齊艷萍,李和平,夏彥玲

(1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院,黑龍江大慶163319;2.東北林業(yè)大學(xué)野生動物資源學(xué)院,黑龍江哈爾濱150040)

撲熱息痛(APAP)是應(yīng)用廣泛的解熱鎮(zhèn)痛藥物,正常治療劑量非常安全,但如果長期低劑量或1次性過量使用可造成嚴(yán)重的肝損害,其肝毒性主要與毒性代謝產(chǎn)物 N-乙酰-P-苯醌亞胺的堆積有關(guān)[1]。近年來,有關(guān)鹿茸的研究日益受到重視,有文獻(xiàn)報道鹿茸多肽能促進(jìn)肝細(xì)胞增殖,加速試驗性肝切除小鼠的肝再生[2],但鹿茸對藥物導(dǎo)致的肝損害是否有保護(hù)作用尚未十分清楚。本研究主要針對鹿茸對藥物性肝損傷的保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制進(jìn)行了探討,以期為鹿茸的研發(fā)、應(yīng)用提供新思路及基礎(chǔ)理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 鹿茸粉及醇提物均由本實驗室自制,以生理鹽水配制成所需濃度,4℃保存。

1.2 動物模型的建立 將APAP溶于無菌生理鹽水中,一次性腹腔注射125 mg/kg劑量,制成藥物性肝損傷模型。

1.3 動物分組及給藥 將小鼠隨機(jī)分為6組?？瞻捉M和模型組小鼠每天ig(灌胃給藥)生理鹽水1次,陽性對照組ig150 mg/kg聯(lián)苯雙酯1次,鹿茸粉組以10 mL/kg劑量ig 15%鹿茸粉溶液1次,鹿茸醇提物兩組分別ig相應(yīng)劑量的鹿茸醇提物。在第7天給藥后,空白組ip(腹腔注射)生理鹽水,其余各組均以125 mg/kg劑量ip APAP。禁食,不禁水。16 h后采集血液及肝組織樣品,測定血清ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)、AST(谷草轉(zhuǎn)氨酶)、TBil(總膽紅素)、TP(總蛋白)、ALB(白蛋白)、TG(甘油三酯)及肝組織MDA(丙二醛)、SOD(過氧化物歧化酶)和NO(一氧化氮)含量,試驗數(shù)據(jù)利用 Excel和 SPSS 13.0進(jìn)行差異性比較分析。

2 結(jié)果

2.1 對血清生化指標(biāo)的影響 本研究檢測了肝細(xì)胞受損情況(ALT、AST)、蛋白合成(TP、ALB)、脂代謝(TG)及排泄(TBil)功能幾個方面的血液生化指標(biāo)。由表1可知,模型組小鼠血清ALT、AST、TBil和 TG明顯升高,TP、ALB明顯降低(P＜0.01);給予相應(yīng)藥物后,各組ALT、AST均有不同程度的降低,其中鹿茸醇提物2.0 g/kg劑量組差異極顯著(P＜0.01)。TBil和TG大幅度降低,差異極顯著(P＜0.01),而 TP、ALB含量也都有所升高,其中ALB含量升高幅度較大。

表1 鹿茸對APAP肝損傷小鼠血清生化指標(biāo)的影響

2.2 對肝組織勻漿生化指標(biāo)的影響 由表2可知,APAP導(dǎo)致小鼠肝臟MDA、NO含量明顯增加,SOD活性明顯降低(P＜0.01)。給相應(yīng)治療藥物后,各組MDA和NO含量均不同程度的降低,SOD活性均有一定幅度的提高,但各鹿茸制品的效果均低于聯(lián)苯雙酯。

3 分析與討論

APAP在肝臟內(nèi)被氧化生成有毒性的中間產(chǎn)物N-乙酰-P-苯醌亞胺(NAPQI),與還原型谷胱甘肽(GSH)結(jié)合后排出體外[3]。當(dāng)生成的NAPQI超過了GSH的解毒能力,引起GSH的耗竭,于是大量NAPQI堆積,引發(fā)氧化反應(yīng),從而導(dǎo)致肝損傷[4-5]。本研究從肝細(xì)胞膜、肝臟代謝功能及脂質(zhì)過氧化方面來探討鹿茸制品對APAP所致藥物性肝損傷的保護(hù)作用。

表 2 鹿茸對 APAP肝損傷小鼠肝臟MDA、SOD和NO的影響

3.1 鹿茸對肝細(xì)胞膜的影響 APAP可引起肝細(xì)胞腫脹、膜的通透性增高,轉(zhuǎn)氨酶即可透過細(xì)胞膜釋放入血,因此,ALT、AST能夠反映肝細(xì)胞的損害程度。當(dāng)給予大量的 APAP后,模型組小鼠血清ALT、AST極顯著升高(P＜0.01),說明大劑量APAP代謝過程中生成的過量的NAPQI,誘發(fā)生物膜系統(tǒng)發(fā)生脂質(zhì)過氧化。給予鹿茸制品后,小鼠血清ALT、AST均不同程度的降低,這與六月雪水提取物對APAP肝損傷的作用相近[6],表明鹿茸制品對其有保護(hù)作用,但不同的鹿茸制品降低ALT、AST的水平并不一致,其中鹿茸醇提物2.0 g/kg降酶效果較好,說明其對肝臟細(xì)胞膜以及細(xì)胞內(nèi)線粒體均有很好的修復(fù)功能,能抑制APAP代謝過程中的毒性物質(zhì)NAPQI的過量生成,從而避免因肝內(nèi)GSH耗竭引起的肝細(xì)胞壞死。

3.2 鹿茸對肝臟代謝功能的影響 肝臟的合成貯備、脂代謝以及排泄功能均能反映肝臟的功能狀態(tài)。當(dāng)肝臟受損時,肝細(xì)胞變性、壞死,肝臟蛋白質(zhì)代謝功能發(fā)生障礙,合成貯備能力降低,血中蛋白含量下降[7];膽汁代謝發(fā)生障礙,此時肝臟轉(zhuǎn)化、排泄膽紅素的能力降低,血清 TBil增高,出現(xiàn)膽汁淤滯[8];TG作為機(jī)體儲存能量的形式,其生成極低密度脂蛋白后,由肝細(xì)胞分泌入血而運輸至肝外組織。肝功能失衡致使TG在肝內(nèi)的合成與更新亦發(fā)生障礙。本研究中,模型組 TP、ALB含量明顯降低,TBil、TG含量明顯升高(P＜0.01),這一結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)的結(jié)果一致[9],提示肝臟各方面代謝功能均受到損傷。給藥后,鹿茸各治療組TP含量有所升高但幅度不大,而ALB含量升高幅度較大,以鹿茸醇提物2.0 g/kg效果最好(P＜0.01),此結(jié)果與許多保肝藥物的作用相近,如黃芪總黃酮等[10],說明鹿茸醇提物能充分發(fā)揮其功效,修復(fù)損傷的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體,恢復(fù)肝臟的蛋白合成功能,從而抑制白蛋白、總蛋白的降低;TBil含量明顯降低(P＜0.01),與中藥舒肝靈的作用結(jié)果一致[11],說明鹿茸制品含有能夠抑制肝細(xì)胞變性、壞死的活性因子,降低肝臟受損的程度,提高攝取、轉(zhuǎn)化膽紅素的能力,從而避免膽汁代謝發(fā)生障礙;TG含量也明顯降低(P＜0.01),這與迷迭香對APAP肝損傷的作用結(jié)果一致[12],顯示其可明顯改善APAP所致小鼠肝臟脂肪變性,抑制肝細(xì)胞轉(zhuǎn)換TG能力的下降,從而降低血清中TG含量,維持肝臟脂代謝功能。

3.3 鹿茸對肝臟脂質(zhì)過氧化的影響 機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基(OFR),其攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸(PUFA),引發(fā)脂質(zhì)過氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng),并形成有害產(chǎn)物MDA。SOD是機(jī)體清除自由基的主要抗氧化酶,其活力反映機(jī)體清除自由基的能力,而MDA可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的情況,間接反映肝細(xì)胞損傷程度[13]。在各種肝損害因素作用下,肝細(xì)胞、枯否氏細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生大量的NO,起著細(xì)胞毒性作用[14-16]。研究結(jié)果顯示,APAP模型組小鼠肝組織SOD活性、MDA和NO含量與巴吐爾研究草棉花花瓣時建立的模型一致[17],表明成功建立藥物性肝損傷模型,小鼠肝臟產(chǎn)生明顯的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)(P＜0.01)。用藥后,各組SOD活性升高,MDA和NO含量降低,與芝麻素對APAP肝損傷的作用一致[18],說明鹿茸制品能提高SOD活性,清除過量的自由基,阻止肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化,減少有害產(chǎn)物MDA和NO的產(chǎn)生,避免肝細(xì)胞的損傷,進(jìn)而保護(hù)APAP所致的藥物性肝損傷。

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