劉海洲 崔 英 岳惠芬 梁新強 吳冬梅 陳麗霞 朱文良 聶 龍 宛 月 豐大利

(廣西醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院，南寧市 530021)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是影響廣西地區(qū)人群健康的最主要的惡性腫瘤，在廣西地區(qū)其發(fā)病率和死亡率都相對較高［1］。目前鼻咽癌的病因?qū)W研究已經(jīng)深入到了分子水平，鼻咽癌核心家系相關(guān)基因的研究也逐步成為熱點，但尚未見有鼻咽癌核心家系數(shù)據(jù)庫及其成員血液標本庫的報道。鑒于此，本研究通過建立廣西254個鼻咽癌核心家系數(shù)據(jù)庫及成員血液標本庫，并檢測EB-VCA-IgA抗體，為進一步利用以核心家系為基礎的遺傳關(guān)聯(lián)研究，探討相關(guān)基因多態(tài)性與鼻咽癌易感性之間的關(guān)系打下良好基礎。

1 對象與方法

1.1 研究對象 以廣西近年患病或發(fā)現(xiàn)的鼻咽癌患者為先證者;由先證者和其生物學父母構(gòu)成核心家系，對照組為廣西境內(nèi)鼻咽癌高發(fā)區(qū)自然人群。

1.2 研究方法 由專門培訓的調(diào)查員，使用統(tǒng)一的調(diào)查表，對每個核心家系進行保密的詢問調(diào)查，主要內(nèi)容包括個人基本情況、吸煙史、飲酒史、鼻咽癌病史、家族腫瘤史、個人史等。采集核心家系成員、對照組的靜脈血，離心分離血清，－20℃保存，建立鼻咽癌核心家系樣本庫。采用酶聯(lián)免疫方法檢測血清EB-VCA-IgA抗體滴度。EB-VCA-IgA陽性標準為:VCA-IgA≥1∶5。

1.3 血液標本的存放和管理 每個鼻咽癌核心家系包括先證者、先證者父母3份血液樣品，統(tǒng)一編號處理后集中存放于－20℃冰柜。研究人員對存放的鼻咽癌核心家系標本定期監(jiān)測，記錄入庫時間、存放位置，定期送有條件的實驗室進行后期研究。

1.4 統(tǒng)計學方法 血清學檢測結(jié)果采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計;調(diào)查資料采用EPIDATA軟件錄入，數(shù)據(jù)庫構(gòu)建采取ACCESS數(shù)據(jù)庫。

2 結(jié)果

2.1 鼻咽癌核心家系標本庫的初步建立 本數(shù)據(jù)庫錄入了254個鼻咽癌核心家系，有鼻咽癌先證者254例，其中有鼻咽癌家族史的鼻咽癌核心家系26個，占10.24%;新發(fā)現(xiàn)鼻咽癌3例，有1例家系先證者及父母都為鼻咽癌患者，1例家系先證者及母親一方患有鼻咽癌。26個有鼻咽癌家族史的核心家系，其成員EB-VCA-IgA總陽性率為39.7%，先證者陽性率為84.6%，先證者父母為17.3%。數(shù)據(jù)庫中還包含有鼻咽癌先證者煙酒史、臨床分期及病理結(jié)果分型。

2.2 鼻咽癌核心家系數(shù)據(jù)庫建立完成 本研究的核心家系數(shù)據(jù)庫含有三個數(shù)據(jù)表:①先證者數(shù)據(jù)表，包含字段有先證者ID、姓名、職業(yè)、年齡、民族、籍貫、聯(lián)系方式、病理分期、臨床診斷等;②先證者父母親數(shù)據(jù)表，包含字段有先證者ID、與先證者關(guān)系、姓名、職業(yè)、年齡、民族、籍貫、聯(lián)系方式等;③隨訪結(jié)果數(shù)據(jù)表，包含字段有先證者ID、隨訪時間、隨訪次數(shù)、更新聯(lián)系方式等。在數(shù)據(jù)表的基礎上，含有數(shù)個檢驗單發(fā)布報表以及家系成員數(shù)據(jù)查詢圖，并含有一個數(shù)據(jù)錄入界面用于后期錄入數(shù)據(jù)。

2.3 EB-VCA-IgA總體情況比較 核心家系成員父母與自然人群對照組的EB-VCA-IgA總體情況比較見表1。254個鼻咽癌核心家系成員EB-VCA-IgA陽性率為40.3%，成員中先證者EB-VCA-IgA陽性率為88.2%，先證者父母為16.1%;自然人群對照組的陽性率為8.22%，先證者父母EB-VCA-IgA水平高于自然人群對照組，差異有顯著性(P＜0.01)。核心家系成員中先證者父親、母親總的EB-VCA-IgA陽性率是自然人群的2.15倍。

表1 核心家系先證者父母及對照組的VCA-IgA情況比較 ［n(%)］

2.4 EB-VCA-IgA的具體情況比較 鼻咽癌核心家系先證者父親、母親分別與自然人群對照組的EB-VCA-IgA具體情況比較見表1。核心家系先證者父親與對照組男性EB-VCA-IgA情況比較有顯著性差異(P＜0.01);核心家系先證者母親與對照組女性EB-VCA-IgA情況比較有顯著性差異(P＜0.01);核心家系先證者父親、母親的EB-VCA-IgA陽性率分別是對照組男性、女性的2.26倍、2.00倍。

3 討論

3.1 鼻咽癌家族的聚集現(xiàn)象 鼻咽癌是我國南方常見的惡性腫瘤。眾所周知，EB病毒與鼻咽癌發(fā)病十分密切［2］，EB病毒抗體(VCA/IgA)陽性人群，其鼻咽癌發(fā)病率明顯高于陰性人群［3］，調(diào)查表明廣西鼻咽癌患者EB病毒感染率明顯高于健康人群［4］。在本次研究中先證者父母的EB-VCAIgA陽性率明顯高于正常對照人群，顯示了鼻咽癌家族聚集現(xiàn)象確實存在。鼻咽癌患者及親屬EB病毒感染率明顯高于健康人群，相似的生活環(huán)境、密切接觸可能是此現(xiàn)象的基礎。

3.2 建立鼻咽癌核心家系標本庫存在的問題及解決方案

3.2.1 鼻咽癌數(shù)據(jù)庫的建立經(jīng)驗 以往的基于鼻咽癌核心家系以及高發(fā)家系的研究不少，但是關(guān)于如何組織這些紛繁復雜的家系資料卻未見報道。在本研究中，采集血液樣品及調(diào)查人員按照統(tǒng)一的標準制定鼻咽癌核心家系調(diào)查表、鼻咽癌核心家系登記數(shù)據(jù)庫及鼻咽癌核心家系樣本庫，在數(shù)據(jù)庫中主要包含的一般信息(姓名、職業(yè)、年齡、民族、籍貫、聯(lián)系方式等)為家系后期隨訪提供了先決條件;鼻咽癌核心家系樣本庫存儲的血液樣本都在核心家系數(shù)據(jù)庫中有對應的詳細資料，在數(shù)據(jù)庫中可以通過先證者血液樣本編號查詢先證者臨床治療信息及聯(lián)系方式，并進一步查詢到先證者父母的一般信息。后期的開發(fā)還準備將家系圖譜轉(zhuǎn)變成數(shù)字編碼存儲進數(shù)據(jù)庫，以完善鼻咽癌核心家系標本庫的信息。

3.2.2 家系調(diào)查資料的安全性與保密性 鼻咽癌核心家系原始資料來源于區(qū)內(nèi)各大醫(yī)院，在調(diào)查取樣的同時，應該滿足被調(diào)查者的隱私需求，保證全程沒有他人在場，完全由調(diào)查者獨立完成，后期體檢結(jié)果也由數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)打印，并且密封郵寄給被調(diào)查者。所獲取的體檢資料必須由有權(quán)限的人員來導出、存檔，完全保障了人群資料的安全性、保密性。

3.2.3 鼻咽癌標本庫建立的質(zhì)量控制 保證標本庫內(nèi)樣本資料的真實可靠，一定的質(zhì)量控制必不可少。①鼻咽癌核心家系標本庫的質(zhì)量控制有別于其他的調(diào)查，首先必須要統(tǒng)一對調(diào)查員進行培訓，以提高調(diào)查員工作調(diào)查結(jié)果的真實性，調(diào)查人員必須熟知血樣保存、數(shù)據(jù)庫錄入以及臨床診斷。②標本庫的樣本存放有著嚴格統(tǒng)一的標準，所以必須制定實驗室標準及規(guī)范，提高實驗檢測人員的業(yè)務能力及熟練程度，以減少人為溶血等技術(shù)失誤問題。③對象的選擇必須符合納入排除標準，以保證樣本質(zhì)量。④登記表格現(xiàn)場錄入，現(xiàn)場核查，及時修改、補充，分析資料再經(jīng)“雙人雙錄入核查”、邏輯糾錯等控制數(shù)據(jù)質(zhì)量。⑤根據(jù)廣西壯族自治區(qū)壯族居民較多的特點，調(diào)查取樣人員需要知道一定的地方方言，以減少與研究對象因語言障礙而帶來的信息偏移。⑥征得每位先證者的知情同意，并使患者充分認識到研究對其個人信息及隱私的絕對保護，以獲得研究對象最大程度的配合。

3.3 鼻咽癌核心家系標本庫建立的前景與展望 標本庫構(gòu)建完成之后，血液樣本可以提供分子遺傳學篩選鼻咽癌易感位點。自上個世紀30年代以來，人們逐漸意識到癌癥是一種遺傳性疾?。?］。近期我們對PTEN基因發(fā)點多態(tài)性與鼻咽癌的易感性進行了關(guān)聯(lián)性研究［6］在一個鼻咽癌家系COX7B2基因中共發(fā)現(xiàn)5個新的SNP位點。因此，本研究建立的鼻咽癌核心家系標本庫，通過后期采用PCR-直接測序法篩選基因，為鼻咽癌基于基因的病因?qū)W研究提供了基礎。如果后期研究需要對核心家系成員進行隨訪及資料調(diào)查，一個規(guī)范的數(shù)據(jù)庫給了實驗室研究人員非常大的便利。本研究證實了血液樣本庫對腫瘤病因?qū)W研究的重要性，其數(shù)據(jù)庫開發(fā)、質(zhì)量控制、標本儲藏、取樣隨訪經(jīng)驗為后期針對大量鼻咽癌高危人群建立血液標本庫提供了難得的經(jīng)驗。

綜上所述，本研究建立了一個可供后期鼻咽癌分子病因?qū)W研究所需要的血液標本庫，并建立完善了血液標本相關(guān)的資料數(shù)據(jù)庫，在收集資料的同時我們發(fā)現(xiàn)核心家系先證者父母EB-VCA-IgA抗體陽性率顯著高于正常對照組人群。

［1］ 趙平主編，孔靈芝.鼻咽癌［M］.中國腫瘤死亡報告－全國第三次死因調(diào)查回顧取樣調(diào)查.北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:170－187.

［2］ 秦 嶺，李 齡.鼻咽癌遺傳易感性的分子水平研究進展［J］.醫(yī)學文選，2002，21(1):82－84.

［3］ 曾 希，王承龍.鼻咽癌血清EB病毒IgA檢測的臨床分析［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2010，20(6):879－881.

［4］ Lo KW，To KF，Huang DP.Focus on nasopharyngeal carcinoma［J］.Cancer Cell，2004，(5):423－428.

［5］ 薛開先.癌變的體細胞突變理論回顧與挑戰(zhàn)［J］.癌變畸變突變，2007，19(1):1－3.

［6］ 張小愛，周鋼橋，崔 英，等.PTEN基因多態(tài)性的相關(guān)性研究［J］.解放軍醫(yī)學雜志，2008，33(8):943－946.