實驗；提取

原花青素是指從植物中分離得到的一類在熱酸條件下能產(chǎn)生花青素的多酚化合物，是黃烷-3,4-二醇和黃烷-3-醇的縮合聚集體，廣泛存在于葡萄、蘋果、山楂的皮、核、梗以及黑荊樹、馬尾松、思茅松、落葉松等植物中。[1-4]近年來研究報道原花青素具有抗氧化作用和清除自由基能力、保護心血管系統(tǒng)的功能、抗輻射作用、皮膚保健及美容作用等，因而相關研究引起了人們的極大興趣。[5]目前國際上關于原花青素的測定還沒有統(tǒng)一的標準方法,一般采用紫外分光光度法、HPLC-MS法、香草醛-鹽酸法、鉬酸銨分光光度法、硫酸高鐵銨分光光度法等。[6]黃山地處丘陵地帶，松樹資源豐富，若松木的深加工技術得到發(fā)展，那么相關研究將對黃山地區(qū)經(jīng)濟的發(fā)展起到推動作用。

1 材料與儀器

1.1 材料

松樹皮；香草醛(AR)，國藥集團化學試劑有限公司；(+)-兒茶素，成都曼斯特生物科技有限公司；甲醇(AR)，宜興市輝煌化學試劑廠；無水乙醇(AR)，中國宿州化學試劑有限公司；濃鹽酸(AR)，中國宿州化學試劑有限公司；其它試劑均為分析純。

1.2 儀器

DF-1010集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（鞏義市予華儀器有限責任公司）；T6-新世紀型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）。

2 實驗原理

2.1 標準溶液的配制

精確配制系列(+)-兒茶素標準溶液：20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100μg/ml。

2.2 工作曲線的繪制

分別用移液管量取5ml不同濃度的(+)-兒茶素標準液，3ml香草醛甲醇溶液、1.5ml濃鹽酸于20ml試管中，加塞搖勻，于30℃水浴中避光反應30min。然后在500nm處測其吸光度，以甲醇溶液代替樣品溶液做空白對照。根據(jù)樣品溶液濃度與吸光度的關系，做標準工作曲線(如圖1）并擬合出回歸方程：

式中：x—標準樣品濃度（μg/ml）

y—吸光度

圖1 兒茶素標準溶液工作曲線

3 實驗方法、結果與討論

3.1 單因素實驗[7-8]

3.1.1 乙醇濃度的選擇

稱取5份質(zhì)量為1.0g研碎的松樹皮，分別加入30%、40%、50%、60%、70%的乙醇各25ml，在60℃的水浴條件下浸提50min，然后測定其吸光度（如圖2）。從圖中可以看出，隨著乙醇濃度的升高，溶液的吸光度逐漸增大，在乙醇濃度為50%時吸光度達到最大值，當溶液的濃度大于50%后吸光度又逐漸變小。這是因為乙醇濃度過大時，會增加脂溶性雜質(zhì)的溶出，對原花青素的提取造成不利的影響。所以，在濃度為50%的時候，原花青素的提取率最高。

圖2 乙醇濃度與吸光度的關系曲線

3.1.2 提取時間的選擇

稱取5份質(zhì)量為1.0g研碎的松樹，每份加入50%的乙醇溶液25ml，在60℃的水浴中分別加熱浸提30min，40min，50min，60min，70min。取樣品測定其吸光度。如圖3可以看出，在30min到40min時候，溶液吸光度變化較小，在40min到50min時，吸光度有較大升高，50min以后，吸光度開始下降，這可能是提取時間過長，溶劑的作用導致原花青素的結構發(fā)生破壞。所以，最佳提取時間為50min。

圖3 提取時間與吸光度的關系曲線

3.1.3 提取溫度的選擇

稱取5份質(zhì)量為1.0g研碎的松樹皮放入燒杯中，每份加入50%的乙醇溶液25ml，分別在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃浸提取50min。取樣品測定其吸光度，如圖4可以看出，吸光度隨溫度的升高整體保持上升趨勢，但是在30℃-60℃吸光度上升較快，60℃以后吸光度上升緩慢，趨近平行，從能耗角度分析，提取溫度在60℃最佳。

圖4 提取溫度與吸光度的關系曲線

3.1.4 料液比的選擇

稱取6份質(zhì)量為1.0g研碎的松樹皮放入燒杯中,分別加入50%的乙醇溶液15ml、20ml、25ml、30ml、35ml、40ml，在60℃的水浴中進提取50min。取樣品測定其吸光度，如圖5可以看出，在料液比為1:15到1:25之間，吸光度有下降趨勢，但很平緩。從1:25開始，吸光度隨料液比的增加而增加，但是整體增加緩慢，此時原花青素已基本全部溶解出，再增加溶劑用量，不但提取率變化不大，還可能給后面的研究帶來不便。因此，料液比為1:30時為最佳。

圖5 料液比與吸光度的關系曲線

3.2 正交試驗

在單因素試驗的基礎上，選取乙醇濃度、提取時間、提取溫度以及料液比為考察因素，以原花青素的提取率為指標，采用L9（34）進行正交試驗，因素水平選取如表1，正交實驗結果及分析見表2，方差分析見表3。

表1 松樹皮原花青素提取工藝正交實驗水平因素表

表2 松樹皮原花青素提取工藝正交試驗結果表

表3 方差分析表

根據(jù)表2及表3分析：方差R溫度＞時間＞濃度＞料液比，F(xiàn)值溫度＞時間＞濃度＞料液比。所以上述條件中，對試驗中提取率影響最大的分別是溫度和時間。

根據(jù)表2得最佳提取工藝是：濃度為60%，溫度65°C，時間50min，料液比1:40。

[1]楊磊,蘇文強,李艷杰,等.正交試驗法優(yōu)選低聚原花青素的提取[J].林產(chǎn)化學與工業(yè),2004,24(2):57-60.

[2]萬本屹,李宏,董海洲.葡萄籽中原花青素提取及其研究進展[J].糧食與油脂,2002,13(2):43-45.

[3]凌智群,張曉輝,謝筆鈞,等.原花青素的藥理學研究進展[J].中國藥理學通報,2002,18(1):9-12.

[4]豐佃娟,徐貴發(fā).葡萄籽提取物抗氧化功能的實驗研究[J].食品與藥品,2007,(11):16-18.

[5]朱振勤,翟萬銀,陳季武,等.葡萄籽原花青素提取物抗氧化作用研究[J].華東師范大學學報(自然科學版),2003,(1):98-103.

[6]申燁華,劉海英,李娜,成小飛,郭紅霞.KMnO4分光光度法測定葡萄籽原花青素[J].分析試驗室,2006,(11):50-53.

[7]李瑞麗,馬潤宇.微波輔助水提葡萄籽原花青素的研究[J].食品研究與開發(fā),2006,(9):10-13.

[8]李瑞麗,馬潤宇.層析法分離提取葡萄籽原花青素的進一步研究[J].化工時刊,2006,(6):3-6.

責任編輯：胡德明

Abstract:By referring to the extraction technique of procyanidins,the extraction technique of procyanidins from pine bark is investigated.Based on single factor and orthogonal experiments,optimum extraction conditions are obtained:extraction temperature at 65°C,ethanol concentration of 60%,solid-liquid ratio of 1:40,and extraction time of 50min.

Key words:pine bark;procyanidins;orthogonal experiment;extraction

Extraction of Procyanidins from Pine Bark

Qi Zhaopeng,Zhuo Dinghong,Zhou Qing
(Department of Chemistry,Huangshan University,Huangshan 245041,China)

TS202.3,R285.5

A

1672-447X(2010)04-0032-03

2010-04-29

亓昭鵬（1979-），山東萊蕪人，黃山學院化學系講師，研究方向為無機化學。