郭永全

(重慶市榮昌縣人民醫(yī)院,重慶榮昌,402460)

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的免疫相關(guān)性疾病,目前其確切發(fā)病機制不清。現(xiàn)代研究表明,HBV感染機體后并不直接對肝細胞造成損傷,是通過誘發(fā)機體免疫效應(yīng)間接損傷肝細胞,同時乙肝病毒得以清除。這種免疫反應(yīng)主要是通過CD4+T細胞的FasL和Bcl-2蛋白表達變化得以實現(xiàn)[1-2]。另外,慢性肝病絕大多數(shù)都有肝纖維化,其中25%～40%最終發(fā)展為肝硬化及肝癌,早期診斷及逆轉(zhuǎn)肝纖維化已成為慢性肝病防治研究中的一個重要課題[3-4]。本研究對128例慢性乙肝患者進行肝組織活檢、檢測其CD4+T細胞的FasL和Bcl-2蛋白表達變化,血清ACTA、TNF-α含量,分析其與肝纖維化的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

128例慢性乙型肝炎均為本院附屬醫(yī)院2004年1月～2009年12月間收治的患者(乙型肝炎組),平均年齡43.6(21～64)歲,其中男72例,女56例。根據(jù)診斷均符合2000年西安會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》診斷標準。慢性乙肝輕度41例,中度39例,重度 28例,乙肝肝硬化 20例。正常對照組35例,為我院體檢中心健康體檢者。

1.2 方法

所有樣本為清晨空腹采血5 mL,分成2管,其中1管肝素抗凝,以淋巴細胞分離液分離得淋巴細胞,溶血素溶解細胞,經(jīng)T細胞分離富聚柱得純化的T細胞,然后用PBS洗滌并調(diào)整至1×106個/mL,分別加入FasLFITC/CD4-PE和Bcl-2-FITC/CD4-PE兩組單抗。另一管37℃水浴30 min,3 000 r/min離心10 min,吸取血清置-70℃凍存?zhèn)錂z。采用 ELISA法測定血清ACTA、TNF-α含量,試劑由美國Genzyme公司提供。肝組織病理選用美國Temno活檢針單操作法取肝組織送病檢,肝組織標本采用HE染色。

2 結(jié) 果

2.1 慢性乙肝患者CD4+T細胞蛋白表達情況及血清ACTA、TNF-α水平

FasL是表達于活化免疫細胞的膜分子,它與相應(yīng)受體結(jié)合,通過Fas-FasL信號途徑可介導(dǎo)細胞凋亡[5],而Bcl-2是體內(nèi)重要的抗凋亡蛋白分子,能阻斷凋亡信號傳遞的最后通路而抑制凋亡[6]。由表1可見,各期慢性乙型肝炎CD4+T細胞FasL與健康對照組相比差異有顯著性(P<0.05),而慢性乙型肝炎患者CD4+T細胞Bcl-2表達與健康對照組差異不具顯著性(P>0.05)。各組慢性乙肝患者血清ACTA、TNF-α含量在慢性乙肝輕度組即明顯升高,并隨著慢性乙肝的發(fā)展而呈逐漸增高趨勢,在慢性乙肝重度及肝硬化組達最高水平,各組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。

表1 慢性乙肝患者CD4+T細胞蛋白表達情況及血清ACTA、TNF-α水平(±s)

表1 慢性乙肝患者CD4+T細胞蛋白表達情況及血清ACTA、TNF-α水平(±s)

與對照組比較,＊P<0.05,＊＊P<0.01。

組別 例數(shù) FasL(%) Bcl-2(%) ACTA(mg/L) TNF-α(pg/mL)正常對照組 35 24.3±8.4 35.9±9.8 0.62±0.19 6.79±2.11乙型肝炎組 128輕度 41 31.5±10.6＊ 33.6±7.3 1.31±0.37＊ 11.38±1.57＊中度 39 34.7±13.1＊ 32.7±8.3 3.74±0.97＊ 81.49±7.64＊＊重度 28 39.4±13.8＊＊ 31.5±7.9 5.89±1.17＊＊ 104.73±10.58＊＊肝硬化 20 46.3±12.7＊＊ 28.1±8.3 9.78±2.16＊＊ 186.51±24.76＊＊

2.2 肝組織病理分期與CD4+T細胞蛋白表達及血清ACTA、TNF-α含量的關(guān)系

肝組織病理纖維化分期與CD4+T細胞蛋白表達及血清ACTA、TNF-α含量的關(guān)系見表2。各期慢性乙型肝炎CD4+T細胞FasL和Bcl-2表達與SI比較不是很明顯,僅見S4期(P<0.05)。血清ACTA、TNF-α含量從S1到 S4有不同程度升高,其含量在S4達到最高水平,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

表2 肝組織病理分期與CD4+T細胞蛋白表達及血清ACTA、TNF-α含量的關(guān)系(±s)

表2 肝組織病理分期與CD4+T細胞蛋白表達及血清ACTA、TNF-α含量的關(guān)系(±s)

與 S1期比較,＊P<0.05,＊＊P<0.01。

分期 例數(shù) FasL(%) Bcl-2(%) ACTA(mg/L) TNF-α(pg/mL)S1 27 32.4±10.8 35.7±6.9 1.24±0.47 12.58±1.49 S2 35 34.9±12.7 34.3±7.3 3.58±0.79＊ 82.84±8.18＊S3 41 38.6±14.9 32.6±7.6 6.13±1.07＊ 119.65±10.78＊＊S4 25 45.3±12.4＊ 28.1±8.3＊ 9.62±2.16＊＊ 174.55±23.46＊＊

3 討 論

慢性乙型肝炎是臨床常見病,目前認為其與宿主機體免疫狀態(tài)特別是細胞免疫功能失調(diào)密切相關(guān)[7]。現(xiàn)有研究表明,慢性乙肝患者外周血CD4+T細胞絕對數(shù)和相對數(shù)(CD4+/CD8+)都明顯降低[8]。這意味著慢性乙肝患者細胞免疫缺陷,而CD4+T數(shù)量和質(zhì)量的異常是導(dǎo)致免疫缺陷的原因之一,它在慢性乙型肝炎進展中起重要的作用。本研究結(jié)果顯示慢性乙肝患者CD4+T細胞表面FasL的表達與健康人群組存在顯著性差異(P<0.05),尤其是重度乙肝患者和肝硬化患者,其陽性率達46.3%,而健康人群的陽性率為24.3%,差異非常顯著(P<0.01)。其表達情況呈有急性肝炎、慢性肝炎輕度、慢性肝炎中度、慢性肝炎重度、肝硬化的趨勢;而Bcl-2在慢性乙肝患者與健康人群表達差異不是很顯著。根據(jù)FasL主要表達于活化細胞表面和CD4+T細胞的生理功能,外周血CD4+T細胞表面FasL表達量和細胞數(shù)量聯(lián)合檢測可能有如下幾點臨床意義:①細胞數(shù)量正常,FasL表達量上升表明機體針對乙肝病毒免疫力增強,病情較輕。②細胞數(shù)量下降而FasL表達量增加,表明機體免疫系統(tǒng)在對乙肝病毒實行細胞免疫同時,引起自身凋亡,導(dǎo)致效應(yīng)細胞數(shù)量減少。③細胞數(shù)量和FasL表達量均下降,說明效應(yīng)細胞數(shù)減少且細胞免疫功能低下,病情有可能惡化[3]。本研究結(jié)果表明,其FasL表達隨病癥的嚴重程度呈增高趨勢,故顯示機體免疫系統(tǒng)正在進行免疫調(diào)節(jié)。

ACTA 屬于轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)超家族,是由2個亞單位(βAβB)組成的二聚體糖蛋白,根據(jù)亞單位組成的不同分為 ACTA(βAβA)、ACTB(βBβB)、ACTAB(βAβB), 其中以 ACTA 最為重要[9]。近年來研究表明,ACTA在慢性肝炎、肝纖維化及肝功能衰竭等疾病發(fā)生發(fā)展過程中均有ACT A異常表達,ACT A具有抑制肝細胞生長、誘導(dǎo)其發(fā)生調(diào)亡,同時促進HSC分泌膠原等作用[10]。肝纖維化、肝硬變時ACTA表達增高,ACTA可能通過抑制肝實質(zhì)細胞增生,促進間質(zhì)細胞分泌ECM而參與肝纖維化、肝硬化的形成。本研究同時比較肝組織在不同肝纖維化分期血清ACTA 、TNF-α含量,結(jié)果顯示 :血清 ACTA 、TNF-α水平隨肝組織纖維化程度加重而升高,在S4處于最高水平,說明ACTA、TNF-α水平與肝纖維化程度相關(guān),這恰好與多數(shù)文獻報道相一致[11-13]。TNF-α最早被認為是單核巨噬細胞產(chǎn)生的炎性細胞因子,因與腫瘤患者消瘦密切有關(guān),以前曾被作為惡液質(zhì)(cachexia)因子,TNF-α通過其胞膜受體TNF-α RⅠ和TNF-α RⅡ發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。既往大量臨床和實驗研究表明,肝炎等肝臟疾病患者肝內(nèi)有大量TNF-α產(chǎn)生并參與肝損傷的病理發(fā)生發(fā)展,與肝炎和肝硬化及肝癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[11]。

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[5] Nakamura M,Nagano H,Sakon M,et al.Role of the Fas/FasL pathway in combination therapy with interferon-αand fluorouracil against hepatocellular carcinoma in vitro[J].Journal of Hepatology,2007,46(1):77.

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