楊 杰，孫 渤，王唯紅

(1.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250100;2.山東新華制藥股份有限公司，山東 淄博 255005)

吡哌酸(PPA)對(duì)革蘭陰性桿菌，如大腸桿菌、綠膿桿菌、克雷白桿菌等有較好的抗菌作用。與各種抗生素?zé)o交叉耐藥性。臨床主要用于敏感菌所致急性或慢性腎盂腎炎、尿路感染、膀胱炎、菌痢、中耳炎等。由于現(xiàn)行生產(chǎn)工藝中使用了甲醇、異丙醇、環(huán)己烷、DMF，按照《中國(guó)藥典》2010年版“附錄Ⅷ P殘留溶劑測(cè)定法”和 EP“5.4.RESIDUAL SOLVENTS”的要求，需要對(duì)以上溶劑殘留量進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器與測(cè)試條件

1.1 儀器 Agilent 6890N氣相色譜儀，配置FID檢測(cè)器;Agilent G1888頂空進(jìn)樣器。

1.2 色譜條件 色譜柱:DB －624(0.53mm ×30 m，3μm);柱溫:初始溫度50℃，保溫6min;以20℃·min－1升至220℃，保溫7.5min;進(jìn)樣口溫度:200℃;檢測(cè)器溫度:240℃;載氣:N2;流速:5mL·min－1;分流比:1∶1。

1.3 頂空進(jìn)樣器條件 平衡溫度:130℃;平衡時(shí)間:30min。

1.4 供試溶液 精稱樣品約0.1 g于20mL頂空瓶中，加入1.0mL DMSO，密封，使溶解，混合均勻。每批樣品制備2份。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液 配置無(wú)水甲醇0.3mg·mL－1、異丙醇0.5mg·mL－1，環(huán)己烷 0.39mg·mL－1，DMF 0.088mg·mL－1的DMSO溶液并取1.0mL于20mL頂空瓶中，密封，同法配制6份。

2 方法驗(yàn)證與結(jié)果

2.1 專屬性 樣品和溶劑空白(DMSO)對(duì)待測(cè)溶劑的測(cè)定無(wú)明顯干擾;標(biāo)準(zhǔn)溶液中出峰順序依次為甲醇、異丙醇、環(huán)己烷和DMF;甲醇、異丙醇、環(huán)己烷和DMF的保留時(shí)間依次為1.9min，2.9min，5.8min 和 10.0min(見(jiàn)圖 1 ～3)。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 配置無(wú)水甲醇0.3mg·mL－1、異丙醇 0.5mg·mL－1，環(huán)己烷 0.39mg·mL－1，DMF 0.088mg·mL－1的DMSO溶液并取1.0mL于20mL頂空瓶中，密封，混合均勻，同法配制6份。按照方法測(cè)試，結(jié)果見(jiàn)表1。

標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醇、異丙醇、環(huán)己烷和DMF相互之間的分離度依次為 6.4、13.8 和 22.9，均大于 3.0;它們的理論塔板數(shù)依次為3393，5467，7302 和190557。

2.3 精密度

2.3.1 重復(fù)性 標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，甲醇，異丙醇，環(huán)己烷和DMF峰面積的RSD依次為0.48%，0.24%，0.09%和0.56%，均小于10.0%。

表1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

圖1 標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

圖2 稀釋色譜圖

圖3 樣品色譜圖

2.3.2 中間精密度 由另一位化驗(yàn)員，同法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，甲醇、異丙醇、環(huán)己烷和DMF峰面積的RSD依次為0.73%，0.22%，0.25%和 1.3%，均小于 10.0%;且中間精密度項(xiàng)和重復(fù)性之間數(shù)據(jù)無(wú)顯著性差異。

2.4 線性及范圍 甲醇含量在29.4～3523.2 ppm的范圍時(shí)，它的線性方程為Y=11.7X+19.1，相關(guān)系數(shù)為0.9999;異丙醇含量在48.7～5844.6 ppm的范圍時(shí)，它的線性方程為Y=19.1X+29.7，相關(guān)系數(shù)為0.9999;環(huán)己烷含量在36.7～4404.6 ppm的范圍時(shí)，它的線性方程為Y=146.9X－209.1，相關(guān)系數(shù)為0.9998;DMF 含量在 8.9 ～1069.2 ppm的范圍時(shí)，它的線性方程為Y=3.1X+1.9，相關(guān)系數(shù)為0.9992。每個(gè)溶劑的相關(guān)系數(shù)均大于0.999。

2.5 準(zhǔn)確度 甲醇、異丙醇、環(huán)己烷和DMF的加樣回收率依次為 102.1%，101.1%，99.6% 和 103.8%;每個(gè)溶劑的回收率均介于90.0% ～110.0%之間。

2.6 檢測(cè)限及定量限 甲醇、異丙醇、環(huán)己烷和DMF的檢測(cè)限依次為 0.5 ppm，0.3 ppm，0.1 ppm 和 3 ppm，定量限依次為2 ppm，1 ppm，0.4 ppm 和8 ppm。

2.7 樣品檢測(cè) 隨機(jī)抽取3批樣品按照規(guī)定條件檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3批樣品殘留溶劑測(cè)定結(jié)果

2.8 總結(jié) PPA不易溶于水，所以選擇DMSO(二甲基亞砜)作為溶劑，使PPA能夠溶于所選擇的溶劑中，能夠準(zhǔn)確測(cè)定PPA原料中的溶劑殘留量。使用本方法條件測(cè)試甲醇、異丙醇、環(huán)己烷和DMF均能夠完全分離。本方法使用氣相色譜法，頂空進(jìn)樣方式，測(cè)定結(jié)果均符合《中國(guó)藥典》2010年版殘留溶劑測(cè)定時(shí)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得大于10%的要求。

通過(guò)以上驗(yàn)證，線性范圍、靈敏度、精密度等均滿足要求，可用于吡哌酸殘留溶劑的測(cè)定。

［1］盛龍生，何麗一，徐連連，等.藥物分析［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2003.

［2］陳尊慶.氣相色譜法與氣液平衡研究［M］.天津:天津大學(xué)出版社，1991.

［3］王國(guó)平.氣相色譜基礎(chǔ)［M］.北京:科學(xué)出版社，1986.