宋 冰 張兆強

(湛江師范學(xué)院基礎(chǔ)教育學(xué)院，廣東 湛江 524037)

體內(nèi)雌激素水平下降是女性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松發(fā)生和發(fā)展的主要原因之一，用雌激素替代療法可有效阻止或延緩骨丟失，但其副作用仍為醫(yī)師和患者憂慮。運動作為一種副作用少而有效的防治骨質(zhì)疏松措施而逐漸被人們所重視。本文用去卵巢方法建立大鼠的骨質(zhì)疏松模型，研究運動和半量尼爾雌醇(CCE3)聯(lián)合應(yīng)用對去卵巢大鼠骨礦鹽含量的影響，為骨質(zhì)疏松防治措施的研究和降低雌激素的用量以減輕其副作用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物及設(shè)備 CCE3片劑(上海華聯(lián)制藥廠生產(chǎn))，2 mg/片。AE-240型電子分析天平(Mettler-Toledo儀器有限公司);SX 2-4-10型箱式電阻爐;YD-1型大鼠專用跑臺(廣東醫(yī)學(xué)院研制)。

1.2 實驗動物 4月齡SD雌性大鼠40只，體重(310.79±11.38)g，由廣東醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，用廣東省衛(wèi)生廳南海實驗動物中心生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)固體飼料飼養(yǎng)，自由攝食、飲水。各組大鼠照明、通風(fēng)、溫度、濕度等飼養(yǎng)環(huán)境條件相同。40只雌性SD大鼠隨機分成5組:正常對照組，假去卵巢組，去卵巢組，去卵巢+CCE3組，去卵巢+CCE3+運動組。每組8只。去卵巢+CCE3組大鼠和去卵巢+CCE3+運動組大鼠給予CCE3灌胃:根據(jù) CCE3在臨床上的常用量 50 mg·w－1·50 kg－1，大鼠為 1 mg·w－1·kg－1，本實驗用半量，即 0.5 mg·w－1·kg－1。用CCE3片劑研成粉末狀，加蒸餾水配成85 mg/L的溶液，按6 ml/kg(0.5 mg/kg)灌胃，于去卵巢手術(shù)后第 2天開始，1次/w，持續(xù)11 w。CCE3溶液于每次灌胃前配制，即配即灌。

1.3 去卵巢動物模型的建立 去卵巢組、去卵巢+CCE3組和去卵巢+CCE3+運動組大鼠用10 g/L戊巴比妥鈉溶液腹腔麻醉(3.0 ml/kg)，無菌條件下，經(jīng)腹部正中線切口，切除雙側(cè)卵巢。切下的卵巢經(jīng)組織學(xué)鑒定確認(rèn)。假去卵巢組大鼠的手術(shù)過程及操作與去卵巢組、去卵巢+CCE3組和去卵巢+CCE3+運動組相同，但不切除卵巢，只切除腹腔內(nèi)一小塊脂肪組織，經(jīng)組織學(xué)鑒定確認(rèn)。

1.4 動物運動訓(xùn)練 去卵巢+CCE3+運動組大鼠于術(shù)后第7天開始，置于YD-1型大鼠專用跑臺〔1〕進行運動訓(xùn)練，每周5 d，每日連續(xù)勻速跑45 min，16 m/min，跑道傾角0°，持續(xù)10 w。

1.5 標(biāo)本收集及測定 實驗后第11周末動脈放血處死動物，取左股骨，剝凈軟組織后置烤箱中于110℃溫度下烤48 h至恒重，于1/100 000分析天平上稱骨干重，稱干重后將其炭化，后在箱式電阻爐中700℃ 6 h使其灰化，用1/100 000分析天平稱灰重。主要觀察指標(biāo):各組大鼠體重、左股骨干重、左股骨干重/體重、左股骨灰重、左股骨灰重/體重、左股骨灰重占左股骨干重百分比。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)以x±s表示，多個均數(shù)間比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 去卵巢對大鼠骨礦鹽含量的影響 去卵巢組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，其骨干重、骨干重/體重、骨灰重、骨灰重/體重、骨灰重占骨干重百分比等指標(biāo)均明顯減少(P＜0.01)。假去卵巢組大鼠與正常對照組大鼠比較，各項指標(biāo)的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。說明手術(shù)本身對大鼠骨礦鹽代謝無顯著影響，去卵巢組大鼠與假去卵巢組大鼠各項指標(biāo)的差異是由于切除卵巢所引起的。見表1。

2.2 CCE3對去卵巢大鼠骨礦鹽含量的影響 去卵巢大鼠給予半量CCE3灌胃后，與去卵巢組比較，其骨干重的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。骨干重/體重、骨灰重、骨灰重/體重、骨灰重占骨干重百分比等指標(biāo)均較去卵巢組增加(P＜0.05或P＜0.01)。但上述各指標(biāo)仍低于假去卵巢組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

2.3 運動對CCE3抗去卵巢大鼠骨礦鹽丟失的影響 去卵巢+CCE3(半量)+運動組大鼠的骨干重、骨干重/體重、骨灰重、骨灰重/體重、骨灰重占骨干重百分比等指標(biāo)均高于去卵巢組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。而且與去卵巢+CCE3(半量)組大鼠比較，除骨灰重占骨干重百分比的差異無統(tǒng)計學(xué)意義外(P＞0.05)。其余指標(biāo)均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。說明運動與半量CCE3聯(lián)合應(yīng)用后，抗去卵巢大鼠骨礦鹽丟失的效應(yīng)明顯優(yōu)于單純使用半量CCE3。另外，與假去卵巢組比較，去卵巢+CCE3(半量)+運動組大鼠的骨干重、骨干重/體重、骨灰重、骨灰重/體重、骨灰重占骨干重百分比等指標(biāo)的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，說明運動與半量CCE3聯(lián)合應(yīng)用后，去卵巢大鼠丟失的骨礦鹽基本上得到了恢復(fù)。見表1。

表1 運動和尼爾雌醇對去卵巢大鼠骨礦鹽含量的影響(x ± s，n=8)

3 討論

去卵巢大鼠模型是一種高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松模型，已被公認(rèn)為“金標(biāo)準(zhǔn)”模型。本研究觀察到，去卵巢使大鼠骨干重、骨干重/體重、骨灰重、骨灰重/體重、骨灰重占骨干重百分比等指標(biāo)均明顯減少，說明切除雙側(cè)卵巢后，大鼠骨礦鹽含量顯著降低，骨量明顯丟失，這與女性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的表現(xiàn)極為相似，說明造模是成功的。

雌激素替代療法已成為臨床上治療骨質(zhì)疏松癥的有效措施之一，但基于雌激素對心血管系統(tǒng)及乳腺、子宮的毒副作用，在臨床使用中具有一定的局限性。CCE3作為一種長效雌激素，在體內(nèi)釋放緩慢，具有長效、強效和口服方便等優(yōu)點。CCE3能對抗去卵巢大鼠骨礦鹽的丟失〔2〕，增加圍絕經(jīng)期婦女的骨密度〔3〕，使絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松患者的骨密度增加，骨丟失減少〔4〕。CCE3通過促進大鼠骨組織中Ⅰ型膠原蛋白的合成、抑制其水解吸收，從而提高大鼠骨密度、改善骨質(zhì)量〔5〕。CCE3可抑制大鼠破骨細胞的形成和分化，抑制破骨細胞的骨吸收活性，促進破骨細胞凋亡〔6〕。CCE3的副作用雖然較少和較輕，但臨床研究表明，有10.9%的患者使用后出現(xiàn)陰道出血，9.09%的患者出現(xiàn)乳房脹痛或觸痛〔7〕。因此，如何將雌激素替代療法的副作用控制在最小范圍，是臨床上使用雌激素時必須考慮的問題。

運動能增加老年骨質(zhì)疏松患者腰椎和髖部的骨量，促進骨形成和抑制骨吸收〔8〕。運動訓(xùn)練可對抗由于去卵巢所致的大鼠骨礦鹽丟失〔9〕，骨元素 Ca、S、Mg、Zn、Co、Mn 的減少得到改善〔10〕，腰椎骨密度增加〔11〕，提高骨的生物力學(xué)性能〔12〕。

本研究說明運動與半量CCE3聯(lián)合應(yīng)用后，去卵巢大鼠丟失的骨礦鹽得到了恢復(fù)，并且基本恢復(fù)到對照組水平?？梢姡\動對CCE3抗去卵巢大鼠骨礦鹽丟失的效應(yīng)有加強作用。臨床上用CCE3治療骨質(zhì)疏松癥時，可考慮聯(lián)合應(yīng)用適量運動，既能保證臨床療效，又能降低其用量，以減輕其副作用。

1 馮有輝，張兆強，劉錫儀，等.YD-1型大鼠跑臺的設(shè)計與應(yīng)用〔J〕.廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2002;20(2):163.

2 張兆強，劉浩宇，劉錫儀.尼爾雌醇對去卵巢大鼠骨礦鹽代謝的影響〔J〕.中國臨床康復(fù)，2004;8(2):282-3.

3 齊紹霞.小劑量雌激素預(yù)防圍絕經(jīng)期骨質(zhì)疏松癥的臨床觀察〔J〕.中國骨質(zhì)疏松雜志，2008;14(7):517-8.

4 廖二元，鄧小戈，周智廣，等.尼爾雌醇加孕激素治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的研究〔J〕.中華內(nèi)分泌代謝雜志，2002;18(2):95-8.

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9 張兆強，劉浩寧，劉錫儀.運動對大鼠骨礦鹽含量的影響〔J〕.中國臨床康復(fù)，2005;9(43):136-7.

10 張兆強，劉浩宇，劉錫儀.運動對去卵巢大鼠骨元素代謝的影響〔J〕.廣東微量元素科學(xué)，2002;9(11):29-32.

11 黃澤鋒，常 祺.去勢大鼠腰椎骨密度及血清生化指標(biāo)改變及運動訓(xùn)練的干預(yù)〔J〕.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2007;11(23):4520-2.

12 章曉霜，許豪文，趙衛(wèi)東.不同強度運動和雌激素聯(lián)合作用對去卵巢大鼠骨骼生物力學(xué)性能的影響〔J〕.中國運動醫(yī)學(xué)雜志，2006;25(2):187-91.