王君

（哈藥集團(tuán)中藥二廠，黑龍江 哈爾濱 150078）

仙靈骨葆顆粒是由淫羊藿、丹參、續(xù)斷、補(bǔ)骨脂、地黃、知母等中藥制成的復(fù)方制劑，具有溫腎壯陽、接骨續(xù)筋、強(qiáng)身健骨之功能。主要用于用于骨質(zhì)疏松和骨質(zhì)疏松癥，骨折，骨關(guān)節(jié)炎，骨無菌性壞死等疾病的治療[1～2]。本文采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以綜合指標(biāo)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察水加入量（A）、提取時(shí)間、提取次數(shù)三個(gè)因素對(duì)綜合指標(biāo)的影響，確定仙靈骨葆顆粒合理可行的水提取制備工藝條件。

1 儀器與試藥

Waters515泵；Waters 486檢測器；N2000色譜工作站。

淫羊藿苷對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所提供）；處方中所用藥材均符合中國藥典2005年版一部標(biāo)準(zhǔn)；甲醇為色譜純；水為重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本文主要研究仙靈骨葆顆粒水提取工藝研究部分，以淫羊藿苷和干膏收率相結(jié)合的綜合指標(biāo)作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過對(duì)水加入量（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）三個(gè)考察對(duì)象的研究，進(jìn)行正交試驗(yàn)優(yōu)化，篩選出最佳水提取工藝。

3 提取工藝的研究

3.1 提取方法

取淫羊藿、續(xù)斷、知母、補(bǔ)骨脂、地黃等五味藥材，按正交設(shè)計(jì)表的提取方法進(jìn)行試驗(yàn)，合并提取液，濃縮轉(zhuǎn)移至250ml量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，即得。

3.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)，選擇A、B、C三個(gè)因素作為考察因素，以淫羊藿苷和干膏收率相結(jié)合的綜合指標(biāo)為考察指標(biāo)，因素水平安排見表1。

3.2.1 干膏收率考察

精密量取上述9種溶液各10ml，分別置于已稱重的蒸發(fā)皿中，置于水浴鍋上蒸去大部分水分后，放入烘箱內(nèi)105℃干燥5小時(shí)，取出，放冷，迅速稱重并計(jì)算。

干膏收率（%）＝〔（W′×V）/（V′×W）〕×100%

上述式中：W′-干膏重

V′-量取藥液體積

V-定容體積

W-藥材重

表1 因素水平表

3.2.2 淫羊藿苷的含量測定[3]

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。色譜柱：Thermo C18（4.6mm×250nm,5um）；流動(dòng)相：甲醇-2.2%醋酸水溶液（57：43）為流動(dòng)相；檢測波長為270nm，流速1.0ml/min。柱溫：常溫。理論板數(shù)按淫羊萑苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。

（2）對(duì)照品溶液的制備。精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥24小時(shí)的淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液。

（3）供試品溶液的制備。精密量取上述溶液5ml，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加入70%乙醇至刻度，密塞，稱定重量，超聲處理1小時(shí)，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，即得供試品溶液。

（4）測定法。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。

（5）線性相關(guān)性試驗(yàn)。配制淫羊藿苷對(duì)照品溶液，濃度分別為0.0520mg/ml，0.104mg/ml，0.156mg/ml，0.312mg/ml，0.624mg/ml，分別精密吸取10ul進(jìn)樣，記錄色譜圖，測定其峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），淫羊藿苷濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程為：Y=22513863.2X+285107.6(Y，峰面積，X，濃度)，（r=0.9999）。

結(jié)果表明，在0.052mg/ml-0.624mg/ml濃度范圍內(nèi)，淫羊藿苷濃度與峰面積有良好的線性關(guān)系。

3.3 試驗(yàn)結(jié)果

正交試驗(yàn)結(jié)果見表3、方差分析表見表4。

綜合指標(biāo)＝干膏重/最大干膏重×40+淫羊藿苷含量/最大淫羊藿苷含量×60

結(jié)果表明：按綜合指標(biāo)考慮，對(duì)仙靈骨葆顆粒水提取工藝的影響程度為A＞B＞C，即加入水量＞煎煮時(shí)間＞煎煮次數(shù)。最佳水平為A3B3C3即處方藥材加14倍量水，提取3小時(shí)，提取3次。

3 討論

仙靈骨葆顆粒在仙靈骨葆片劑的基礎(chǔ)上改劑型而成，故在制備工藝研究中保持原有制法，即淫羊藿、續(xù)斷、補(bǔ)骨脂、地黃、知母等五味中藥材用水提取、濃縮成稠膏，丹參分成細(xì)粉混入稠膏內(nèi)制成軟材，再制粒、干燥整粒，即得。本試驗(yàn)研究通過對(duì)加入水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)的系統(tǒng)考察，細(xì)化了工藝參數(shù)，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)。同時(shí)，綜合指標(biāo)的引入，對(duì)于評(píng)價(jià)工藝的優(yōu)劣和質(zhì)量指標(biāo)的建立有重要的指導(dǎo)意義。

表2 淫羊藿苷濃度與峰面積的關(guān)系

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

表4 方差分析表

[1]石玉印.仙靈骨葆膠囊臨床驗(yàn)證總結(jié).世界中醫(yī)骨傷科雜志 2000；2（2）：18-21.

[2]周紅英，黃炳輝，等.133例骨質(zhì)疏松癥患者的治療方法研究.中國臨床醫(yī)藥研究雜志.2003；110：21-22.

[3]馬新飛，殷放宙，李林，等.HPLC測定仙靈骨葆片中淫羊藿苷的含量.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，25（10）：2194-2195.