金蘭梅,伍清林,金保方,徐世永,馬高民,葛繼文

(1.金陵科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,江蘇南京210038;2.南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院,江蘇 南京210046;3.南京衛(wèi)崗奶業(yè)集團(tuán),江蘇 南京211122)

機(jī)體在生命過(guò)程中產(chǎn)生自由基是體內(nèi)代謝氧化還原網(wǎng)絡(luò)中的重要一環(huán)。甚至衰老也與自由基有關(guān)。自由基一方面參與免疫調(diào)節(jié),以及三磷酸腺苷(ATP)、前列腺素的合成和巨噬細(xì)胞的吞噬作用等,另一方面,也能引起機(jī)體發(fā)生癌癥、誘發(fā)炎癥、病理?yè)p傷及自身免疫病等。在正常情況下,機(jī)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生、利用、清除三者處于動(dòng)態(tài)平衡,而且在很大程度上,自由基直接或間接地發(fā)揮著有益的生物學(xué)效應(yīng)。在病理狀態(tài)下,機(jī)體內(nèi)的自由基產(chǎn)生過(guò)多,清除自由基的能力減弱或二者兼而有之,結(jié)果都造成自由基過(guò)剩,從而導(dǎo)致機(jī)體的脂質(zhì)過(guò)氧化作用,破壞生物膜結(jié)構(gòu)[1]。在乳房炎研究中已觀察到血清和乳清中的脂質(zhì)過(guò)氧化物含量的增加。脂質(zhì)過(guò)氧化物的增加意味著自由基對(duì)機(jī)體的損傷作用增強(qiáng)。造成脂質(zhì)過(guò)氧化物在乳腺組織中的這種堆積是因?yàn)椴≡⑸镌谌橄賰?nèi)通過(guò)直接或間接的途徑破壞了乳腺內(nèi)自由基生成和自由基清除兩大系統(tǒng)的平衡,使自由基在體內(nèi)聚集,攻擊不飽和脂肪酸發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng),生成脂質(zhì)過(guò)氧化物,從而使組織中脂質(zhì)過(guò)氧化物水平明顯升高[2]。所以在獸醫(yī)臨床上,測(cè)定體液或組織中脂質(zhì)過(guò)氧化物的含量,除對(duì)了解某些疾病過(guò)程是否與自由基對(duì)機(jī)體的損傷有關(guān)外,而且對(duì)病情的發(fā)展,治療效果的評(píng)價(jià)均有重要的參考價(jià)值[3]。本試驗(yàn)初步探討了中藥消炎泌乳沖劑對(duì)患隱性乳房炎奶牛外周血中自由基的影響,為了解消炎泌乳沖劑對(duì)隱性乳房炎的作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)牛選擇與試驗(yàn)時(shí)間 從南京某實(shí)驗(yàn)?zāi)翀?chǎng)泌乳牛群中選擇無(wú)乳房炎臨床癥狀且乳汁檢測(cè)體細(xì)胞數(shù)大于50萬(wàn)/mL、CMT(加州乳房炎檢測(cè)法)檢測(cè)陽(yáng)性的奶牛12頭,依據(jù)年齡、胎次相同、泌乳日相似(產(chǎn)犢日期在5 d以內(nèi))、產(chǎn)奶量和泌乳期相近的原則進(jìn)行配對(duì)分組,隨機(jī)分為2組,試驗(yàn)1組用消炎泌乳沖劑治療,100 g/頭?d飲水;試驗(yàn) 2組不用藥。另選擇患臨床乳房炎奶牛16頭作為乳房炎組,依據(jù)上述原則選擇健康奶牛16頭作為健康組。

試驗(yàn)于2009年4月14日至5月5日進(jìn)行,預(yù)試期為7 d,試驗(yàn)期為21 d,12頭奶牛集中于一個(gè)雙列式牛舍中集中統(tǒng)一飼養(yǎng)管理。試驗(yàn)牛在試驗(yàn)期間的飼養(yǎng)管理方式與牧場(chǎng)其他牛群相同。

1.2 藥品與儀器 消炎泌乳沖劑由蒲公英、銀花藤、連翹、路路通、制香附、絲瓜絡(luò)、柴胡、全瓜蔞、通草、甘草、王不留行、當(dāng)歸按比例混合,由金陵科技學(xué)院和南京中醫(yī)藥大學(xué)聯(lián)合研制。

丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)等試劑盒,均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

FOSS型牛奶紅外分析掃描儀(丹麥FOSS公司生產(chǎn),型號(hào)：FOSS MiLk.soan-4000),UV-754型可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海光學(xué)儀器總廠生產(chǎn))。

1.3 樣品的采集、處理 在用藥前和用藥后7、14、21 d分別對(duì)各組試驗(yàn)牛尾根靜脈采血,分離血清,-20℃保存?zhèn)溆谩ＥR床乳房炎奶牛,在發(fā)生癥狀后3 d尾根靜脈采血,同時(shí)根據(jù)分組配對(duì)的原則選擇健康奶牛采血,分離血清,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 測(cè)試項(xiàng)目及測(cè)試方法 丙二醛(MDA)測(cè)定用硫代巴比妥酸法,一氧化氮(NO)測(cè)定用硝酸氧化法,超氧化物歧化酶(SOD)采用黃嘌呤氧化酶法,過(guò)氧化氫酶(CAT)用可見(jiàn)光法,總抗氧化能力(TAOC)測(cè)定用比色法,各測(cè)試項(xiàng)目均按試劑盒說(shuō)明嚴(yán)格操作。

每天電腦記錄每頭牛的產(chǎn)奶量。試驗(yàn)前、后采集乳樣,在南京衛(wèi)崗乳業(yè)有限公司質(zhì)檢中心測(cè)定乳脂、乳蛋白,用丹麥FOSS公司生產(chǎn)的牛奶紅外分析掃描儀測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用ExceL 2003和SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,用S-N-K多重比較和t檢驗(yàn),計(jì)算平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。

2 結(jié)果

2.1 消炎泌乳沖劑對(duì)隱性乳房炎奶牛產(chǎn)奶量及乳質(zhì)量的影響 使用消炎泌乳沖劑治療奶牛隱性乳房炎,在試驗(yàn)前和試驗(yàn)后7、14 d時(shí),試驗(yàn)2組奶牛產(chǎn)奶量比試驗(yàn)前分別降低1.7 kg/頭?d、4.5 kg/頭?d,與試驗(yàn)1組相比分別降低了1.6 kg/頭?d、3.9 kg/頭?d,而試驗(yàn)1組則保持相對(duì)穩(wěn)定。在用藥后第21 d,試驗(yàn)2組與試驗(yàn)1組和試驗(yàn)前比較差異顯著(P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)?zāi)膛．a(chǎn)奶量統(tǒng)計(jì)結(jié)果 (kg/頭)

由表2可知,在試驗(yàn)前后奶牛乳汁中的乳脂率和乳蛋白沒(méi)有顯著性變化(P＞0.05),說(shuō)明消炎泌乳沖劑可以提高產(chǎn)奶量,而不影響乳的質(zhì)量。

表2 奶牛乳汁中乳脂、乳蛋白含量測(cè)定結(jié)果 (%)

2.2 乳房炎奶牛血清中自由基代謝的變化 由表3可看出,乳房炎奶牛血清中MDA高于健康奶牛2.64 nmoL/mL、NO的含量高于健康奶牛 2.39 μmoL/mL(P＜0.05),SOD的活力降低27.72 U/mL、CAT的活力降低 1.52 U/mL、T-AOC降低2.74 U/mL,差異顯著(P＜0.05)。

表3 乳房炎奶牛血清中自由基代謝的變化

2.3 消炎泌乳沖劑對(duì)隱性乳房炎奶牛血清自由基代謝的影響 見(jiàn)表4。

由表4可知,隱性乳房炎奶牛使用消炎泌乳沖劑后MDA的含量下降,用藥后14 d比試驗(yàn)前和試驗(yàn)2組開(kāi)始下降,21 d比試驗(yàn)前和試驗(yàn)2組明顯下降,差異顯著(P＜0.05),而試驗(yàn)2組MDA的含量始終無(wú)明顯變化(P＞0.05)。兩組隱性乳房炎奶牛試驗(yàn)前NO含量無(wú)差異,治療組用藥后7 d NO含量有所下降,但差異不顯著(P＞0.05),隨著時(shí)間的延長(zhǎng),用藥組NO含量顯著降低(P＜0.05)。而試驗(yàn)2組奶牛NO含量無(wú)明顯變化。試驗(yàn)1組用藥后TAOC、SOD開(kāi)始升高,與試驗(yàn)前和試驗(yàn) 2組比較,差異顯著(P＜0.05)。治療組奶牛從用藥后第14天起血清中CAT升高,與試驗(yàn)2組相比差異顯著(P＜0.05)。試驗(yàn)2組奶牛在試驗(yàn)前后無(wú)明顯變化(P＞0.05)。

表4 “消炎泌乳沖劑”對(duì)隱性乳房炎奶牛血清中自由基代謝的影響(n=6)

3 討論與小結(jié)

3.1 乳房炎奶牛血清中自由基代謝的變化 許多試驗(yàn)結(jié)果[4-8]證實(shí),炎癥期致炎因子刺激誘導(dǎo)型NO合酶(iNOS),合成大量的NO,促進(jìn)炎癥反應(yīng)。iNOS的過(guò)度表達(dá)致NO產(chǎn)生過(guò)量時(shí)往往促發(fā)免疫病理過(guò)程而造成組織損傷。NO生成過(guò)多成為許多疾病的重要促進(jìn)因素。T-AOC是機(jī)體頡頏氧自由基的主要體系,制約和清除機(jī)體產(chǎn)生過(guò)多的自由基,保護(hù)細(xì)胞正常功能,維持機(jī)體的正常代謝。SOD是廣泛存在于需氧生物細(xì)胞內(nèi)的一種金屬酶,能催化超氧陰離子自由基(O2?)產(chǎn)生歧化反應(yīng)生成H 2O2,是體內(nèi)O2?的重要清除劑。CAT進(jìn)一步代謝過(guò)氧化氫促使H 2O2分解為分子O2和H 2O,從而使細(xì)胞免于遭受H2O2的毒害。本試驗(yàn)結(jié)果表明,乳房炎奶牛血清中MDA、NO的含量高于健康奶牛(P＜0.05),SOD、CAT的活性、T-AOC低于健康奶牛(P＜0.05),與劉莉莉,李睿文等報(bào)道[9-10]的一致。說(shuō)明活性氧和自由基生成反應(yīng)加劇,參與了乳房炎的發(fā)病過(guò)程。奶牛患乳房炎時(shí)活性氧和自由基生成量增加,同時(shí)體內(nèi)活性氧和自由基清除能力下降,結(jié)果使機(jī)體活性氧和自由基生成與清除之間動(dòng)態(tài)平衡遭到破壞,出現(xiàn)多余的活性氧和自由基,導(dǎo)致體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程加劇,進(jìn)而造成乳腺組織細(xì)胞的病理?yè)p傷。

3.2 消炎泌乳沖劑對(duì)隱性乳房炎奶牛血清中血清自由基代謝的影響 本試驗(yàn)所組復(fù)方制劑具有較強(qiáng)的活血散淤、清熱解毒、涼血等功效,有力地促進(jìn)了組織細(xì)胞的新陳代謝,提高機(jī)體抗病力。試驗(yàn)結(jié)果顯示,隱性乳房炎奶牛使用消炎泌乳沖劑后,MDA、NO的含量下降(P＜0.05);T-AOC、SOD和CAT活性顯著升高(P＜0.05),與對(duì)照組相比均有顯著性差異(P＜0.05),表明消炎泌乳沖劑可以減少自由基致機(jī)體組織細(xì)胞的損傷,能夠提高機(jī)體的總抗氧化能力,增強(qiáng)機(jī)體的免疫力,使得機(jī)體內(nèi)自由基被清除,乳房炎癥狀緩解并消失。

3.3 消炎泌乳沖劑對(duì)隱性乳房炎奶牛產(chǎn)奶量和乳質(zhì)量的影響 消炎泌乳沖劑是根據(jù)奶牛乳房炎中藥治療總的原則擬定中草藥方劑,以清熱解毒、抗菌消炎、消腫止痛、活絡(luò)通乳為主,輔以補(bǔ)益、理氣等藥物,以補(bǔ)氣壯陽(yáng)、扶正祛邪。在增強(qiáng)奶牛抵抗力的同時(shí),加強(qiáng)了奶牛的防御能力,其通絡(luò)下乳的作用也使其產(chǎn)奶量得到顯著提高,通過(guò)本試驗(yàn)得到驗(yàn)證。試驗(yàn)期間和試驗(yàn)后,試驗(yàn)1組奶牛產(chǎn)奶量一直比較穩(wěn)定,在試驗(yàn)后21 d,試驗(yàn)2組奶牛產(chǎn)奶量比試驗(yàn)1組下降了3.9 kg/d,在試驗(yàn)前后奶牛乳汁中的乳脂率和乳蛋白沒(méi)有顯著性變化,說(shuō)明消炎泌乳沖劑不但對(duì)奶牛隱性乳房炎有治療作用,同時(shí)可以提高產(chǎn)奶量,而不影響乳的質(zhì)量。用其治奶牛乳房炎,可以替代了抗生素的應(yīng)用,促進(jìn)了優(yōu)質(zhì)奶的生產(chǎn),提高了奶牛的產(chǎn)奶量。

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