韓路，靳學(xué)慧

（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)農(nóng)學(xué)院，大慶163319）

稻瘟病在我省水稻主產(chǎn)區(qū)連年發(fā)生，病害程度逐年上升，嚴(yán)重制約著我省水稻的生產(chǎn)的發(fā)展和農(nóng)民經(jīng)濟(jì)收入的提高[1]。因此，防治水稻稻瘟病的發(fā)生成為農(nóng)業(yè)工作者必須重視的問題。采用施化學(xué)藥劑一直是防治水稻稻瘟病主要的措施，而仿生藥劑嘧菌酯的研發(fā)成功，使傳統(tǒng)意義的化學(xué)農(nóng)藥有了新的突破。嘧菌酯作用機(jī)理：藥劑作用于病原菌線粒體內(nèi)膜上呼吸位點(diǎn)細(xì)胞色素b（cytb），阻礙呼吸作用的電子傳遞，抑制病原菌能量代謝[2]。對于真菌性病原菌的菌絲生長、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)都有很好的抑制作用[3]，目前，已成為代替三環(huán)唑的銷量第一的殺菌劑。先正達(dá)公司最先出嘧菌酯的商品藥劑——阿米西達(dá)，并在國內(nèi)取得蔬菜生產(chǎn)殺菌劑專利，但在美國阿米西達(dá)則是注冊用于水稻稻瘟病的防治。因此實(shí)驗(yàn)用阿米西達(dá)對水稻稻瘟病菌進(jìn)行室內(nèi)的毒力測定，探索用阿米西達(dá)防治水稻稻瘟病，希望為田間防治水稻稻瘟病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

稻瘟病菌93個(gè)菌株，由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 供試藥劑

25%嘧菌酯的阿米西達(dá)，由先正達(dá)公司提供。

1.3 測定方法

1.3.1 菌種的分離純化

將保存在高粱粒培養(yǎng)基上的稻瘟病菌菌種進(jìn)行活化，待高粱粒長滿菌絲后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基平板上，置于25℃恒溫條件培養(yǎng)。待菌落長滿整皿時(shí)，轉(zhuǎn)YPDA培養(yǎng)基上產(chǎn)孢。鏡檢挑單孢培養(yǎng)，得純化菌株。菌落長滿皿后，置于12℃恒溫保存。

1.3.2 藥劑對病原菌菌絲生長速率的影響

配制藥劑母液，母液分別用定量無菌水稀釋成所需濃度，將PDA培養(yǎng)基加熱融化，待其冷卻到40～45℃時(shí)，將配制好的不同濃度的藥液加入適宜溫度的培養(yǎng)基中，制成含不同濃度藥劑的含藥培養(yǎng)基，充分搖勻后移入直徑為9 mm培養(yǎng)皿中制成平板培養(yǎng)基。以等體積無菌水的無藥PDA平板培養(yǎng)基為對照。

用內(nèi)徑為5 mm打孔器制取純化菌株菌餅，分別接種于含不同濃度藥劑的培養(yǎng)基中央，每處理3次重復(fù)。恒溫25℃培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)7 d。采用十字交叉法測量菌落直徑，計(jì)算各藥劑處理對病菌生長的抑制率（抑制率公式如下）。求出毒力回歸方程，計(jì)算藥劑對病原菌的有效中濃度EC50。分析比較不同濃度下殺菌劑對供試菌株的菌絲生長速率的影響并建立敏感基線[4]。

1.3.3 藥劑對病原菌孢子的抑制作用

用阿米西達(dá)配制含藥PDA平板培養(yǎng)基，藥劑濃度為4.64μg·mL-1。將純化菌株進(jìn)行產(chǎn)孢培養(yǎng)13 d后，無菌水沖洗下孢子，紗布濾掉菌絲，定量取孢懸液平涂于含藥培養(yǎng)基上，以無藥培養(yǎng)基作為對照。產(chǎn)孢培養(yǎng)，每隔12～24 h觀察孢子萌發(fā)情況，查孢子數(shù)量，計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率，DPS軟件做LSD測驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥劑對病原菌菌絲生長速率的抑制

室內(nèi)測定結(jié)果表明，阿米西達(dá)對稻瘟病菌菌絲的生長有較強(qiáng)的抑制作用，但不同菌株對阿米西達(dá)的敏感程度有明顯差異，BQBE-2的 EC50值11.3μg·mL-1是供試菌株中最不敏感菌株；HLYD的EC50值2.18μg·mL-1是供試菌株中最敏感。供試93個(gè)菌株的平均有效抑制中濃度（EC50）為4.64μg·mL-1（表1）。根據(jù)病原菌對藥劑的抗藥性分級標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)中所測得黑龍江省稻瘟病菌均對阿米西達(dá)敏感，抗藥性指數(shù)在0.469 6～2.443 4之間（如表1）。黑龍江省各地的主要稻作區(qū)稻瘟病菌對阿米西達(dá)的抗性指數(shù)均在3以下，沒有出現(xiàn)抵抗或高抗菌株。通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析，在黑龍江省哈爾濱、佳木斯、雞西、雙鴨山、鶴崗、綏化、大慶和牡丹江各市中，沒有出現(xiàn)對阿米西達(dá)有明顯抗藥性的稻瘟病菌菌株。但是阿米西達(dá)對黑龍江省不同地區(qū)稻瘟病菌的抑制中濃度EC50存在一定差異。

表1 阿米西達(dá)對稻瘟病菌菌絲生長的影響（EC50/μg·m L-1）Table 1 Azoxystrobin to the influence of Magnaporthe grisea hypha growth

續(xù)表1 阿米西達(dá)對稻瘟病菌菌絲生長的影響（EC50/μg·m L-1）Table 1 Azoxystrobin to the influence of Magnaporthe grisea hypha growth

實(shí)驗(yàn)中共測得黑龍江省稻作區(qū)93個(gè)稻瘟病菌菌株的有效抑制中濃度EC50。并以測得的EC50值為依據(jù)。從0μg·mL-1開始，1μg·mL-1為截距，在0～12μg·mL-1范圍內(nèi)，EC50在截距的出現(xiàn)頻率，最后做出EC50的頻率分布圖（如圖1）。圖1中，黑龍江省各稻瘟病菌菌株對阿米西達(dá)的敏感性頻率分布曲線呈現(xiàn)為連續(xù)單峰曲線，沒有出現(xiàn)敏感性下降的抗藥性亞群體。因此，實(shí)驗(yàn)所測的93個(gè)稻瘟病菌菌株對阿米西達(dá)只有一個(gè)敏感水平，可以用這93個(gè)供試菌株的平均有效抑制中濃度（EC50值）作為黑龍江省稻瘟病菌對阿米西達(dá)進(jìn)行田間抗藥性監(jiān)測的敏感基線[5]，得出黑龍江省稻瘟病菌對阿米西達(dá)的敏感基線值為4.64μg·mL-1。

圖1 黑龍江省供試稻瘟病菌菌株對阿米西達(dá)敏感性頻率分布圖Fig.1 The frequency distribution of Magnaporthe grisea in Heilongjiang to Azoxystrobin

2.2 藥劑對病原菌產(chǎn)孢量的抑制

在阿米西達(dá)濃度為4.64μg·mL-1（有效抑制中濃度）時(shí)，對稻瘟病菌產(chǎn)孢量有較明顯的抑制作用，但不同菌株對其敏感性存在明顯差異。與無藥空白對照相比，菌株ZYWD、BLDJ-2、FZTH和SHAA-3對阿米西達(dá)較為敏感，產(chǎn)孢量明顯減少，其抑制率分別為 97.73%、89.16%、88.37%和 87.87%；而菌株HGDH-5、FJCY、BQBE-1、BYYF-2、FJJQ-4和PKQY對阿米西達(dá)較不敏感，產(chǎn)孢量較少，其抑制率在60%以下（表2）。

阿米西達(dá)濃度為4.64μg·mL-1時(shí)，對稻瘟病菌孢子萌發(fā)有較強(qiáng)抑制作用，但不同菌株對其敏感性仍存在明顯差異。與無藥空白對照相比，菌株ZYWD、SHAA-3、FZTH和BLDJ-2對阿米西達(dá)最為敏感，其抑制率在81.91%～96.35%；菌株HGDH-5、BQBE-1和FJCY對阿米西達(dá)較為敏感，其抑制率在63.18%～72.83%；菌株FJJQ-4、PKQY和BYYF-2對阿米西達(dá)較不敏感，其抑制率在60%以下（表2）。

表2 阿米西達(dá)對稻瘟病菌株產(chǎn)孢量和孢子萌發(fā)的影響（阿米西達(dá)濃度為4.64μg·m L-1）Table 2 The influence of Magnaporthe grisea spore to Azoxystrobin（Azoxystrobin4.64μg·mL-1）

以上結(jié)果說明阿米西達(dá)既能抑制稻瘟菌菌絲生長又能抑制孢子萌發(fā)，對孢子產(chǎn)生和孢子致病力等都有顯著的影響。這表明阿米西達(dá)在稻瘟菌整生長過程中都起到抑制的作用，不僅抗真菌侵入、抗真菌擴(kuò)展，而且能明顯地降低再侵染和初侵染的孢子基數(shù)并達(dá)到防治病害的目的。

3 結(jié)論與討論

水稻稻瘟病在我省危害日益嚴(yán)重，選擇新型藥劑是除了培育新抗病品種的更好選擇[6]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，阿米西達(dá)對水稻稻瘟病菌的菌絲生長、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)有一定的抑制作用，但不同菌株對阿米西達(dá)的敏感性存在明顯差異。供試稻瘟病菌株對阿米西達(dá)全部抗性指數(shù)在3以下，說明稻瘟病菌對阿米西達(dá)是較敏感的。通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，對黑龍江省稻瘟病菌而言，阿米西達(dá)田間抗藥性監(jiān)測的敏感基線值為4.64μg·mL-1。在阿米西達(dá)濃度為4.64μg·mL-1時(shí)，能有效地抑制病菌的菌絲生長、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)，其中敏感菌株的產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)的抑制率能達(dá)到90%以上，由此可以看出阿米西達(dá)對水稻稻瘟病病菌有很好的抑制效果。

［1］靳學(xué)慧，馬匯泉.農(nóng)業(yè)植物病理學(xué)（糧食作物和經(jīng)濟(jì)作物部分）［M］.赤峰：內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，1999.

［2］張傳清，周明國，朱國念.稻瘟病化學(xué)防治藥劑的歷史沿革與研究現(xiàn)狀［J］.農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2009，11（1）：72-80.

［3］王麗，石延霞，李聚寶，等.甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑研究進(jìn)展［J］.農(nóng)藥科學(xué)與管理，2008，29（9）：24-27.

［4］方中達(dá).植病研究法［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1979.

［5］張舒亞，周明國，李紅霞，等.嘧菌酯對稻瘟病菌的生物活性［J］.農(nóng)藥，2005，44（6）：275-277.

［6］楊明志.譚勇.稻瘟病發(fā)生的主要原因及防治技術(shù)要點(diǎn)［J］.中國農(nóng)村小康科技，2008（4）：58.

［7］思彬彬，楊卓.甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑作用機(jī)理研究進(jìn)展［J］.世界農(nóng)藥，2007，29（6）：5-8.