裴新紅，王 芳，于 湛

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，鄭州 450052)

2003年6月～2006年11月，我們采用免疫組化法檢測(cè)了新的絲氨酸蛋白酶抑制劑基因(Maspin)蛋白、尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)在人乳腺癌組織中的表達(dá)，旨在進(jìn)一步探討乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇我院手術(shù)切除的乳腺癌組織標(biāo)本79份(乳腺癌組)，均為女性，年齡32～67(47.1±11.33)歲。均經(jīng)病理證實(shí)，且術(shù)前均未行放化療。其中浸潤(rùn)性乳腺癌53例，非浸潤(rùn)性乳腺癌26例。另選乳腺纖維腺瘤組織標(biāo)本31份(腺瘤組)、正常乳腺組織標(biāo)本34份(正常組)，三組一般資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。主要試劑:鼠抗人Maspin單克隆抗體(英國(guó)Neomarkers公司)，兔抗人uPA多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.2 Maspin、uPA表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化SP法，試驗(yàn)步驟均按試劑盒說明書進(jìn)行。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):Maspin以胞質(zhì)和(或)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒為陽性細(xì)胞，高倍鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)視野約1000個(gè)細(xì)胞或低倍鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)視野約4000個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞，＜25%為陰性(-)，25% ～50%為弱陽性(±)，51% ～75%為陽性(+)，＞75%為強(qiáng)陽性(++)［1］。uPA以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒為陽性細(xì)胞，同上法觀察計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)，＜10%為陰性(-)，≥10%為陽性。對(duì)二者的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Spearman相關(guān)性分析法分析Maspin和uPA表達(dá)的相關(guān)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Maspin、uPA表達(dá) 乳腺癌組、腺瘤組、正常組Maspin蛋白的陽性表達(dá)率分別為30.4%、67.7%、97.1%，乳腺癌組、腺瘤組明顯低于正常組，乳腺癌組明顯低于腺瘤組(P均＜0.05);uPA陽性表達(dá)率分別為 64.5、32.2%、26.5%，乳腺癌組、腺瘤組明顯高于正常組，乳腺癌組明顯高于腺瘤組(P均＜0.05)。

2.2 相關(guān)性分析 乳腺癌組織中Maspin蛋白表達(dá)與 uPA 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.776，P=0.000)。

3 討論

Maspin基因是1994年Zon等用減數(shù)雜交技術(shù)對(duì)正常乳腺組織和乳腺癌組織進(jìn)行比較時(shí)發(fā)現(xiàn)的，證實(shí)其為新的絲氨酸蛋白酶抑制劑基因。文獻(xiàn)報(bào)道，Maspin在正常乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)有表達(dá)，但在大多數(shù)乳腺腫瘤細(xì)胞系中不表達(dá)，提示Maspin基因與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)［2］。Maspin主要定位于細(xì)胞質(zhì)，也可定位于細(xì)胞表面［3］。Shi等將Maspin基因表達(dá)上調(diào)的轉(zhuǎn)基因小鼠與WAP-SV40T抗原小鼠雜交，證實(shí)這種二次雜交小鼠腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移明顯降低。邵志敏等［4］發(fā)現(xiàn)，乳腺肌上皮細(xì)胞分泌大量的Maspin蛋白，去除 Maspin后的人類肌上皮 HMS-1CM不再具有抑制乳腺癌細(xì)胞體外浸潤(rùn)的能力，提示Maspin蛋白在乳腺肌上皮細(xì)胞抑制乳腺癌細(xì)胞體外浸潤(rùn)能力方面起重要作用。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組、腺瘤組明顯低于正常組，提示Maspin作為腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移潛能的抑制因子在乳腺癌中表達(dá)的缺失，可用于乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)［5］。

人uPA基因位于第10號(hào)染色體上，長(zhǎng)度為7258 bp，由11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子組成，成熟的mRNA 長(zhǎng)度為 2.4 kb［6］。uPA 是一種似纖溶酶的絲氨酸蛋白水解酶，由腫瘤細(xì)胞或其他細(xì)胞分泌，主要作用于生理病理?xiàng)l件下的細(xì)胞遷移和組織修復(fù)。本研究乳腺癌組、腺瘤組明顯高于正常組，提示uPA在腫瘤增殖與腫瘤復(fù)制過程中具有指示意義，可用于腫瘤早期的診斷，在腫瘤的診治過程中具有重要的臨床意義。本研究還發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中Maspin蛋白表達(dá)與uPA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示Maspin在乳腺癌中具有抑制腫瘤的作用。

Maspin低表達(dá)和uPA高表達(dá)在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，檢測(cè)Maspin、uPA的表達(dá)水平可用于乳腺癌病情及預(yù)后的判斷。

［1］丁耘峰，馮一中，平金良.Maspin在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床病理意義［J］.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2007，27(3):396-398.

［2］Luppi M，Morselli M，Bandieri E，et al.Sensitive detection circulating breast cancer cells by reverse transcriptase polymerase chain reaction of maspin gene［J］.Ann Oncol，1996，7(6):619-624.

［3］Blacque OE，Worrall DM.Evidence for a direct interaction between the tumor suppressor serpin，maspin，and typesⅠ andⅢ collagen［J］.Biol Chem，2002，277(13):10783-10788.

［4］邵志敏，沈鎮(zhèn)宙.乳腺肌上皮細(xì)胞抑制乳腺癌細(xì)胞體外浸潤(rùn)能力的研究［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，1999，79(3):214-216.

［5］Cher ML，Biliran HR Jr，Bhagat S，et al.Maspin expression inhibits osteolysis，tumor growth，and angiogenesis in a model of prostate caner bone metastasis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2003，100(13):7847-7852.

［6］Andreasen PA，Kjoller L，Christensen L，et al.The urokinase-type plasminogen activator system in cancer metastasis［J］.Int J Cancer，1997，72(1):1-22.