韓小東 張正祥 任光友 張貴林 延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床系 (延安 716000)

骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis,OP)的病因病理復(fù)雜,目前臨床應(yīng)用的各種防治骨質(zhì)疏松的藥物均不能達(dá)到理想的治療效果。淫羊藿具有溫腎壯陽(yáng),強(qiáng)筋骨,祛風(fēng)濕的功效。其復(fù)方制劑被廣泛用于抗 OP的治療。淫羊藿品種繁多,柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim.EPM)為《中國(guó)藥典》收載的正品藥材[1]。單純 EPM抗 O P作用研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本課題觀察了 EPM去卵巢小鼠骨密度、破骨細(xì)胞和 IL-1β的影響,為 EPM的開(kāi)發(fā)利用提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與藥物 昆明種小鼠,雌性,體重 20～ 22g,由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供。柔毛淫羊藿,07年 7月采自四川省中江縣,由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所鑒定。1g浸膏相當(dāng)于生藥量 6.28g。己烯雌酚(DES):合肥久聯(lián)制藥有限公司。兔抗鼠 IL-1 β多克隆抗體 (IL-1β),購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 模型制備與實(shí)驗(yàn)分組 用 0.4%戊巴比妥鈉按 40mg? kg-1體重腹腔注射麻醉小鼠,相對(duì)無(wú)菌條件下摘除雙側(cè)卵巢,關(guān)閉腹腔。對(duì)照組動(dòng)物同法摘除卵巢旁同樣大小的脂肪組織。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共分為 6組:對(duì)照組 (蒸餾水 10mL? kg-1)、模型組(蒸餾水 10mL? kg-1)、DES組 (2mg? kg-1)、 EPM 高 劑量 組(200mg? kg-1)、EPM 中劑量組(100mg? kg-1)、EPM低劑量組(50mg? kg-1),每組 14只。造模后 45d,各組動(dòng)物按上述劑量灌胃給藥,每日 1次,連續(xù) 60d。

1.3 觀察指標(biāo)及檢驗(yàn)方法 停藥次日,以戊巴比妥鈉麻醉小鼠,用密度儀測(cè) BM D。用 BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行骨組織破骨細(xì)胞數(shù)及免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行分析,IL-1β染色陽(yáng)性以單核巨噬細(xì)胞和破骨細(xì)胞胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒狀染色為標(biāo)準(zhǔn)。每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)選取 9個(gè)視野,取其均值。

2 結(jié) 果 2.1 EPM對(duì) OP小鼠 BMD的影響 與對(duì)照組比較,模型組動(dòng)物的脊柱 BMD和全身骨密度明顯降低(P＜0.05,P＜0.01),與模型組比較,EPM高、中、低劑量組小鼠脊柱和全身骨密度均明顯升高 (P＜0.05,P＜0.01),見(jiàn)表 1。

表1 EPM對(duì) O P小鼠 BMD的影響(±s,n=14)

表1 EPM對(duì) O P小鼠 BMD的影響(±s,n=14)

與對(duì)照組組比較 △P＜0.05,▲ P＜0.01;與模型組比較? P＜0.05,▲ P ＜ 0.01(下同 )。

組別 劑量(mg/kg) 脊柱骨密度(g?cm-2)全身骨密度(g?cm-2)對(duì)照 — 0.087± 0.005 0.243±0.089模型 — 0.076±0.004△0.149± 0.026▲DES 2 0.097± 0.008▲ 0.199± 0.048▲EPM 高劑 量 200 0.087± 0.007▲ 0.241± 0.129?EPM中劑量 100 0.086± 0.007▲ 0.236± 0.077▲EPM低劑量 50 0.090± 0.021? 0.233± 0.095▲

2.2 EPM對(duì) OP小鼠骨組織破骨細(xì)胞數(shù)的影響

與對(duì)照組比較,模型組動(dòng)物的破骨細(xì)胞數(shù)明顯增加(P＜0.05,P＜0.01);與模型組比較 ,EPM高、中、低劑量組動(dòng)物的破骨細(xì)胞數(shù)明顯減少(P＜0.05,P＜0.01),見(jiàn)表 2。

表2 EPM對(duì) OP小鼠骨組織破骨細(xì)胞數(shù)的影響(± s、n=14)

表2 EPM對(duì) OP小鼠骨組織破骨細(xì)胞數(shù)的影響(± s、n=14)

組別 對(duì)照 模型 DES EM P高劑量 EMP中劑量 EM P低劑量劑量(mg/kg) — — 2 200 100 50 OC數(shù) (個(gè) /0.4nm2) 1.6± 0.7 3.4± 1.6△ 1.1± 0.5▲ 1.9± 1.003? 0.9± 0.6▲ 0.8±0.4▲

2.3 對(duì) IL-1β的影響

與對(duì)照組比較 ,模型組動(dòng)物的 IL-1 β表達(dá)明顯增加(P＜0.01);與模型組比較,EPM 高、中、低劑量組動(dòng)物的 IL-1β表達(dá)明顯降低(P＜0.05,P＜0.01),見(jiàn)表 3。

表3 EPM對(duì) IL-1β的影響

3 討 論 去卵巢復(fù)制 OP的模型與絕經(jīng)后和切除卵巢的 OP患者之病理過(guò)程極為相近[2]。在骨重建過(guò)程中,骨的吸收和骨的形成都要受到多種因素的調(diào)控,以保持二者的平衡[3]。破骨細(xì)胞在骨重建過(guò)程中,扮演了骨吸收的重要角色。它來(lái)源于骨髓造血干細(xì)胞[4,5],是負(fù)責(zé)骨吸收的功能細(xì)胞,一些抑制骨吸收的因子如雌激素等,能夠誘導(dǎo)破骨細(xì)胞(OC)的凋亡[6,7]。破骨細(xì)胞在骨基質(zhì)上的水平提高,會(huì)使得骨吸收大于骨形成,從而導(dǎo)致 OP。EPM使破骨細(xì)胞數(shù)降低,成骨細(xì)胞及骨細(xì)胞數(shù)明顯增加,使骨重建過(guò)程中的骨形成大于骨吸收,有益于 OP的治療。IL-1是雌激素缺乏時(shí)骨丟失的重要的誘發(fā)因子之一[8],IL-1的含量在骨髓局部微環(huán)境中的升高以及活性增加,會(huì)刺激骨髓單核細(xì)胞向破骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化,使破骨細(xì)胞的數(shù)目增多,骨吸收活性增強(qiáng)[8～10]。 OP發(fā)生后,骨微環(huán)境中白介素 1β的相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)被破壞,打破骨改建活動(dòng)的內(nèi)在平衡,引起骨代謝活動(dòng)的紊亂導(dǎo)致 O P[11]。試驗(yàn)中,IL-1 β主要表達(dá)于去卵巢小鼠骨髓基質(zhì)的單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞中,這與鄧廉夫等[12,13]的報(bào)道一致。EPM使骨組織中 IL-1的表達(dá)降低。

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