王金莉,李 麗

(遼寧醫(yī)學院畜牧獸醫(yī)學院,遼寧錦州121001)

抗菌藥物在臨床治療雞大腸桿菌病中的長期應用,使耐藥菌株不斷出現(xiàn),頭孢噻呋作為第一個動物專用的第三代頭孢類抗生素,也有產(chǎn)生耐藥性的報道,為了延長頭孢噻呋在獸醫(yī)臨床的使用時間,減少耐藥性的產(chǎn)生,增強藥效,降低用藥成本,我院動物藥學實驗室選用協(xié)同關系好的頭孢噻呋與TMP配伍,按照4∶1比例制成復方頭孢噻呋。本試驗中測定復方頭孢噻呋對雞大腸桿菌最小抑菌濃度,以及對人工誘發(fā)的雞大腸桿菌病進行試驗性治療,并與頭孢噻呋的療效進行比較,為獸醫(yī)臨床合理應用復方頭孢噻呋,提高療效提供基礎數(shù)據(jù)。

1 試驗材料

1.1 藥品 復方頭孢噻呋,由遼寧醫(yī)學院畜牧獸醫(yī)學院動物藥學實驗室提供。頭孢噻呋,由天津市生機生物技術有限公司提供,含量98%以上。

1.2 菌種 O1、O2、O78型及本地分離株7株,共 10株雞大腸桿菌菌株,由遼寧凱為生物技術有限公司提供。

1.3 試驗動物 蛋雞雞雛300只,雌雄各半,由遼寧醫(yī)學院畜牧獸醫(yī)學院養(yǎng)雞場提供,試驗時10日齡,舍內(nèi)隔離籠養(yǎng),按常規(guī)飼喂全價飼料,自由采食及飲水,不用任何藥物或疫苗免疫。

2 試驗方法

2.1 復方頭孢噻呋的最小抑菌濃度(MIC)測定采用試管兩倍稀釋法[1]做最小抑菌濃度(MIC)抑菌試驗,相同過程重復三次,求平均值。接種菌量為9×105CFU/mL[2],測定復方頭孢噻呋對雞大腸桿菌的MIC值,和頭孢噻呋的MIC值對比。

2.2 人工誘發(fā)雞大腸桿菌病

2.2.1 試驗分組 選擇體重相近的健康雞300只隨機分成6組,分組情況見表1。

2.2.2 人工染毒 各試驗組每只雞分別按每100 g體重胸肌注射雞大腸桿菌6×109CFU/mL菌液0.25 mL,約含1.5億個菌[3]。健康對照組雞經(jīng)胸肌注射無菌生理鹽水0.25 mL。在接種前和接種后觀察雞的臨床癥狀,對死雞進行剖檢,取肝、脾及心作細菌分離培養(yǎng)及鑒定,以確定是否成功誘發(fā)疾病。

2.3 試驗性藥物治療

2.3.1 給藥治療 感染雞在接種雞大腸桿菌6 h左右開始出現(xiàn)臨床癥狀,此時按表1對各組雞進行治療。

表1 復方頭孢噻呋對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的試驗雞分組及給藥情況

2.3.2 療效評價 第1次給藥后15 d為觀察期,每天觀察各組雞的各種臨床表現(xiàn),記錄死亡數(shù)。對死雞進行尸體剖檢,取肝、脾及心作細菌分離培養(yǎng)及鑒定,以確定死因。計算死亡率、治愈率、有效率、相對增重率[3],在試驗開始和試驗結束時稱量每只雞的體重,并予以記錄。

2.3.3 數(shù)據(jù)分析 利用生物學統(tǒng)計方法進行顯著性檢驗,其中死亡率、有效率和治愈率用卡方檢驗,平均增重及增重率進行t檢驗。

2.4 安全性試驗 試驗是以推薦劑量的5倍(0.25 g/L)對30只健康雞飲水給藥,每天2次,連續(xù)給藥3 d,觀察期為第1次用藥后的15 d。

3 試驗結果

3.1 復方頭孢噻呋的最小抑菌濃度(MIC)測定結果 復方頭孢噻呋和頭孢噻呋對雞大腸桿菌株O1、O2、O78以及臨床分離7株雞大腸桿菌的MIC值,見表2。

表2 復方頭孢噻呋和頭孢噻呋的最小抑菌濃度(MIC)結果 (μg/m L)

由表2可見,復方頭孢噻呋的最小抑菌濃度(MIC)值為0.085μg/mL與頭孢噻呋單獨使用的最小抑菌濃度(MIC)值0.65μg/mL相比,差異極顯著(P＜0.01)。

3.2 人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的結果 感染對照組50只雛雞有42只在接種雞大腸桿菌后1～5 d出現(xiàn)死亡。這42只雞表現(xiàn)出食欲、飲欲下降或廢絕,閉眼昏睡,拉稀糞等臨床癥狀。剖檢可見氣囊炎、肝周炎和心包炎等病變。從肝臟、脾臟及心臟均分離出大量典型的大腸桿菌,表明成功誘發(fā)疾病。

3.3 試驗性藥物治療結果 感染大腸桿菌病的雞經(jīng)不同劑量的復方頭孢噻呋或頭孢噻呋給藥后,與感染對照組比較,能較迅速地減輕臨診癥狀,一般在給藥2～3 d后,大多數(shù)雞食欲基本恢復正常。給藥后15 d內(nèi),各組雞的療效結果見表3。

表3 復方頭孢噻呋對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的療效

復方頭孢噻呋高、中、低劑量組和頭孢噻呋對照組死亡率分別為0%、4%、18%和16%,均顯著低于感染對照組的84%,差異極顯著(P＜0.01)。各用藥組相比較,復方頭孢噻呋高劑量組死亡率為0,復方頭孢噻呋中劑量組和頭孢噻呋對照組死亡率均較低,而復方頭孢噻呋低劑量組的死亡率高于頭孢噻呋對照組。

由表3可見,復方頭孢噻呋高劑量組、中劑量組治愈率和有效率較高,均超過90%。頭孢噻呋對照組的治愈率和有效率相對較低,復方頭孢噻呋低劑量組的治愈率和有效率最低,均低于90%。

在增重上,復方頭孢噻呋高劑量組、中劑量組最高,其次為頭孢噻呋低劑量組,3個劑量組的相對增重率均高于頭孢噻呋對照組,差異顯著(P＜0.05)。上述4個組相對增重率均顯著高于感染對照組,差異極顯著(P＜0.01)。感染對照組相對增重率顯著低于健康對照組,差異極顯著(P＜0.01)。

4 討論

通過最小抑菌濃度(MIC)測定方法,比較復方頭孢噻呋和頭孢噻呋對雞大腸桿菌O1、O2、O78,以及臨床分離的7株雞大腸桿菌抑菌效果,結果表明,復方頭孢噻呋對雞大腸桿菌的抑菌效果(MIC為0.085μg/mL)極顯著優(yōu)于頭孢噻呋(MIC為0.65μg/mL)單獨用藥。因此,TMP作為抗菌增效劑,增強了頭孢噻呋的抗菌活性,同時兩者組成復方頭孢噻呋可減少頭孢噻呋的使用量,降低生產(chǎn)成本。

對治療試驗中的死亡率、治愈率、有效率及增重幾項指標進行統(tǒng)計學分析,復方頭孢噻呋高、中、低劑量組和頭孢噻呋對照組死亡率均顯著低于感染對照組,而治愈率和有效率顯著高于感染對照組,差異均極顯著(P＜0.01),因此不同劑量組的復方頭孢噻呋和頭孢噻呋對雞大腸桿菌病均有療效。安全性試驗 用藥期間,試驗雞未觀察到任何不良反應,無雞只死亡。

復方頭孢噻呋高、中劑量組均優(yōu)于頭孢噻呋對照組,差異顯著(P＜0.05)。復方頭孢噻呋低劑量組同頭孢噻呋對照組比較,死亡率較高,治愈率和有效率較低。復方頭孢噻呋高、中劑量組的各項指標比較,差異不顯著(P＞0.05),因此,綜合上述幾項指標分析,在臨床上治療雞的大腸桿菌病,復方頭孢噻呋的給藥劑量選擇中劑量組的復方頭孢噻呋(0.05 g/L)較為合理,對雞的增重率為95.4%,同時治愈率達96%,達到較好的治療效果。

[1] 趙振升,白東英,吳朝陽,等.甲氧芐定與抗菌藥物聯(lián)合抗菌作用效果試驗[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2005(1)：60-61.

[2] 戴自英.臨床抗菌藥理學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1985：16-19.

[3] 曾振靈,劉建新,王志強,等.單諾沙星對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的藥效試驗[J].畜牧與獸醫(yī),2000(3)：17-18.