王琤帥，吳韶銘

（浙江省金華市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江 金華 321000）

復(fù)方替硝唑洗劑是浙江省金華市第五醫(yī)院自制婦科炎癥外用制劑，由替硝唑、醋酸氯己定、冰片和其他輔料組方，收載于2005年版《浙江省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》，分別采用分光光度法和雙波長(zhǎng)吸收法測(cè)定含量。筆者參閱相關(guān)文獻(xiàn)[1－3]，建立了能同時(shí)測(cè)定該制劑中替硝唑和醋酸氯己定含量的高效液相色譜（HPLC）法。報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜系統(tǒng)(包括四元梯度泵、紫外檢測(cè)器、Agilent 1100 LC化學(xué)工作站)，Mettler AE240S型電子天平。替硝唑?qū)φ掌罚ㄅ?hào)為100336－200402），醋酸氯己定對(duì)照品（批號(hào)為100183－199902)，均由中國藥品生物制品檢定所提供；復(fù)方替硝唑洗劑（規(guī)格為 250 mL，批號(hào)為 071225，080512，080617，金華市第五醫(yī)院制劑室，甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：島津 VP－ODS柱(150 mm ×4.6 mm，5!m)；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀4 g、三乙胺2.5 mL、庚烷基磺酸鈉1 g，加水至 1 000 mL，用磷酸調(diào) pH 至 2.5)－甲醇(40∶60）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20!L。

2.2 溶液制備

分別精密稱取替硝唑?qū)φ掌?5.2 mg和醋酸氯己定對(duì)照品13.1 mg，置100 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液（每1 mL中分別含替硝唑和醋酸氯己定0.752 mg和0.131 mg）。精密吸取樣品5 mL，置100 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣前用0.45!m濾膜過濾，即得供試品溶液。按處方組成，取除替硝唑和醋酸氯己定以外的群藥，制成空白制劑，再按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：在該色譜條件下，吸取替硝唑?qū)φ掌啡芤?、醋酸氯己定?duì)照品溶液適量，分別進(jìn)樣，以確定兩成分的保留時(shí)間；再分別吸取2.2項(xiàng)下3種溶液，注入液相色譜儀。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間的峰，而陰性對(duì)照品溶液在此保留時(shí)間無干擾，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取混合對(duì)照品溶液 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置 10 mL 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積 A為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度 C（mg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程替硝唑 A=8 454.694 0 C+24.594 6，r=0.999 8(n=6)；醋酸氯己定 A=55 998.512 6 C+16.221 1，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，替硝唑和醋酸氯己定的質(zhì)量濃度分別在 37.6～376!g/mL和 6.55～65.5!g/mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣，結(jié)果替硝唑及醋酸氯己定的峰面積平均值分別為1 291和1 465，RSD 分別為 0.31%和 0.57%(n=6)。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批樣品，依法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣。結(jié)果替硝唑及醋酸氯己定平均含量分別為3.018 1 mg/mL和0.506 0 mg/mL，RSD 分別為 0.43%和 0.49%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，8，12 h 時(shí)依法測(cè)定，結(jié)果替硝唑與醋酸氯己定峰面積的 RSD分別為0.45%和0.54%(n=5)，表明該溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取樣品5 mL，置100 mL量瓶中，共6份，分別精密加入混合對(duì)照品溶液4，5，6 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測(cè)定含量。結(jié)果見表1。

表1 替硝唑和醋酸氯己定加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取不同批號(hào)的供試品3批，按照供試品溶液制備方法處理并測(cè)定。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論

最大吸收波長(zhǎng)替硝唑在310 nm附近，醋酸氯己定在259 nm附近，考慮到處方中替硝唑的量是醋酸氯己定的6倍，而替硝唑在259 nm波長(zhǎng)處的吸收也較強(qiáng)，故測(cè)定波長(zhǎng)選擇260 nm，以使兩成分的峰面積相近。

流動(dòng)相及其pH對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響較大。筆者曾用乙腈－水（35∶65）、甲醇 －水（60∶40）等不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果出峰時(shí)間太快且峰形不好。而選用甲醇－水－三乙胺（60∶40∶0.7）或者乙腈－甲醇－水－三乙胺（20∶50∶30∶0.7）同樣存在出峰時(shí)間過快，且醋酸氯己定峰的對(duì)稱性不佳。最后選擇加離子對(duì)試劑庚烷基磺酸鈉，同時(shí)調(diào)節(jié)pH，庚烷基磺酸鈉與醋酸氯己定形成離子對(duì)，改善了峰形。同時(shí)測(cè)試了加辛烷基磺酸鈉作為離子對(duì)試劑，結(jié)果沒有明顯的差異。故最終選擇文中的色譜條件，可使醋酸氯己定出峰穩(wěn)定，且峰面積及保留時(shí)間適中。

[1]黃寶立，張 華.HPLC法測(cè)定口含片中替硝唑與氯己定的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2000，15（2）：51.

[2]錢 方，黃 偉，王雯潔，等.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方替硝唑漱口液中主藥的含量[J].中國藥房，2003，14（5）：298.

[3]鄭 芳，朱雪松，何 婧.反相高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方替硝唑栓三組分含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，26（11）：1 367.