徐兵 李同明 格桑達(dá)娃 王慧（①山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 泰安 271018 ②濰坊大衛(wèi)動(dòng)物科學(xué)研究所 西藏自治區(qū)畜牧總站）

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雞源性大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

徐兵①②李同明①**格桑達(dá)娃③王慧①*（①山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 泰安 271018 ②濰坊大衛(wèi)動(dòng)物科學(xué)研究所 ③西藏自治區(qū)畜牧總站）

對(duì)濰坊地區(qū)雞源性菌株進(jìn)行分離鑒定和藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明，分離得到的菌株屬大腸桿菌；藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：該菌株對(duì)頭孢噻肟、磷霉素、氟苯尼考、頭孢曲松和多粘菌素高敏，對(duì)環(huán)丙沙星中敏，對(duì)諾氟沙星、紅霉素和氨芐西林不敏感。

雞 致病性 大腸桿菌病 藥敏試驗(yàn)

雞大腸桿菌病(Chicken colibacillosis)是由大腸桿菌(Escherichia coli，E.coli)中某些致病菌株引起的雞體局部或全身性感染的疾病[1]。在各地雞場(chǎng)時(shí)有發(fā)生，對(duì)抗生素的耐藥性也越來越強(qiáng)[2]。為控制大腸桿菌病，雞場(chǎng)常在飼料中添加抗生素，又反過來使越來越多的細(xì)菌呈現(xiàn)多重耐藥，且耐藥水平越來越高，給雞大腸桿菌病的防治帶來極大困難[3-5]。大腸桿菌的抗原構(gòu)造復(fù)雜和血清型極多。不同血清型之間缺乏交叉免疫作用，因此，用單一血清型菌制成的滅活疫苗并不能預(yù)防各種不同血清型菌引起的大腸桿菌病。大腸桿菌病型復(fù)雜。病原與某些血清型有關(guān)，不同的部位可分離到不同血清型的菌株，而不同的血清型菌株可引起不同的癥狀，且易與慢性呼吸道病、新城疫、傳染性支氣管炎、傳染性法氏囊病、葡萄球菌病、組織滴蟲病或球蟲病并發(fā)或繼發(fā)。臨床診斷必須做好類癥鑒別，分清是原發(fā)還是繼發(fā)或并發(fā)[5]。大腸桿菌易出現(xiàn)耐藥株。因此，用藥時(shí)最好進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，并交替使用各種抗大腸桿菌的藥物[3]。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng) 采用常規(guī)法將細(xì)菌病料接種于麥康凱培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)18~24 h。挑取單個(gè)菌落，于普通瓊脂平板上進(jìn)行純培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)18~24 h。挑取單菌落，進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。

1.2 生化試驗(yàn) 取待檢菌純培養(yǎng)物分別接種在蛋白胨水、緩沖蛋白胨水、枸櫞酸鹽、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素瓊脂、三糖鐵瓊脂、半固體瓊脂培養(yǎng)基上，置37℃恒溫箱中，培養(yǎng)18~24h，觀察結(jié)果。

1.3 藥敏試驗(yàn) 將麥糠凱培養(yǎng)基上認(rèn)定的大腸桿菌菌落，無菌環(huán)境下以接種環(huán)挑出，均勻涂布在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，同時(shí)等距離放置若干種藥敏片。置恒溫箱中培養(yǎng)24h。測(cè)量各藥敏片的抑菌圈范圍，減去其標(biāo)準(zhǔn)抑菌范圍，其抑菌圈越大的即為敏感藥物。選用的藥敏片有：鏈霉素、氨芐西林、克林霉素、氟哌酸、紅霉素、環(huán)丙沙星、青霉素、氧氟沙星、強(qiáng)力霉素、慶大霉素、諾氟沙星、頭孢唑啉、頭孢噻呋、卡那霉素、阿米卡星、壯觀霉素等。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定結(jié)果 在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上經(jīng)過37℃培養(yǎng)18~24h，革蘭氏染色后，鏡下可見大量散在的紅色、中等大小、兩端鈍圓的無芽孢直桿菌[4]。初步斷定為大腸桿菌。分離菌株生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇，產(chǎn)酸。尿素酶試驗(yàn)陰性，不產(chǎn)生H2S，有鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，分離菌株符合大腸桿菌的生化特性，證實(shí)確為大腸桿菌。

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 經(jīng)過藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該次分離的大腸桿菌對(duì)環(huán)丙沙星中度敏感，對(duì)諾氟沙星、紅霉素和氨芐西林不敏感。而頭孢噻肟、磷霉素、氟苯尼考、頭孢曲松和多粘菌素等抗生素具有很好的抗菌效果，分離菌對(duì)其耐藥率低于10%。

3 討論

大腸桿菌易對(duì)抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性，必須通過藥敏試驗(yàn)篩選敏感藥物進(jìn)行治療，才能達(dá)到較好效果[5]。雞大腸桿菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果有時(shí)與臨床療效不一致，常出現(xiàn)敏感藥物無效、而不敏感藥物有效的情況，分析引起這種現(xiàn)象的原因：第一，雞大腸桿菌非原發(fā)病原，而是繼發(fā)感染。一般藥敏試驗(yàn)分離培養(yǎng)只能培養(yǎng)出需氧菌，而一些特殊細(xì)菌以及病毒等無法培養(yǎng)，若這類細(xì)菌、病毒是主要致病因素，藥敏結(jié)果與臨床效果會(huì)出現(xiàn)差異。第二，體內(nèi)、體外環(huán)境不一致，大腸桿菌可以利用某些體內(nèi)物質(zhì)生成抵抗抗生素的成分，導(dǎo)致抗生素失效，從而出現(xiàn)體外敏感而體內(nèi)耐藥的情況。第三，藥敏試驗(yàn)操作的影響。采集病料的部位、藥敏紙片或藥物濃度的變化、細(xì)菌培養(yǎng)條件不達(dá)標(biāo)等都會(huì)造成假陰性。

搞好飼養(yǎng)管理，防重于治?？刂坪脺囟?、濕度、光照、通風(fēng)換氣、適時(shí)分群、減少不良刺激、防應(yīng)激、加強(qiáng)飼料保管以防霉變和污染、飼喂時(shí)少添勤添、定期清洗水箱和供水管道、飲水器、及早發(fā)現(xiàn)病雞、隔離治療、不用患大腸桿菌病雞群的種蛋、孵化時(shí)要嚴(yán)格按規(guī)程消毒、保持雞群的整齊度、定期給雞舍消毒、做好人員、車輛和其他環(huán)節(jié)的疾病防范措施、病死雞要焚燒、深埋。雞群發(fā)生大腸桿菌病時(shí)，如能緊急注射有效疫苗則能很快控制疫情。用本場(chǎng)分離的菌株制備自場(chǎng)疫苗，也會(huì)得到較好的效果[2]。

[1]裴建武, 甘孟侯. 雞致病性大腸桿菌研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 1997, 17(2): 207-208.

[2] 崔保安, 盧中華, 毛春生. 雞大腸桿菌病的危害及防治[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué), 1992, 6: 33-35.

[3] 馬全理, 張福泉, 郝相正, 岳桂玲. 幾種類型雞大腸桿菌病的防制對(duì)策[J]. 山東家禽, 2003, 2: 36-37.

[4] 李慧, 王雨薇. 雞源性致病性大腸桿菌的分離鑒定[J]. 畜牧獸醫(yī)科技信息, 2010, 11: 14-15.

[5] 馬自榮, 毛航平. 肉仔雞大腸桿菌病的診治[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志, 2009, 28(6): 84-85.

（2011–04–19）

山東省農(nóng)業(yè)良種工程課題資助。山東農(nóng)業(yè)大學(xué)博士后流動(dòng)站研究經(jīng)費(fèi)資助。

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