陳毅華,楊志華
1.廣東省汕頭市中醫(yī)醫(yī)院,廣東汕頭515041;2.廣東省汕頭市皮膚性病防治院,廣東汕頭 515041
復(fù)方前列安顆粒制劑是汕頭市中醫(yī)醫(yī)院制劑室自制藥品,已取得汕頭市臨床科研用藥(試用)項目,批準(zhǔn)文號為粵Z20080089。該產(chǎn)品由赤芍、淫羊霍、澤瀉、延胡索、制乳香、王不留行等藥味組成,具有活血化瘀、理氣通絡(luò)之功效,適用于氣滯血瘀型的前列腺炎、前列腺增生等病癥。其顆粒采用醇提和傳統(tǒng)的水提工藝相結(jié)合,再經(jīng)過濃縮、干燥、一步制粒等現(xiàn)代先進(jìn)技術(shù)制備而成,為了控制復(fù)方前列安顆粒的質(zhì)量,本文參照文獻(xiàn)[1-4]一方面采用薄層色譜法對該制劑中的淫羊霍、澤瀉、延胡索藥材進(jìn)行了定性鑒別分析;另一方面采用高效液相色譜法進(jìn)一步測定制劑中的主要成分之一芍藥苷的含量,為控制復(fù)方前列安顆粒的藥品內(nèi)在質(zhì)量提供有效的保證。
薄層鋪板器;定量毛細(xì)血管;瑞士CAMAG Reprostar薄層成像系統(tǒng);色譜柱:Kromasil KR100-5 C18ODS柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);SPD-6A 型檢測器(日本島津),P-2000 泵;BP211D電子天平;2170AA數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)。硅膠G薄層板(青島海洋化工廠);LC-10AVP高效液相色譜儀(日本島津)。
甲醇為進(jìn)口色譜純,水為重蒸餾水,其他試劑均為分析純。
芍藥苷、延胡索、淫羊霍對照品,澤瀉對照藥材均購于中國藥品生物制品檢定所。復(fù)方前列安顆粒(20100422、20100425、20100508、20100512)由汕頭市中醫(yī)醫(yī)院制劑室自制,所用藥材均為生產(chǎn)用同批號藥材。
2.1.1 淫羊霍的薄層色譜鑒別 取本品粉末6 g,加醋酸乙酯50 ml,提取3次,合并醋酸乙酯,用水20 ml洗2次,醋酸乙酯提取液蒸干,殘渣加甲醇2 ml使溶解,即得供試品溶液。精密稱取淫羊霍對照品適量,加甲醇制成1 mg/ml的溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗,吸取上述溶液各10 μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水(10∶1∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的熒光斑點,陰性無干擾(見圖1)。
2.1.2 澤瀉的鑒別 取本品粉末5 g,置錐形瓶中,加甲醇50 ml,超聲處理30 min,過濾,濾液蒸干,殘渣加水10 ml溶解,以乙酸乙酯提取3次(20、15、15 ml)合并提取液,水浴蒸干,殘渣加甲醇5 ml使溶解,作為供試品溶液。另取澤瀉對照藥材2 g,加甲醇5 ml,按照供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液。同樣按處方比例,取缺澤瀉的其他各味藥,按制備工藝加工制成陰性樣品,按供試品制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄)試驗,吸取上述溶液各8 μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶2∶0.7)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以 10%硫酸乙醇溶液,熱風(fēng)吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同紫紅色的斑點,陰性無干擾(見圖 2)。
2.1.3 延胡索的薄層色譜鑒別 取本品粉末5 g,加甲醇20 ml,熱溶解,超聲處理30 min,過濾,濾液蒸干,殘渣加水5 ml使溶解,加氨試液0.5 ml,調(diào)pH值至7.0,加乙醇提取3次,每次5 ml,提取液合并,蒸干,加甲醇2 ml溶解,作為供試品溶液。另取延胡索乙素對照品適量,加甲醇溶解,制成1 mg/ml的溶液,作為對照品溶液。再按處方取不含延胡索的其他藥材,按本品制備工藝和上述供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗,分別吸取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各10 μl,分別點于用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以正己烷-氯仿-甲酸(7.5∶4∶1)為展開劑,展距15 cm,取出,晾干,以碘蒸氣薰至斑點顯色清晰,揮盡碘后(10 min),置紫外燈(365 mm)下檢視,在Rf為0.3處,供試品色譜與對照品色譜顯一相同黃棕色熒光斑點,陰性對照品無此斑點(見圖3)。
2.2.1 色譜條件 色譜柱:Kromasil KR100-5 C18ODS柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:0.01%磷酸水-乙腈(83∶17);檢測波長:230 nm;柱溫:室溫;流速:1.0 ml/min[1,3]。
2.2.2 溶液的制備 取本品2.5 g,研細(xì),加乙醇20 ml,振搖,超聲波提取10 min,過濾,濾液蒸干,殘渣加乙醇1 ml溶解,即得供試品溶液。另取芍藥苷對照品精密稱定,加乙醇制成每1 ml含芍藥苷0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。再按處方自配不含赤芍的群藥,依法制成陰性對照溶液。
2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精取芍藥苷對照品(0.5 mg/ml)2、4、6、8、10 μl注入液相色譜儀,以峰面積 Y 對進(jìn)樣量 X(μg)進(jìn)行回歸處理?;貧w方程:Y=10 570.95X-836.40,r=0.999 4。結(jié)果表明芍藥苷的進(jìn)樣量在1.704~8.520 μg范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系。
2.2.4 精密度試驗 精取一定量的上述芍藥苷對照品溶液,按上述色譜條件,重復(fù)進(jìn)樣5次,求得RSD為0.14%(n=5),儀器精密度良好。
2.2.5 重現(xiàn)性試驗 精取同一批號樣品溶液5份,按樣品含量測定項下的方法操作測定。結(jié)果RSD為4.03%(n=5),試驗重現(xiàn)性良好。
2.2.6 穩(wěn)定性試驗 精取同一樣品溶液,在不同時間連續(xù)進(jìn)樣5次,RSD為1.93%,儀器穩(wěn)定性良好。
2.2.7回收率試驗 采用加樣回收法測定回收率,取已知含量的樣品精密稱重,分別加入芍藥苷對照品適量。依樣品溶液項下方法操作測定,平均回收率為97.45%,RSD為1.78%,結(jié)果見表1。
表1 芍藥苷的回收率試驗(n=6)
2.2.8 樣品測定 取供試品進(jìn)樣,按上述色譜條件測定,測定結(jié)果見表2。
表2 供試品中芍藥苷的含量測定結(jié)果
復(fù)方前列安顆粒中淫羊霍與澤瀉的定性鑒別采用TCL法,并分別與各自的陰性對照液進(jìn)行了對照試驗,結(jié)果沒有干擾,斑點明顯,專屬性好,收到良好效果。
延胡索薄層色譜鑒別中使用碘薰后,延胡索乙素氧化成更具熒光的氧化物,經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)驅(qū)趕碘的時間須在5 min以上,否則斑點上仍有棕色碘覆蓋,在紫外燈下顯黑色暗斑,故定為10 min。
芍藥苷作為本制劑的主要成分之一,本文根據(jù)《中國藥典》2010版一部中赤芍藥材項下的含量測定方法,采用HPLC對該成分的含量進(jìn)行測定,對復(fù)方前列安顆粒的內(nèi)在質(zhì)量控制有重要意義。結(jié)果顯示該方法適宜于本制劑中芍藥苷的含量測定,色譜峰分離度高、峰型好,且陰性無干擾[5-7]。
在本實驗檢測過程中,對不同批號的制劑樣品的含量進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)含量相差較大,這可能與所用原藥材不是同一批號有關(guān),因此,控制原藥材質(zhì)量與確保制劑的質(zhì)量關(guān)系非常密切。
本文測定方法經(jīng)各項實驗考察,結(jié)果表明該方法簡便快捷,結(jié)果精確,重現(xiàn)性好,可作為復(fù)方前列安顆粒制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
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