劉蘭華 (泰興市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,江蘇泰興225400)

宮頸癌發(fā)病率居女性生殖器惡性腫瘤首位,近年來年輕宮頸癌患者有明顯增加趨勢,其死亡原因多是腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)。近年來雖然應(yīng)用包括基因治療在內(nèi)的各種療法,但效果都不盡理想。研究者一致認為治療的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是找到觸發(fā)其發(fā)生發(fā)展的始動因素,采取針對性靶向治療。在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中,多個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的改變都發(fā)揮著作用,目前倍受關(guān)注的是Wnt/β-連環(huán)蛋白 (β-Catenin)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。此途徑的改變在大腸癌發(fā)生中的作用已較明確,在其他惡性腫瘤如肝癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、前列腺癌、甲狀腺癌、腎母細胞瘤中的改變也顯示出重要意義,研究表明此途徑改變可能是腫瘤發(fā)生的共同途徑[1]。因此,深入了解該途徑的特點及其在宮頸癌中的變化對于宮頸癌的靶向治療研究具有重要的意義。通過觀察β-Catenin在正常宮頸—宮頸上皮內(nèi)瘤樣變—宮頸鱗癌中的表達變化,有利于發(fā)現(xiàn)其在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 對象與方法

1.1 對象

收集泰興市人民醫(yī)院2007年8月至2008年12月間宮頸鱗癌標本30例,患者年齡30～64歲,中位年齡43.5歲,手術(shù)方式主要為宮頸癌根治術(shù)+盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)。根據(jù)2000年再次修訂后的國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟 (FIGO)提出的分期標準進行臨床分期,Ⅰ期19例,Ⅱ期11例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例;病理分級,Ⅰ級7例,Ⅱ級14例,Ⅲ級9例。同期宮頸上皮內(nèi)瘤樣變50例,患者年齡26～59歲,中位年齡41.2歲,其中CINⅠ16例、CINⅡ15例、CINⅢ19例。同時選取子宮肌瘤全子宮切除后的正常宮頸組織24例作為對照組 (術(shù)前宮頸外觀光滑且宮頸薄層液基細胞學(xué)檢查正常),患者年齡36～55歲,中位年齡44.5歲。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色 標本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定,制作臘塊。標本臘塊以4μ m連續(xù)切片,用防脫片劑多聚賴氨酸處理過的載玻片撈片,置烤箱60℃,120min;切片常規(guī)脫蠟,PBS洗 3次×3min;根據(jù)每一種抗體的要求,對組織抗原進行相應(yīng)修復(fù),本實驗中兩個指標均采用高壓鍋加熱修復(fù),室溫自然冷卻后,PBS洗3次×3min;滴加按一定濃度稀釋的一抗0.05ml(β-Catenin鼠抗人單克隆抗體購自北京中山金橋生物技術(shù)有限公司,即用型),4℃冰箱孵育過夜;冷PBS洗3次×3min,滴加即用型廣譜二抗0.05ml,室溫孵育30min;冷PBS洗3次×3min,DAB顯色;蘇木素輕度復(fù)染,自來水返藍15min,逐級脫水,透明,封片。

1.2.2 結(jié)果判斷標準及方法 每例在顯微鏡下隨機選擇10個高倍鏡視野 (×400),每個視野各計數(shù)100個宮頸鱗形上皮細胞觀察,β-Catenin染色判斷標準按照Richmond等[2]的方法:以正常組織細胞上皮細胞染色強度和方式為對照,正常組織細胞β-Catenin表達呈清晰的棕黃色染色,陽性染色主要定位于細胞-細胞連接處的細胞膜,如大于或等于90%的腫瘤細胞與正常粘膜上皮細胞免疫染色相同,則為陽性表達;如陽性染色腫瘤細胞數(shù)少于90%或出現(xiàn)異位性表達(細胞質(zhì)著色或胞核著色),則為陰性表達。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

計數(shù)資料采用四格表χ2檢驗或Fisher確切概率法檢驗,應(yīng)用SPSS統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 β-Catenin在各組織中的表達

正常宮頸上皮β-Catenin表達呈清晰的棕黃色,陽性表達率為87.5%(21/24),陽性表達主要定位于細胞膜,僅少數(shù)標本有極弱細胞質(zhì)染色 (3/24),未見細胞核表達;宮頸上皮內(nèi)瘤樣變β-Catenin陽性表達率為58.0%(29/50),陰性表達21例中多數(shù)為細胞質(zhì)表達 (19/21),少數(shù)標本 (CINⅢ中的2例)有核染色 (2/21);宮頸鱗癌β-Catenin陽性表達率僅6.7%(2/30),陰性表達28例中細胞質(zhì) (12/28)和細胞核 (20/28)表達明顯增加,有2例同時有胞漿和胞核表達,結(jié)果顯示正常宮頸組織與宮頸上皮內(nèi)瘤樣變 (P＜0.05)、宮頸鱗癌 (P＜0.01)β-Catenin陽性表達率的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,宮頸上皮內(nèi)瘤樣變與宮頸鱗癌β-Catenin陽性表達率比較亦有統(tǒng)計學(xué)差異 (P＜0.01)。

2.2 β-Catenin在不同病理分級CIN中的表達

β-Catenin陽性表達率在CINⅠ級中為87.5%(14/16),CINⅡ級中為40.0%(6/15),CINⅢ級中為47.4%,(9/19),三者比較無統(tǒng)計學(xué)差異,但表達中顯示CINⅠ級組與CINⅡ-CINⅢ組二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05),即宮頸癌前病變中β-Catenin的陰性表達在低度病變 (CINⅠ)與高度病變 (CINⅡ-CINⅢ)中存在明顯差異 (P＜0.05),在低級別上皮內(nèi)瘤樣變的宮頸組織中,β-Catenin主要表達于細胞膜 (14/16),僅有 2例在細胞漿表達,無細胞核表達,在高級別上皮內(nèi)瘤樣變中,β-Catenin陰性表達明顯增高,陰性表達病例主要表達于細胞質(zhì) (13/15),僅有2例存在細胞核表達。

2.3 β-Catenin與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

在宮頸浸潤癌病例中,β-Catenin陽性表達率與患者年齡、組織分化程度、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期無關(guān) (P＞0.05),見表1。

3 討 論

本研究結(jié)果顯示,正常宮頸粘膜β-Catenin主要為陽性表達,表達于細胞膜,而宮頸上皮內(nèi)瘤變胞質(zhì)主要為陰性表達,宮頸癌主要為胞質(zhì)/胞核陰性表達,三者陰性表達率分別為 12.5%、42.0%、93.3%,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)。在低級別上皮內(nèi)瘤樣變的宮頸組織中,β-Catenin主要為陽性表達,在高級別上皮內(nèi)瘤樣變及宮頸癌中,β-Catenin陰性表達明顯增高,宮頸癌多伴有細胞膜表達缺失,提示β-Catenin從胞膜到胞核的表達變化參與了宮頸癌的發(fā)生,可能是宮頸癌發(fā)生的早期事件。HAO等[3]以免疫組化方法發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸瘤、瘤旁正常黏膜和癌變組織有不同程度的β-Catenin表達,正常粘膜為胞膜陽性表達,腺癌和癌組織有不同程度的胞質(zhì)和胞核陰性表達,陰性表達程度隨上皮異型增生程度的增高而增高。Pirinen等[4]對261例手術(shù)切除非小細胞肺癌的研究顯示,β-連環(huán)蛋白的陰性表達與腫瘤組織發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),上述研究結(jié)論均與本研究相符。

Correa[5]的流行病學(xué)和組織病理學(xué)研究顯示,宮頸癌的演變過程從異型增生到浸潤性癌是一個連續(xù)的組織學(xué)事件,根據(jù)此模式,宮頸上皮異型增生與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。早期宮頸癌中,40%～100%與中至重度異型增生相關(guān),提示異型增生可能導(dǎo)致宮頸癌形成[6]。本研究低級別上皮內(nèi)瘤變CIN中β-Catenin細胞膜陽性表達率87.5%,高級別上皮內(nèi)瘤變CIN中β-Catenin陽性表達率降至55.8%,陰性表達主要在細胞質(zhì),宮頸浸潤鱗癌β-Catenin陽性表達僅6.7%,高分化鱗癌陰性表達主要于細胞質(zhì),中、低分化鱗癌陰性表達主要于細胞質(zhì)和細胞核。提示β-Catenin的表達變化在一定程度上反映了宮頸上皮組織的惡變程度,高級別上皮內(nèi)瘤變CIN在一定程度上己具備宮頸癌的某些特征。

上述研究表明,在正常宮頸粘膜—宮頸CIN—宮頸癌組織中,β-Catenin異常表達呈顯著正相關(guān),檢測β-Catenin的表達情況可能有助于早期宮頸癌的診斷,但具體機制仍待進一步研究。

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