宣穎超 張 濤 郭 洋 吳 潔 楊李健 穆 祥

白頭翁湯中主要成分導(dǎo)入合谷穴對皮膚微血管舒縮振幅的作用＊

宣穎超1張 濤1郭 洋2，3吳 潔1楊李健1穆 祥1

白頭翁湯出自張仲景的《傷寒論》，由白頭翁、黃連、黃柏、秦皮四味中藥組成，具有清熱解毒、涼血止痢之功效［1］。白頭翁湯發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)是湯劑中的化學(xué)成分，主要為生物堿類、香豆素類、皂苷類等［2］。近來有研究發(fā)現(xiàn)，這些中藥成分的作用與提高微血管舒縮活動(dòng)振幅之間有明顯相關(guān)性。白頭翁湯中具有提高微血管舒縮活動(dòng)振幅作用的成分目前尚不清楚。本試驗(yàn)對白頭翁湯及其主要成分舒縮微血管功效進(jìn)行比較分析，為該湯劑有效成分的深入研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，更為從改善微循環(huán)角度研究中藥成分的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器設(shè)備

Perilont激光多普勒血流灌注儀（瑞典Perimed公司，主機(jī)型號PeriFlux system 5000，探頭型號Probe481-1）；離子導(dǎo)入儀（瑞典Perimed公司，主機(jī)型號PF382b，導(dǎo)藥電極型號PF383，分散電極型號PF384）；WQ6F30經(jīng)絡(luò)定位儀（北京海淀區(qū)東華電子儀器廠）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；電子分析天平（梅特勒—托利多儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申順生物科技有限公司，型號R1002B）。

1.2 主要試劑與藥品

白頭翁湯藥材飲片：白頭翁、黃連、黃柏、秦皮均購自北京同仁堂。白頭翁湯主要化學(xué)成分（標(biāo)準(zhǔn)品）鹽酸小檗堿（純度＞98%）、白頭翁素（純度＞98%）：購自中國藥品生物制品檢定所；鹽酸藥根堿（純度＞98%）、鹽酸巴馬?。兌龋?8%）、秦皮甲素（純度＞98%）：購自上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司；秦皮乙素（純度≥98%）、白頭翁皂苷B4（純度≥97%）：購自上海同田生物技術(shù)有限公司。

1.3 中藥溶液配制

1.3.1 白頭翁湯溶液制備：根據(jù)藥典中白頭翁湯處方稱取白頭翁60g、黃連30g、黃柏45g、秦皮60g飲片，加飲用水煎煮三次，第一次加10倍量煮沸30min，16層紗布過濾；藥渣再分別加8倍量、6倍量飲用水進(jìn)行第二次、第三次煮沸、過濾。合并三次濾液，布氏漏斗再抽濾。

濾液放冷后，加入無水乙醇，至乙醇終濃度為75%，密閉，置4℃冰箱靜置24～48h后，取上清液減壓濃縮至稠膏狀，回收乙醇。膏液于70℃鼓風(fēng)干燥箱中干燥至恒重，得白頭翁湯浸膏。稱取適量白頭翁湯浸膏，溶于生理鹽水中，混勻，制成1g／ml的白頭翁湯溶液用作以下實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 各種化學(xué)成分的溶液制備：精密稱取鹽酸小檗堿3mg，加入1ml生理鹽水，制成每1ml含鹽酸小檗堿3mg的貯備液。鹽酸藥根堿溶液、鹽酸巴馬汀溶液、秦皮甲素溶液、秦皮乙素溶液、白頭翁素溶液、白頭翁皂苷B4溶液的制備方法同鹽酸小檗堿。

1.4 實(shí)驗(yàn)對象及選穴

隨機(jī)選取8名20～26歲身體健康的在校大學(xué)生（男女各半）作為試驗(yàn)對象。

根據(jù)白頭翁湯處方的歸經(jīng)屬性，取受試者陽明大腸經(jīng)上的合谷穴作為受試穴位。受試者靜坐20～30min后，用75%酒精棉球清潔受試者合谷穴及周圍皮膚，待酒精揮發(fā)后，使用經(jīng)絡(luò)定位儀，在解剖學(xué)位置定位并標(biāo)記。

1.5 穴位導(dǎo)藥

激光多普勒系統(tǒng)預(yù)熱30min后，將離子導(dǎo)入儀的導(dǎo)藥電極固定于合谷穴，探頭與皮膚緊貼，在多普勒熒屏上觀察穴位區(qū)微血管舒縮活動(dòng)，如出現(xiàn)頻率和振幅不規(guī)則圖譜，則適度調(diào)整激光探頭位置，記錄穴區(qū)微血管舒縮活動(dòng)4～6min，之后用微量移液器吸取200μl的1g／ml白頭翁湯溶液注入導(dǎo)入電極襯墊上，打開PF382b電源，設(shè)定好導(dǎo)藥時(shí)間和電流，導(dǎo)藥結(jié)束后繼續(xù)觀察8～10 min。從每位受試者導(dǎo)藥前后微血管舒縮活動(dòng)振幅圖像中分別選取5段數(shù)據(jù)計(jì)算導(dǎo)藥前后穴區(qū)振幅（PU）平均值及振幅變化幅度。

導(dǎo)藥前（后）振幅＝（PUmax—PUmin）／5

振幅變化幅度＝導(dǎo)藥后振幅平均值—導(dǎo)藥前振幅平均值

同上，在合谷穴分別導(dǎo)入200μl的3mg／ml的鹽酸小檗堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白頭翁素、白頭翁皂苷B4，記錄并保存導(dǎo)入前后穴區(qū)微血管舒縮活動(dòng)圖譜。

以生理鹽水作為空白對照。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1和圖1～圖3。結(jié)果顯示：與導(dǎo)藥前比較，分別導(dǎo)入白頭翁湯、鹽酸小檗堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白頭翁皂苷B4、白頭翁素以及生理鹽水后，穴區(qū)皮膚微血管舒縮振幅均有不同程度的變化，其中穴區(qū)導(dǎo)入白頭翁湯、鹽酸小檗堿、鹽酸藥根堿（圖1～圖3）極顯著地提高了皮內(nèi)微血管舒縮振幅（P＜0.01）；導(dǎo)入鹽酸巴馬汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白頭翁素、白頭翁皂苷B4對穴區(qū)皮膚微血管舒縮振幅無顯著影響（P＞0.05）。

表1 白頭翁湯及其主要成分導(dǎo)入合谷穴前后皮膚微血管振幅比較（±s，n均＝8）

表1 白頭翁湯及其主要成分導(dǎo)入合谷穴前后皮膚微血管振幅比較（±s，n均＝8）

注：與導(dǎo)藥前振幅比較，1）P＜0.01

組 別 導(dǎo)藥前振幅 導(dǎo)藥后振幅 振幅變化幅度白頭翁湯組 72.00±14.10 162.20±8.801）90.20鹽酸小檗堿組 54.10±5.10 156.70±9.401） 102.60鹽酸藥根堿組 29.60±0.80 69.50±7.701） 39.90鹽酸巴馬汀組 36.80±7.10 34.40±9.80 -2.40秦皮甲素組 88.80±8.70 87.50±4.40 -1.30秦皮乙素組 58.70±3.20 55.70±4.90 -3.00白頭翁皂苷B4組 69.60±6.50 66.10±2.20 -3.50白頭翁素組 39.50±4.60 41.70±8.60 2.20生理鹽水組29.70±4.60 31.10±0.70 1.40

圖1 白頭翁湯對微血管舒縮振幅的影響

3 討 論

白頭翁湯出自張仲景的《傷寒論》。通過對其藥理作用的研究發(fā)現(xiàn)，白頭翁湯對細(xì)菌性痢疾具有良好的治療效果。對志賀氏、施氏等痢疾桿菌以及金黃色葡萄球菌、卡他球菌、表皮葡萄球菌等都具有明顯的抑制作用［3］。近期有研究報(bào)道，中藥（包括白頭翁湯）穴位導(dǎo)入具有與針灸相似的作用原理，能通過改善穴區(qū)微循環(huán)狀態(tài)而達(dá)到治療疾病的目的。本文作者根據(jù)白頭翁湯的歸經(jīng)屬性，選擇人合谷穴導(dǎo)入白頭翁湯及其主要化學(xué)成分后，發(fā)現(xiàn)白頭翁湯具有明顯提高合谷穴區(qū)皮膚微血管舒縮振幅的效果，而這種效果可能主要由其化學(xué)成分小檗堿和藥根堿起作用。為中藥改善微循環(huán)研究提供了理論和方法學(xué)依據(jù)。

圖2 鹽酸小檗堿對微血管舒縮活振幅的影響

圖3 鹽酸藥根堿對微血管舒縮振幅的影響

微血管作為微循環(huán)系統(tǒng)重要組成之一，能夠自發(fā)地出現(xiàn)周期性管徑變化和血流變化，且與心跳、呼吸無關(guān)，在調(diào)節(jié)組織、細(xì)胞的物質(zhì)、信息、能量傳遞方面發(fā)揮重要作用［4］。有研究者在觀察針灸對微血管自律運(yùn)動(dòng)的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，針灸具有改善穴區(qū)皮膚微血管舒縮振幅的效果［5］。修瑞娟等［6］針刺健康成人的尺澤穴，發(fā)現(xiàn)針刺后穴位局部皮膚微血管自律運(yùn)動(dòng)頻率基本不變，但振幅增加60%以上，提示針刺能提高微血管自律運(yùn)動(dòng)振幅。周智慧等［7］研究發(fā)現(xiàn)人參水煎液、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re均能顯著提高穴位區(qū)微血管舒縮活動(dòng)的振幅。穆祥［8］從中（獸）醫(yī)學(xué)的診斷、證候、藥性等與微血管功能狀態(tài)進(jìn)行相關(guān)性分析后認(rèn)為，中藥方劑防治疾病的作用機(jī)理之一在于調(diào)控和改善微血管功能。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)白頭翁湯及小檗堿、藥根堿均具有顯著提高穴區(qū)皮膚微血管舒縮振幅的作用，進(jìn)一步說明中藥導(dǎo)入與微血管調(diào)節(jié)之間存在很大的相關(guān)性。

本實(shí)驗(yàn)所用白頭翁湯中各種化學(xué)成分在提高穴區(qū)微血管舒縮活動(dòng)振幅方面存在差異，其中生物堿類作用大于香豆素類、皂苷類，而生物堿類成分中小檗堿＞藥根堿＞巴馬汀，這為白頭翁湯中有效成分的篩選及其成分制劑的開發(fā)提供了基礎(chǔ)，其中小檗堿及藥根堿顯著提高穴位區(qū)微血管舒縮振幅的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，補(bǔ)充了相關(guān)研究的空白。然而，白頭翁湯化學(xué)成分極其復(fù)雜，其它同樣具有提高穴位區(qū)微血管舒縮振幅作用的成分，有待進(jìn)一步分離、研究。

本文第一作者簡介：

宣穎超（1985～），男，滿族，碩士研究生，主要研究方向?yàn)橹蝎F醫(yī)藥

1 張保國，梁曉夏，劉慶芳.白頭翁湯現(xiàn)代藥效學(xué)研究.中成藥，2009，31（4）：607～608.

2 朱華旭，丁林生.白頭翁湯湯劑化學(xué)成分的分離研究.中成藥，1999，21（6）：313～317.

3 王瑞鋒，王 雪.白頭翁湯的藥理作用與臨床應(yīng)用.中醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，25（2）：270～271.

4 楊國棟.微循環(huán)障礙與莨菪類藥的臨床應(yīng)用.北京：人民衛(wèi)生出版社，1999：13～21.

5 趙平平，洪儷鳳.針灸對微血管自律運(yùn)動(dòng)（微循環(huán)）影響的研究概況.甘肅中醫(yī)，1999，12（2）：45～48.

6 修瑞娟，程 軍，張 靜.針刺對微血管自律運(yùn)動(dòng)的影響.中華醫(yī)學(xué)雜志，1988，68（9）：489～490.

7 周智慧，張 濤，徐克偉，等.人參及其主要活性成分對穴位區(qū)皮內(nèi)微血管舒縮活動(dòng)振幅的影響.北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，25（4）：24～25.

8 穆 祥.中藥方劑的作用機(jī)制探討.中獸醫(yī)藥研究進(jìn)展―中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)中獸醫(yī)學(xué)分會(huì)2003年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集.西安：西北農(nóng)林科技大學(xué)出版社，2003：49～54.

白頭翁湯中主要成分導(dǎo)入合谷穴對皮膚微血管舒縮振幅的作用

宣穎超，張 濤，郭 洋，等／北京農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)（中醫(yī)藥）北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京102206

目的：觀察白頭翁湯及其主要化學(xué)成分導(dǎo)入合谷穴前后皮膚微血管舒縮振幅的變化。方法：選取陽明大腸經(jīng)上的合谷穴作為導(dǎo)藥穴位，利用離子導(dǎo)入儀將白頭翁湯及小檗堿、藥根堿、巴馬汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白頭翁皂苷B4、白頭翁素導(dǎo)入受試者合谷穴皮膚，并用激光多普勒血流儀記錄導(dǎo)藥前后穴區(qū)皮膚微血管舒縮振幅的變化。結(jié)果：白頭翁湯、小檗堿和藥根堿顯著提高了穴區(qū)皮膚微血管舒縮活動(dòng)的振幅（P＜0.01），巴馬汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白頭翁素、白頭翁皂苷B4對穴區(qū)皮膚微血管舒縮活動(dòng)振幅影響差異無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：小檗堿和藥根堿是白頭翁湯提高微血管舒縮活動(dòng)振幅的主要成分。

Effect of Components of Pulsatilla Decoction on Amplitude of Cu t a n e o u s Mi c r o v a s omo t i o n a t He g u Ac u p o i n t

／Xuan Yingchao，Zhang Tao，Guo Yang，et al／Beijing Key La-boratory of Traditional Chinese Veterianry Medicine，Beijing University of Agriculture，Beijing 102206

Pulsatilla decoction；Microvasomotion amplitude；Hegu acupoint

R331.3＋5

A

1005—1740（2011）02—0001—03

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（30972209）、北京市屬高等學(xué)校人才強(qiáng)教深化計(jì)劃"學(xué)術(shù)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)計(jì)劃"項(xiàng)目（PHR201007142）資助

1北京農(nóng)學(xué)院獸醫(yī)學(xué)（中醫(yī)藥）北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，郵政編碼 北京102206；2吉林大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院；3沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院； 通訊作者：穆 祥，E-mail：muxiang1109＠sina.com本文2011—02—24收到，2011—03—22修回，2011—03—28接受

Objective：To investigate the effect of the components of pulsatilla decoction on amplitude of cutaneous microvasmotion at acuppoints.Meth-od：Hegu acupoint of Yangming large intestine meridian was the tested acupoint，pulsatilla decoction，berberine，jatrorrhizine，palmatine，escu-lin，aesculetin，anemoside B4and anemonine were imported to the cuta-neous acupoint of the subjects by the lontophore device.The laser doppler monitor was used to record the change of the amplitude of the mi-crovasomotion before and after importing these medicine.Results：The amplitude of cutaneous microvasomotion at acupoints was apparently im-proved after importing the berberine and jatrorrhizine（P＜0.01）.How-ever，the amplitude of cutaneous microvasomotion at acupoints was not significantly improved after importing the palmatine，esculin，aesculetin，anemoside B4and anemonine（P＞0.05）.Conclusion：Both the berberine and jatrorrhizine are the main components that could improve the ampli-tude of cutaneous microvasomotion at acupoints.

白頭翁湯 小檗堿 藥根堿 微血管舒縮活動(dòng)振幅 合谷穴

·醫(yī)研動(dòng)態(tài)·