徐倩倩,李繼昌,曲明麗,張耀騰,于曉蕾

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院,黑龍江哈爾濱150030)

米爾貝霉素肟(milbemycin oxime)為大環(huán)內(nèi)酯類抗體內(nèi)外寄生蟲藥物,是米爾貝霉素A3和A4的肟衍生物,主要通過增強(qiáng)蟲體的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸(GABA)的釋放使蟲體麻痹死亡[1-2]。通常用于預(yù)防惡絲蟲病,控制線蟲、鉤蟲引發(fā)的犬、貓疾病及犬的鞭蟲病。米爾貝霉素肟毒性很低,LD50在臨床推薦用量的2 000倍以上[3],但關(guān)于急性毒性研究的詳細(xì)數(shù)據(jù)未見報(bào)道。由于專利限制,從上世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)至今,中國(guó)大陸缺乏研究和應(yīng)用,隨著專利到期,米爾貝霉素肟作為一種新型抗體內(nèi)外寄生蟲藥越來越受到重視,為評(píng)價(jià)其毒副作用,指導(dǎo)臨床合理用藥,本文進(jìn)行了米爾貝霉素肟對(duì)昆明系小鼠的急性毒性試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)昆明系小鼠,體重18～22 g,雌雄各半。由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。動(dòng)物觀察7 d后用于試驗(yàn),飼養(yǎng)環(huán)境為清潔級(jí),自由采食全價(jià)顆粒料,自由飲水。

1.2 受試藥物 米爾貝霉素肟原料藥,淡黃色結(jié)晶性粉末,含量≥98%,4℃避光保存,由浙江海正藥業(yè)股份有限公司提供,臨用時(shí)用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配制成適當(dāng)濃度的混懸液。

1.3 動(dòng)物試驗(yàn)

1.3.1 預(yù)試驗(yàn) 取昆明系小鼠40只,雌雄各半,按序貫法進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)[4],發(fā)現(xiàn)米爾貝霉素肟對(duì)雌性和雄性小鼠毒性不同,LD 0和LD 100分別為300 mg/kg體重和 1 500 mg/kg體重、1 000 mg/kg體重和3 000 mg/kg體重。

1.3.2 正式試驗(yàn) 米爾貝霉素肟在雄性小鼠的半數(shù)致死量(LD50)測(cè)定 取健康昆明系雄性小鼠80只,按體重進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)分組,每組10只。給藥前禁食不禁水16h,給藥組和對(duì)照組分別給予1 000 mg/kg,1 240 mg/kg,1 540 mg/kg,1 900 mg/kg,2 360 mg/kg,3 000 mg/kg和溶媒,組距為0.09。各劑量組采用等體積灌胃單劑量給藥,給藥體積為0.2 mL/10 g。觀察記錄14 d內(nèi)各組動(dòng)物臨床表現(xiàn)、中毒癥狀和死亡情況。對(duì)死亡動(dòng)物進(jìn)行剖檢,肉眼觀察病理變化,采用孫氏改良寇氏法計(jì)算LD50[5]。

米爾貝霉素肟在雌性小鼠的半數(shù)致死量(LD50)測(cè)定取健康昆明系雌性小鼠70只,按體重進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)分組,每組10只。給藥組和對(duì)照組分別給予300 mg/kg,414 mg/kg,571 mg/kg,788 mg/kg,1 088 mg/kg,1 500 mg/kg藥物和溶媒,組距為0.14。各劑量組采用等體積灌胃單劑量給藥,給藥體積為0.2 mL/10 g。觀察記錄14 d內(nèi)各組動(dòng)物臨床表現(xiàn)、中毒癥狀和死亡情況。對(duì)死亡動(dòng)物進(jìn)行剖檢,肉眼觀察病理變化,采用孫氏改良寇氏法計(jì)算LD50[5]。

2 結(jié)果

給藥劑量越大,小鼠中毒癥狀出現(xiàn)時(shí)間越早,癥狀也越明顯。一般于給藥后3 h開始出現(xiàn),死亡病例按照給藥時(shí)間順序逐漸表現(xiàn)為呼吸急促,震顫,共濟(jì)失調(diào);拱背,盲目運(yùn)動(dòng);臥伏不動(dòng),心跳減弱,呼吸緩慢,陣發(fā)性抽搐;死亡。轉(zhuǎn)歸病例僅出現(xiàn)一過性的呼吸急促,活動(dòng)增多,共濟(jì)失調(diào)。剖檢發(fā)現(xiàn)死亡小鼠胃腸極度臌脹,充滿氣體。肝臟有小出血點(diǎn)。14 d后對(duì)剩余小鼠剖檢,未發(fā)現(xiàn)病理變化。各劑量組動(dòng)物死亡率見表1和表2。

經(jīng)孫氏改良寇氏法計(jì)算米爾貝霉素肟對(duì)雄性和雌性小鼠的LD50分別為1 832 mg/kg和727 mg/kg,95%可信限為1 637.57～2 022.08 mg/kg和603.95～868.96 mg/kg。

表1 雄性小鼠灌服米爾貝霉素肟后的死亡時(shí)間分布及死亡率

表2 雌性小鼠灌服米爾貝霉素肟后的死亡時(shí)間分布及死亡率

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道米爾貝霉素肟對(duì)Crj：CD-1(ICR)小鼠的經(jīng)口 LD50為：雄性 946 mg/kg,雌性 722 mg/kg[6];而本試驗(yàn)中米爾貝霉素肟對(duì)昆明系小鼠的LD50為：雄性 1 832 mg/kg,雌性 727 mg/kg。兩者均顯示出小鼠急性經(jīng)口毒性雌性比雄性更敏感,然而本試驗(yàn)中雄性動(dòng)物L(fēng)D50明顯高于文獻(xiàn)報(bào)道,有研究者針對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別和品系對(duì)外源化學(xué)物的反應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)研究,結(jié)果顯示,動(dòng)物性別和品系對(duì)某些外源化學(xué)物反應(yīng)有很大差異[7-9],本試驗(yàn)與文獻(xiàn)中出現(xiàn)的性別和品系的敏感性差異可能源于此,米爾貝霉素肟對(duì)不同品系小鼠的毒性有待于進(jìn)一步研究。

雄性小鼠開始出現(xiàn)毒性反應(yīng)的給藥量是雌性小鼠的3倍以上(雄性1 000 mg/kg,雌性 300 mg/kg),但毒性均主要表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀,與其作用機(jī)制有關(guān),癥狀出現(xiàn)較為緩慢,如果及時(shí)治療可完全恢復(fù)。半數(shù)致死量在500 mg/kg以上(臨床常用劑量0.25mg/kg的2 000倍以上),與文獻(xiàn)報(bào)道一致[3],所以臨床不容易產(chǎn)生毒副反應(yīng)。米爾貝霉素肟對(duì)小鼠毒性呈現(xiàn)性別差異,這對(duì)臨床用藥有一定的指導(dǎo)意義。

試驗(yàn)中存活小鼠剖檢未發(fā)現(xiàn)有病理變化,說明米爾貝霉素肟對(duì)內(nèi)臟器官無損傷或損傷很小可恢復(fù)。

總之,米爾貝霉素肟對(duì)小鼠的急性毒性作用很小,有待于進(jìn)一步研究開發(fā)利用。

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