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細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備的合理使用及質(zhì)量控制

2011-02-14 18:07王成艷韓景田
中國醫(yī)學(xué)裝備 2011年8期
關(guān)鍵詞:玻璃器皿滅菌器細(xì)胞培養(yǎng)

王成艷 韓景田 買 霞

①武警醫(yī)學(xué)院教保處 天津 300162

細(xì)胞培養(yǎng)主要是指細(xì)胞在體外條件下的培養(yǎng)技術(shù),亦即在無菌情況下,模擬體內(nèi)生長環(huán)境,使其在體外繼續(xù)生長和增殖[1]。包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù)等都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價(jià)值。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在醫(yī)學(xué)研究中得到了極為廣泛的應(yīng)用,在整個(gè)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展中起到了很關(guān)鍵的核心作用。掌握細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)對臨床醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的學(xué)習(xí)和研究大有幫助。除潔凈的室內(nèi)環(huán)境外,與細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)有關(guān)的設(shè)備和器材主要有二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌器、濾菌器及玻璃器皿等。結(jié)合我們的工作實(shí)踐,談?wù)劶?xì)胞培養(yǎng)設(shè)備的合理使用及質(zhì)量控制。

1 CO2培養(yǎng)箱

CO2培養(yǎng)箱價(jià)格昂貴,溫度和氣體濃度傳感器靈敏,如果在使用過程中操作不當(dāng),容易導(dǎo)致儀器損壞,影響正常工作和儀器使用壽命。CO培養(yǎng)箱內(nèi)的進(jìn)氣壓要求為0.06 MPa。開門后,箱內(nèi)氣體散發(fā),壓力下降。關(guān)門后氣體傳感器在低壓刺激下有節(jié)奏地開閉,向箱內(nèi)充氣,當(dāng)進(jìn)氣壓達(dá)到0.06 MPa時(shí),自動(dòng)停止調(diào)節(jié)。因此,在日常使用過程中,盡量避免不必要的打開培養(yǎng)箱,從而減少傳感器的工作負(fù)荷,延長其使用壽命[2]。放置CO2培養(yǎng)箱的實(shí)驗(yàn)室室溫應(yīng)保持在25 ℃左右,溫度過高會影響CO2培養(yǎng)箱的溫控裝置。CO2培養(yǎng)箱使用過程中,要求在箱內(nèi)托盤中放一定量的滅菌水,使箱內(nèi)為飽和濕度環(huán)境,這是針對開放培養(yǎng)細(xì)胞要求設(shè)計(jì)的,有利于細(xì)胞生長[3]。使用CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),要每天觀察二氧化碳壓力表,及時(shí)更換二氧化碳鋼瓶。培養(yǎng)箱內(nèi)應(yīng)放置一溫度計(jì),記錄其溫度與指示表溫度是否一致。箱內(nèi)應(yīng)劃分不同區(qū)域,不同細(xì)胞應(yīng)放不同區(qū)域[4]。此外,CO2培養(yǎng)箱的箱內(nèi)要經(jīng)常消毒,以免細(xì)菌污染,影響細(xì)胞培養(yǎng)。

2 倒置顯微鏡

組成和普通顯微鏡一樣,只不過物鏡與照明系統(tǒng)顛倒,用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞。倒置顯微鏡和放大鏡起著同樣的作用,就是把近處的微小物體成一放大的像,以供人眼觀察。只是顯微鏡比放大鏡可以具有更高的放大率而已。倒置顯微鏡中最常用的觀察方法就是相差。由于這種方法不要求染色,是觀察活細(xì)胞的理想方法。應(yīng)嚴(yán)格按照有關(guān)操作規(guī)則使用顯微鏡,避免因使用不當(dāng)造成損毀。觀察細(xì)胞時(shí),按照先低倍后高倍的物鏡選擇方法,每次使用完畢后應(yīng)及時(shí)做好清潔工作[5]。所有鏡頭表面必須保持清潔,落在鏡頭表面的灰塵,可用吸耳球吹去,也可用軟毛刷輕輕的撣去掉。當(dāng)鏡頭表面沾有油污或指紋時(shí),可用脫脂棉蘸少許無水乙醇和乙醚的混合液(3∶7)輕輕擦拭。不能用有機(jī)溶液清擦其它部件表面,特別是塑料零件,可用軟布蘸少量中性洗滌劑清擦。在任何情況下操作人員不能用棉團(tuán)、干布塊或干鏡頭紙擦試鏡頭表面,否則會刮傷鏡頭表面,嚴(yán)重?fù)p壞鏡頭,也不要用水擦試鏡頭,這樣會在鏡頭表面殘留一些水跡,而滋生霉菌,嚴(yán)重?fù)p壞顯微鏡。觀察細(xì)胞生長狀態(tài)時(shí),要輕拿輕放,防止細(xì)胞被顯微鏡污染或損壞鏡頭。

3 超凈工作臺

超凈工作臺是一種局部層流裝置,提供局部高潔凈度環(huán)境,使工作環(huán)境無菌無塵的一種空氣凈化設(shè)備。為了保證超凈化工作臺的潔凈度,使用前30 min應(yīng)開啟風(fēng)速開關(guān)和紫外線開關(guān),進(jìn)行紫外線照射,以保證操作區(qū)有潔凈空氣環(huán)境,包括移液器、試管架、鑷子等。超凈臺內(nèi)也應(yīng)劃分不同的區(qū)域,如材料區(qū)、操作區(qū)、污物區(qū)等。注意安全,特別是酒精燈,如有酒精漏出應(yīng)立即吸干擦凈,以免發(fā)生意外。實(shí)驗(yàn)完畢,所用過的器皿、雜物必須清理,同時(shí)進(jìn)行臺面清潔,使工作臺處于最佳狀態(tài),同時(shí)定期拆洗或更換預(yù)過濾器中的無紡布濾料。經(jīng)常用酒精或丙酮等擦拭紫外線燈管,保持表面清潔,否則影響殺菌能力[6]。

4 高壓蒸汽滅菌器

高壓蒸汽滅菌的效果直接影響細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞的生長狀況。滅菌不當(dāng),容易造成細(xì)菌對培養(yǎng)細(xì)胞的污染。滅菌器內(nèi),裝放擬滅菌物品不應(yīng)過擠,其總體積不應(yīng)超過其容積的80%,物品裝放時(shí),上下左右均應(yīng)互相間隔一定距離,以利于蒸汽與空氣相互交換,,難于滅菌的大物品放上層,較易滅菌的小物品放在下層。滅菌前應(yīng)對滅菌器各部位進(jìn)行常規(guī)檢查。滅菌時(shí),當(dāng)壓力指示表升至0.35 kg/cm2時(shí),開放排氣閥,排凈冷空氣后再關(guān)閉,以使滅菌器內(nèi)真正達(dá)到預(yù)定的溫度。否則壓力表上所示壓力并非全部蒸汽壓,滅菌將不完全。滅菌完畢后,不可突然開大排氣閥門排氣減壓,以免因器內(nèi)壓力驟然下降而瓶內(nèi)液體沸騰,沖出瓶外。

5 濾菌器

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),對培養(yǎng)基的除菌方法通常采用濾菌器除菌,即采用濾膜濾器除菌。濾膜濾器是用金屬容器將孔徑不同的醋酸纖維薄膜(濾膜)夾在中間,進(jìn)行過濾除菌。常用的濾膜的規(guī)格有0.22 um、0.35 um、0.45 um、0.65 um、0.8 um等幾種。使用時(shí),先將濾膜放入雙蒸水中浸泡12 h以上,平鋪于金屬濾器上。為防止濾膜破損,通常使用雙層濾膜,上層使用孔徑大一點(diǎn)的濾膜(0.45 um),下層使用孔徑小一點(diǎn)的濾膜(0.22 um)。固定好后,連同使用的膠管用牛皮紙包好,經(jīng)高壓滅菌1.04 kg/cm215 min,備用。新濾器應(yīng)在流水中徹底洗滌后放在1∶100的鹽酸中浸泡數(shù)小時(shí),再用蒸餾水洗滌,干燥后保存。

6 玻璃器皿

培養(yǎng)用的各種玻璃器皿如玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、吸管等均需經(jīng)過清水浸泡、去污刷洗、酸浸和沖洗以及高壓滅菌等程序。清洗玻璃器皿要求干凈透明、無油跡,不能殘留任何物質(zhì)。因?yàn)槟承┗瘜W(xué)物質(zhì)僅百萬分之一毫克,就會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。玻璃器皿清洗方法:新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡,軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前先用自來水簡單刷洗,再用5%鹽酸浸泡過夜,后用試管刷刷洗,但細(xì)胞培養(yǎng)瓶不能刷。將初洗的玻璃器皿放在烘箱中烘干后,放入濃硫酸重鉻酸鉀配制的洗液中至少過夜。手工洗滌浸酸后的器皿,每件器皿至少要反復(fù)“注水-倒空”10次以上,最后用雙蒸水浸洗2~3次,烘干,包裝,高壓滅菌121 ℃、30 min后備用。

[1]盧圣棟.現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)(第二版)[M].北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,1999:430.

[2]趙巍,李小寧.CO2培養(yǎng)箱的使用,保養(yǎng)及故障排除[J].醫(yī)療設(shè)備信息,2006,21(6):97-98.

[3]張麗蕓,盧曉,程寶鸞.二氧化碳培養(yǎng)箱的使用和保護(hù)[J].國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊,2005,26(1):61.

[4]崔冬生,李增寧,顧平,等.細(xì)胞培養(yǎng)室管理規(guī)則[J].華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,6(3):395-396.

[5]韓景田,賀智,王剛.顯微鏡的調(diào)試使用和管理[J].中國醫(yī)學(xué)裝備,2009,6(1):61-62.

[6]劉金芳.凈化工作臺及壓力滅菌器的質(zhì)量控制[J].江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué),2000,11(4):65-66.

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