應(yīng)燕紅 胡建平 趙詩(shī)云

（1江西省胸科醫(yī)院 南昌 330008；2江西省中醫(yī)藥研究院 南昌 330046）

肝復(fù)康片對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

應(yīng)燕紅1胡建平2趙詩(shī)云2

（1江西省胸科醫(yī)院 南昌 330008；2江西省中醫(yī)藥研究院 南昌 330046）

目的：觀察肝復(fù)康片對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。方法：取小鼠84只，雌雄各半，分為空白對(duì)照組、模型組、聯(lián)苯雙酯組和肝復(fù)康片高、中、低劑量組，給予相應(yīng)藥物，連續(xù)7 d，空白組和模型組給予等體積的生理鹽水。末次給藥1 h后，除空白對(duì)照組外，其余各組均腹腔注射0.2%CCl4植物油溶液10 mL/kg，20 h后，稱量體重，處理動(dòng)物，檢測(cè)小鼠血清ALT、AST及肝組織中SOD、MDA。結(jié)果：肝復(fù)康片各給藥組小鼠血清ALT、AST水平與模型組比較均明顯降低，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并能顯著提高小鼠肝組織中的SOD含量，降低其MDA含量。結(jié)論：肝復(fù)康片對(duì)CCl4所致小鼠急性肝損傷具有保肝降酶作用。

肝復(fù)康片；小鼠；肝損傷

肝復(fù)康片是由五味子、太子參、白花蛇舌草三味中草藥組成的復(fù)方制劑，具有收斂、益氣、解毒、降谷丙轉(zhuǎn)氨酶之功效，用于治療急、慢性肝炎和早期肝硬化、肝功能不良等癥。CCl4肝損傷模型是經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型，CCl4是公認(rèn)的肝毒劑，具有很強(qiáng)的親肝毒性。本實(shí)驗(yàn)采用0.2%的CCl4植物油溶液腹腔注射小鼠造成急性肝損傷模型，以此模型考察肝復(fù)康片的保肝降酶作用。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康昆明種小白鼠，體重18～22 g，雌雄各半，江西中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：JZDWNO:2008-0090。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑 肝復(fù)康片，0.54 g/片，每片含生藥量2 g，由江西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所生產(chǎn)。聯(lián)苯雙酯滴丸，規(guī)格1.5 mg/丸，浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠生產(chǎn)。四氯化碳（CCl4）分析純，上海長(zhǎng)江化工廠生產(chǎn)。丙二醛（MDA）試劑盒、SOD試劑盒（測(cè)總）、考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒皆由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。

1.3 儀器 生物顯微鏡，型號(hào)CX-31，Olympus。GZX-9030MBE電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。LEICA RM2016切片機(jī)，上海徠卡儀器有限公司。電熱恒溫水浴鍋，北京國(guó)華醫(yī)療器械廠。日本島津紫外分光光度計(jì)，規(guī)格：UV-2450。

2 方法

2.1 劑量設(shè)置 根據(jù)《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》的動(dòng)物等效劑量換算，小鼠給藥量約為成人的9倍，設(shè)定本次實(shí)驗(yàn)小鼠的高劑量給生藥量為4.5 g/(kg·d)，中劑量給生藥量為2.25 g/(kg·d)（與臨床等效劑量相當(dāng)），低劑量給生藥量為1.125 g/(kg·d)。

2.2 藥物配制 肝復(fù)康片，研粉，稱取適量，以蒸餾水溶解，配制成生藥濃度為4.5 g/100 mL的混懸液，作為高劑量組藥液。取高劑量藥液適量分別稀釋2倍和4倍，作為中劑量和低劑量藥液。聯(lián)苯雙酯滴丸，先以少量蒸餾水研磨，再以蒸餾水稀釋至8 mg/mL的混懸液。CCl4用時(shí)以植物油配成0.2%的溶液。

2.3 造模與給藥 小鼠84只，雌雄各半，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，按體重隨機(jī)分為空白組、模型組、高劑量組、中劑量組、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組六組，每組14只，雌雄各半。每日灌胃給藥一次，連續(xù)7 d，給藥容積為10 mL/kg，空白組和模型組給予等體積的生理鹽水。末次給藥1 h后，除空白對(duì)照組外，其余各組均腹腔注射0.2%CCl4植物油溶液10 mL/kg，空白對(duì)照組腹腔注射等體積植物油。動(dòng)物禁食不禁水，20 h后，稱量體重，處理動(dòng)物，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

2.4 觀測(cè)指標(biāo)與方法

2.4.1 血清ALT、AST 摘眼球取血，取血量約1 mL，3 000 r/min離心10 min，吸取上清，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清樣本。

2.4.2 肝組織SOD、MDA 準(zhǔn)確稱取200 mg肝組織，用玻璃勻漿器以0.9%生理鹽水制成10%肝組織勻漿，按試劑盒要求步驟處理樣品后，分別于550、532 nm處測(cè)吸光度，計(jì)算肝組織勻漿中SOD、MDA的活性。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 各組數(shù)據(jù)均以 (±S)表示，采用單因素方差分析。

3 結(jié)果

3.1 肝復(fù)康片對(duì)CCl4致急性肝損傷小鼠血清AST、ALT的影響 見(jiàn)表1。模型組及各給藥組血清ALT、AST水平均明顯高于空白組，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示造模成功。各給藥組血清ALT、AST水平均明顯低于模型組，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），肝復(fù)康片各給藥組間呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。

表1 肝復(fù)康片對(duì)CCl4致急性肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響 (±S)

表1 肝復(fù)康片對(duì)CCl4致急性肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響 (±S)

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別 數(shù)量 劑量[g/(kg·d)] ALT(U/L) AST(U/L)空白 14 - 58.1±13.0 133.5±33.7模型 14 - 269.7±62.4** 699.0±164.3**聯(lián)苯 14 5.4 mg/kg 129.6±36.0**△△185.5±89.8△△高劑 14 4.5 142.5±31.8**△△228.6±57.7*△△中劑 14 2.25 150.8±48.8**△△258.1±109.5**△△低劑 14 1.125 160.2±39.9**△ 251.0±111.1**△△

3.2 肝復(fù)康片對(duì)CCl4致急性肝損傷小鼠肝組織中SOD、MDA的影響 見(jiàn)表2。模型組小鼠肝組織SOD水平明顯低于空白組，而MDA水平明顯高于空白組，均差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示造模成功。肝復(fù)康片各給藥組小鼠肝組織中SOD水平明顯高于模型組，而MDA明顯低于模型組，均差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且各給藥組間呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。

表2 肝復(fù)康片對(duì)CCl4致急性肝損傷小鼠肝組織SOD、MDA的影響(±S)

表2 肝復(fù)康片對(duì)CCl4致急性肝損傷小鼠肝組織SOD、MDA的影響(±S)

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01。

組別 數(shù)量 劑量[g/(kg·d)] SOD（U/mgprot） MDA(nmol/mgprot)空白 14 - 284.7±38.0 2.09±0.81模型 14 - 101.9±10.8** 6.91±1.29**聯(lián)苯 14 5.4 mg/kg 193.2±31.4**△△ 3.65±0.48**△△高劑 14 4.5 245.7±46.8*△△ 2.76±0.79*△△中劑 14 2.25 243.5±28.3*△△ 2.98±0.36*△△低劑 14 1.125 237.9±38.2**△△ 3.03±0.66**△△

4 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，在HBV感染者中，有10%～15%的患者可發(fā)展為慢性乙型肝炎，如果治療不當(dāng)，由慢性肝炎發(fā)展成肝纖維化的時(shí)間僅為2～6年，有25%～40%的患者發(fā)展為肝硬化甚至癌變[1]。因此控制慢性肝病的發(fā)展，減輕肝損傷狀態(tài)，抑制肝臟纖維化成為肝病治療的關(guān)鍵。轉(zhuǎn)氨酶是肝細(xì)胞損傷的敏感標(biāo)志，在很大程度上反映了肝細(xì)胞損傷和壞死，任何引起肝細(xì)胞損傷和壞死的疾病，幾乎均可引起該酶的升高，如病毒性肝炎、中毒性肝炎、酒精肝、肝膿腫等。因此，在排除肝外因素的前提下，ALT、AST的升高提示了肝損傷的存在。超氧化物歧化酶（SOD）是體內(nèi)酶類自由基清除劑，它能夠清除氧自由基（OFR），保護(hù)細(xì)胞器。SOD在維持機(jī)體氧化和抗氧化的平衡中發(fā)揮著重要作用[2]。過(guò)氧化脂質(zhì)是體內(nèi)自由基的衍生物，丙二醛（MDA）是脂質(zhì)過(guò)氧化物的最終產(chǎn)物，MDA能間接的反應(yīng)OFR對(duì)機(jī)體的損害程度[3]。二者水平變化可反映體內(nèi)自由基產(chǎn)生和清除這一動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程。SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力，而MDA的高低又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的程度，通過(guò)SOD與MDA的結(jié)果分析有助于綜合分析肝細(xì)胞的損傷程度，從而反應(yīng)藥物的作用效果。

而中醫(yī)學(xué)認(rèn)為慢性肝病的致病因素為濕、熱、瘀、毒，患者長(zhǎng)期的轉(zhuǎn)氨酶居高不下，肝區(qū)疼痛，以及表現(xiàn)出一些納呆便溏等消化系統(tǒng)的病癥。保肝護(hù)肝以恢復(fù)肝功能以及驅(qū)除致病因素是其主要的治療手段。肝復(fù)康片由太子參、五味子、白花蛇舌草組成，方中五味子的保肝降酶作用已得到現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的證明，太子參具有健脾益氣之功效，有利于改善消化系統(tǒng)功能，白花蛇舌草具有清熱利濕解毒之功效，三味合用具有較好的標(biāo)本兼治之功。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果反映，肝復(fù)康片各給藥組小鼠血清ALT、AST水平與模型組比較均明顯降低，而肝組織中SOD水平明顯增高，MDA水平則明顯降低。表明肝復(fù)康片能很好地降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血清轉(zhuǎn)氨酶，提高肝組織SOD水平，降低MDA水平，表現(xiàn)了良好的保肝降酶效果，為其臨床進(jìn)一步推廣應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]王吉耀.現(xiàn)代肝病治療-理論與進(jìn)展[M].上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社,1999.2

[2]Kerr ME,Bender CM,Monti EJ.An introduction to oxygen free radicals[J].Heart Lung,1996,25(3):200-210

[3]Zhang Q,Li RL,Li ZK,et al.Effect of hyperbaric oxygen pretreatment on the contents of SOD and MDA in the brain tissue of rats with intrauterine distress(in Chinese)[J].Chin J Child Health Care,2001,9 (3):188-190

R 285.5

B

10.3969/j.issn.1671-4040.2011.01.065

2010-10-23）

●論著●