項(xiàng)貴賢

(邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥劑教研室，河北 邢臺(tái) 054000)

金蕎麥片具有清熱解毒、排膿祛瘀、止咳平喘等功效，原藥品標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定方法為分光光度法[1]，比較煩瑣。該藥現(xiàn)增加了一個(gè)薄膜衣的規(guī)格，為更好地控制藥品質(zhì)量，筆者采用反相高效液相色譜法測(cè)定了金蕎麥中有效成分槲皮素的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-10AVP型高效液相色譜儀，包括單元泵、紫外檢測(cè)器、“浙大”N 2000色譜工作站;AS 3120 B型超聲提取器。槲皮素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100018-200706);金蕎麥片(河北國(guó)金藥業(yè)有限責(zé)任公司);甲醇為色譜純，其他試劑為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果[2]

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-0.4%磷酸(50∶50);流速:1.0 mL/min;柱溫:40℃;檢測(cè)波長(zhǎng):370 nm;進(jìn)樣量:20 μL;理論板數(shù)按槲皮素計(jì)算不低于2 500。

2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)120℃干燥4 h至恒重的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇配制成15 μg/mL的對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下合格的藥物，去除薄膜衣，研細(xì)，精密稱取0.25 g，置250 mL磨口瓶中，加甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)混合液50 mL，加熱回流2 h，取出，放冷，濾過，棄去濾液，濾渣用甲醇分2次洗滌，每次10 mL，濾過，合并濾液，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得供試品溶液。根據(jù)處方比例配制不含槲皮素的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):將制備的陰性對(duì)照品溶液依樣品分析方法稀釋并測(cè)定。結(jié)果在槲皮素對(duì)照品峰的位置上未發(fā)現(xiàn)干擾峰(圖1)，表明其他組分不干擾槲皮素的測(cè)定。

線性關(guān)系考察:按對(duì)照品溶液制備方法制備質(zhì)量濃度為100 μg/mL 的對(duì)照品貯備液，分別精密量取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別進(jìn)樣20 μL，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程 Y=8 104.2 X-973.37，r=1.000(n=5)。結(jié)果表明，槲皮素質(zhì)量濃度在10.0～50.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):取對(duì)照品貯備液20 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積值。結(jié)果的 RSD=0.28%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):分別精密吸取同一份供試品溶液20 μL，在1，2，3，4，5，6，7，8 h 時(shí)測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD=0.35%(n=8)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批供試品溶液5份，測(cè)定峰面積，計(jì)算出樣品含量分別為 0.322，0.318，0.316，0.314，0.320 mg/片，平均0.32 mg/片，RSD=0.99%(n=5)，表明本方法的重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為0804161)樣品共6份，每份約0.12 g，精密稱定，精密加入一定量槲皮素對(duì)照品貯備液，按供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 槲皮素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

精密稱取3批樣品，依法測(cè)定含量。結(jié)果批號(hào)為0804161，0804231，0805061的3批金蕎麥片中槲皮素含量分別為0.30，0.33，0.32 mg/片(n=2)。

3 討論

取對(duì)照品溶液，在190～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，最后選擇槲皮素在此波長(zhǎng)區(qū)域中吸收強(qiáng)度最大且無干擾的370 nm波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。常溫下測(cè)定該產(chǎn)品時(shí)，易產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象，峰的吸收不正常，把柱溫設(shè)為40℃能消除此現(xiàn)象。試驗(yàn)中對(duì)供試品溶液進(jìn)行了多次處理，從而達(dá)到凈化目的。在用甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50)作為流動(dòng)相洗脫時(shí)，所得槲皮素峰形較好，其他成分干擾較少，分離度令人滿意。因此，反相高效液相色譜法具有專屬、可靠、靈敏度高、干擾小等特點(diǎn)，可作為測(cè)定金蕎麥片中槲皮素含量的方法。

[1]WS3-B-3612-98，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第19冊(cè))[S].

[2]何 勇.高效液相色譜法測(cè)定腎石通顆粒中槲皮素的含量[J].安徽醫(yī)藥，2006，10(2):119-120.