蚌埠學(xué)院生物與食品工程系 汪張貴 閆利萍

揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 王志躍* 龔道清 楊海民

近年來(lái)，隨著我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的飛速發(fā)展，核黃素缺乏癥的發(fā)病率越來(lái)越高，造成危害日益嚴(yán)重。核黃素缺乏癥是一種群發(fā)性代謝病，發(fā)病率高，死亡率高低不等。根據(jù)動(dòng)物免疫系統(tǒng)發(fā)育的規(guī)律，調(diào)整動(dòng)物特別是幼齡動(dòng)物的核黃素營(yíng)養(yǎng)素需要量，提高動(dòng)物的抗病力和抗應(yīng)激力，使動(dòng)物處于最佳的生產(chǎn)性能和免疫狀態(tài)是切實(shí)可行的。但目前有關(guān)核黃素與畜禽免疫功能相關(guān)的研究存在很多不足，導(dǎo)致飼養(yǎng)生產(chǎn)實(shí)際對(duì)核黃素的科學(xué)應(yīng)用存在一定的盲目性。為此，本試驗(yàn)以0～8周齡新?lián)P州雞為試驗(yàn)對(duì)象，探討日糧中核黃素添加水平對(duì)其免疫功能的影響，為實(shí)際生產(chǎn)中科學(xué)有效地使用核黃素提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與日糧組成 選用288只1日齡體重相近的健康新?lián)P州雛雞，隨機(jī)分成4組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。試驗(yàn)雞日糧中分別添加0（Ⅰ）、3.6（Ⅱ）、7.2（Ⅲ）、14.4 mg/kg（Ⅳ）4 個(gè)水平核黃素（飼料級(jí)，凈含量80%）。分0～4周齡和5～8周齡兩階段飼養(yǎng)。試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)雞分三層平養(yǎng)，常規(guī)飼養(yǎng)。自由采食和飲水。1日齡皮下注射馬立克HVT弱毒苗0.20 mL；7日齡雞新城疫Ⅳ系苗，點(diǎn)眼滴鼻各1滴進(jìn)行首免，14日齡復(fù)免一次。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法 分別在 14、21、28、35、42、49日齡和56日齡從各重復(fù)中隨機(jī)抽取公母雞各1只進(jìn)行采樣，先進(jìn)行宰前空腹稱(chēng)重，無(wú)菌采血，1 mL抗凝血供用白細(xì)胞總數(shù)和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，2 mL離心分離血清測(cè)定抗體水平，然后進(jìn)行屠宰試驗(yàn)。

1.3.1 免疫器官重量 宰殺后剖摘胸腺、脾臟和法氏囊，用濾紙吸去血，剔除脂肪后稱(chēng)重。

1.3.2 白細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù) 采用禽類(lèi)專(zhuān)用Ⅰ和Ⅱ液混合染色，顯微鏡下計(jì)數(shù)（葉應(yīng)嫵，1997；史言，1989）。

1.3.3 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù) 采用Wright-Giemsa混合染色法進(jìn)行白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)：取抗凝血1滴，于干凈載玻片上推片，自然干燥，用Wright-Giemsa混合染色法染色（劉志浩和宗英，2002；葉應(yīng)嫵，1997），計(jì)數(shù)200個(gè)白細(xì)胞，計(jì)算出淋巴細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的百分比。

1.3.4 新城疫抗體效價(jià)的測(cè)定 采用常規(guī)的血凝和血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 數(shù)據(jù)處理 用SPSS 12.0軟件進(jìn)行單因子方差分析。若差異顯著再用LSD法進(jìn)行均數(shù)間多重比較，試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧核黃素添加水平對(duì)家禽免疫器官重量的影響 由表2可知，在0～56日齡內(nèi)，新?lián)P州雞的胸腺、脾臟和法氏囊三者重量均隨日糧核黃素添加量增加呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)，但核黃素的影響效果各不相同。與對(duì)照組相比35、49日齡和56日齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅳ組新?lián)P州雞胸腺重量差異顯著（P﹤0.05）；21、35、42 日齡和 49 日齡時(shí)新?lián)P州雞脾臟重量差異顯著（P﹤0.05），28日齡和56日齡時(shí)差異均極顯著（P﹤0.01）。21日齡時(shí)試驗(yàn)Ⅲ組新?lián)P州雞脾臟重量與對(duì)照組相比差異顯著（P﹤0.05）；35日齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅳ組新?lián)P州雞法氏囊重量與對(duì)照組相比差異顯著（P﹤0.05），而14日齡時(shí)試驗(yàn)Ⅳ組新?lián)P州雞法氏囊重量與對(duì)照組相比差異極顯著（P﹤0.01），其他處理組間差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 日糧核黃素添加水平對(duì)新?lián)P州雞胸腺、脾臟和法氏囊重量的影響 g

2.2 日糧核黃素添加水平對(duì)家禽白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響 由表3可知，在0～56日齡內(nèi)，新?lián)P州仔雞外周血液白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞總數(shù)及其百分比均隨核黃素添加量增加呈遞增趨勢(shì)，但各處理組間差異均不顯著（P＞0.05）。這表明日糧中核黃素能促進(jìn)仔雞血液白細(xì)胞生成，且在一定程度上呈劑量依賴性關(guān)系。

2.3 日糧核黃素添加水平對(duì)家禽新城疫抗體效價(jià)的影響 由表4可知，在0～35日齡內(nèi)，隨著日齡增長(zhǎng)和核黃素添加量增多，血清新城疫疫苗抗體水平提高。試驗(yàn)Ⅳ組與對(duì)照組相比，49日齡時(shí)血清中新城疫抗體水平差異顯著（P＜0.05），而在 14、21、28、35、42 日齡和 56 日齡時(shí)差異均極顯著（P ＜ 0.01）；試驗(yàn)Ⅲ組與對(duì)照組相比，14、21、28、35、42日齡和56日齡時(shí)差異顯著（P＜0.05）；試驗(yàn)Ⅳ與Ⅱ相比，在14、21、35日齡和56日齡時(shí)新城疫抗體水平差異顯著（P＜0.05），而28日齡時(shí)差異極顯著（P＜0.01），其他處理組間差異均不顯著（P ＞ 0.05）。

表3 日糧核黃素添加水平對(duì)新?lián)P州雞白細(xì)胞總數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)的影響

表4 日糧核黃素水平對(duì)新?lián)P州仔雞血清新城疫抗體水平的影響 log2

3 討論

3.1 日糧核黃素添加水平對(duì)家禽免疫器官重量的影響 免疫器官重量增加是其自身細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和分裂所致。免疫器官重量增加意味著免疫系統(tǒng)成熟較快，機(jī)體免疫功能較強(qiáng)；胸腺、脾臟和法氏囊發(fā)育狀態(tài)在一定程度上反映禽類(lèi)全身免疫水平的高低。張建海等（2003）研究發(fā)現(xiàn)，添加不同水平核黃素能夠刺激49日齡仔雞脾臟和法氏囊發(fā)育，且脾臟相對(duì)重量明顯增加。本試驗(yàn)研究結(jié)果也表明，日糧核黃素添加量對(duì)0～56日齡新?lián)P州雞的胸腺、脾臟和法氏囊發(fā)育均有不同程度促進(jìn)作用。這可能是由于核黃素作為許多酶的輔助因子參與機(jī)體碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂肪代謝，促進(jìn)家禽包括胸腺、脾臟和法氏囊在內(nèi)各種器官發(fā)育的緣故。但是，王丹莉等（2003）報(bào)道，日糧中添加核黃素對(duì)熱應(yīng)激下42日齡和56日齡肉仔雞的胸腺、脾臟和法氏囊3種免疫器官相對(duì)重量影響均不顯著（P＞0.05）。這可能是高溫抑制免疫器官發(fā)育、變性和壞死或高溫加速體內(nèi)核黃素代謝及排泄速度，從而影響免疫器官發(fā)育的緣故。

3.2 日糧核黃素添加水平對(duì)家禽白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響 張建海等（2003）報(bào)道，核黃素能提高肉仔雞外周血液白細(xì)胞和異嗜細(xì)胞數(shù)量，但對(duì)白細(xì)胞總數(shù)影響不顯著（P＞0.05）。本次試驗(yàn)研究結(jié)果也表明，日糧核黃素水平能夠增加新?lián)P州仔雞外周血液白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)量及百分比，但各處理組間差異均不顯著（P＞0.05）。這可能是核黃素作為許多酶的輔助因子參與機(jī)體碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂肪代謝，為細(xì)胞生成提供了大量物質(zhì)基礎(chǔ)，促進(jìn)血液白細(xì)胞和各類(lèi)白細(xì)胞生成的緣故。

3.3 日糧核黃素水平對(duì)新城疫抗體水平的影響新城疫抗體水平是反映雞新城疫免疫狀況的指標(biāo)，也是反映機(jī)體特異性體液免疫功能的指標(biāo)。王丹莉等（2003）報(bào)道，添加 5.2、12.4、23、35 mg/kg和48 mg/kg核黃素可顯著提高熱應(yīng)激下肉仔雞56日齡血清新城疫抗體水平（P＜0.05）。本研究試驗(yàn)結(jié)果也表明，添加核黃素能提高新?lián)P州仔雞血清新城疫抗體水平，特別是7.2 mg/kg和14.4 mg/kg核黃素顯著或極顯著影響抗體水平，且能使抗體水平維持相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。研究表明，核黃素能促進(jìn)胸腺和法氏囊發(fā)育，而胸腺和法氏囊是家禽產(chǎn)生新城疫特異抗體的主要器官（Alam等，1997），因而日糧添加核黃素能夠提高新?lián)P州仔雞新城疫抗體水平。

4 小結(jié)

日糧中添加核黃素促進(jìn)家禽主要免疫器官（胸腺、脾臟和法氏囊）發(fā)育，增加血液中白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)量及其百分比，提高新城疫抗體水平。因此，日糧中添加適量核黃素能夠提高家禽的免疫功能。

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